湖南省研究生科研创新项目(CX2009B111)
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
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- 相关机构：国防科学技术大学湖南师范大学更多>>
- 发文基金：教育部“新世纪优秀人才支持计划”湖南省研究生科研创新项目湖南省自然科学基金更多>>
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- 敬钊毒素-XI与突变体R3A-JZTX-XI的合成、复性及其药理活性鉴定
- 2011年
- 表达于β-胰岛细胞上的Kv2.1钾通道电流负责动作电位的复极化,从而调节胰岛素的分泌,是治疗2型糖尿病的有效作用靶点。敬钊毒素-XI(JZTX-XI)是从敬钊缨毛蛛Chilobrachys jingzhao粗毒中分离纯化到的一种新型的肽类神经毒素,能够抑制非洲爪蟾卵母细胞上表达的Kv2.1钾通道电流。为了研究JZTX-XI的结构与功能关系,用芴甲氧羰基(Fomc)固相多肽合成方法合成了野生型JZTX-XI和突变体R3A-JZTX-XI,结合反相HPLC和质谱对不同条件下的氧化复性结果进行检测,从而得到合成多肽的最佳氧化复性条件。复性产物经质谱测定其相对分子质量与理论分子质量相符。复性JZTX-XI与天然毒素等量混合后用高效液相色谱分析也只得到单一峰。膜片钳电生理活性分析结果显示,JZTX-XI对瞬时表达于HEK293T细胞的钾通道亚型hKv2.1和钠通道亚型hNav1.5电流具有非常强的抑制作用,其半数有效抑制浓度(IC50)分别为95.8 nmol/L和437.1 nmol/L。当第3位Arg被Ala取代后,突变体R3A-JZTX-XI对同样表达的hKv2.1和hNav1.5通道电流的IC50值分别为1.22μmol/L和1.96μmol/L。以上实验结果表明突变体R3A-JZTX-XI对hKv2.1和hNav1.5通道的抑制活性分别比天然JZTX-XI降低了12.7倍和4.5倍,说明第3位的Arg残基既是负责JZTX-XI与hKv2.1通道相互作用的关键活性残基,也是与hNav1.5通道活性相关的氨基酸残基。目前的研究结果对研发胰脏钾通道Kv2.1的分子探针和以Kv2.1通道为靶点的药物设计具有借鉴作用。
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- 关键词：固相多肽合成氧化复性
