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广西壮族自治区自然科学基金(2010GXNSFA013090)

作品数:6 被引量:52H指数:3
相关作者:谢志勤谢丽基庞耀珊谢芝勋邓显文更多>>
相关机构:广西兽医研究所广西大学更多>>
发文基金:广西壮族自治区自然科学基金广西壮族自治区科技攻关计划广西特聘专家专项经费资助项目更多>>
相关领域:农业科学生物学更多>>

文献类型

  • 6篇中文期刊文章

领域

  • 6篇农业科学
  • 1篇生物学

主题

  • 5篇禽腺病毒
  • 5篇病毒
  • 3篇蛋白
  • 2篇原核表达
  • 2篇基因
  • 2篇PENTON
  • 2篇ELISA
  • 1篇片段
  • 1篇主要抗原区
  • 1篇克隆
  • 1篇基因片段
  • 1篇间接ELIS...
  • 1篇NTO
  • 1篇PE
  • 1篇ESTABL...
  • 1篇GROUP
  • 1篇HEXON

机构

  • 5篇广西兽医研究...
  • 1篇广西大学

作者

  • 5篇刘加波
  • 5篇罗思思
  • 5篇邓显文
  • 5篇谢芝勋
  • 5篇庞耀珊
  • 5篇谢丽基
  • 5篇谢志勤
  • 4篇范晴
  • 4篇彭宜

传媒

  • 1篇中国家禽
  • 1篇畜牧与兽医
  • 1篇西北农业学报
  • 1篇广东农业科学
  • 1篇基因组学与应...
  • 1篇Animal...

年份

  • 5篇2012
  • 1篇2011
6 条 记 录,以下是 1-6
排序方式:
Ⅰ群禽腺病毒33K基因的原核表达与鉴定被引量:1
2012年
33K蛋白是Ⅰ群禽腺病毒(fowl adenovirus groupⅠ,FAVⅠ)的非结构蛋白,在感染的过程中起重要作用。为了构建原核表达载体pGEX-33K作为诊断抗原,本研究根据GenBank中FAVⅠ33K基因序列,设计1对特异性引物。用PCR方法扩增目的片段,将其克隆至原核表达载体pGEX-4T-1,构建了重组质粒pGEX-33K。将其转化大肠杆菌感受态细胞DH5α,经IPTG诱导和SDS-PAGE分析,pGEX-33K表达的分子量为36.7KD,表达产物主要以可溶性的形式存在于菌体中;最佳IPTG诱导浓度为0.75mmol/L,最佳诱导时间为4h;经Western Blot鉴定,pGEX-33K重组蛋白可与FAVⅠ阳性血清发生特异性反应,为FAVⅠ抗体ELISA鉴别诊断试剂盒的研究奠定基础。
罗思思谢芝勋刘加波谢丽基庞耀珊邓显文谢志勤范晴彭宜
关键词:原核表达
Ⅰ群禽腺病毒分离鉴定及hexon基因的序列分析被引量:26
2012年
为调查禽腺病毒的感染状况,2008—2010年从广西南宁市活禽市场采集样品259份,通过SPF鸡胚传代增殖,经PCR鉴定,92份为禽腺病毒阳性,阳性率为35.5%(92/259)。选取不同年份的8株进行免疫琼脂扩散、血凝性、致细胞病变、形态学和鸡胚致病性试验。结果:8株均与Ⅰ群禽腺病毒阳性血清反应,不能凝集鸡红细胞,病毒粒子具有腺病毒典型特征,可致鸡胚肝细胞变圆、折光性增强,使鸡胚发育不良。将克隆的8株hexon基因进行序列比对及遗传进化分析,显示均与Ⅰ群禽腺病毒同源性最高,亲缘关系最近。结果表明,8株分离株均为Ⅰ群禽腺病毒。
罗思思谢芝勋邓显文刘加波庞耀珊谢志勤谢丽基彭宜范晴
关键词:HEXON
Establishment of Indirect ELISA Method for Detection of Penton Protein of Fowl Adenovirus GroupⅠ
2012年
[ Objective] To establish an indirect ELISA method which can detect fowl adenovirus group I (FAVI) antibody easily and rapidly. [ Method] The expressed and purified FAVI penton recombinant protein was used to be an antigen, optimized the reaction conditions, and then estab- lished the FAVI indirect penton-ELISA antibody detection method. [ Result] The optimal coating concentration of antigen was 1.5 μg/hole, the opti- mal coating condition was 37℃ 2 h and 4 ℃ overnight; the optimal dilution of serum was 1:100; the optimal working concentration of anti-chicken IgG-HRP was 1:2 000; the positive and negative critical value of ELISA was 0.335. Detected the 100 chicken serum samples by the established penton-ELISA method, the positive rate was 41%. [ Conclusion] Through the study, ~e established penton-ELISA method has a good specificity, sensitivity and reproducibility. And it offers an effective tool for the diagnosis of FAVI, the survey of antibody and epidemiology survey.
LUO Si-siXIE Zhi-xunXIE Zhi-qinLIU Jia-boPANG Yao-shanDENG Xian-wenXIE Li-jiFAN Qing
关键词:PENTONELISA
Ⅰ群禽腺病毒五邻体蛋白间接ELISA检测方法的建立被引量:11
2012年
为建立一种简便、快速检测Ⅰ群禽腺病毒(FAVI)抗体的间接ELISA方法,以表达和纯化的FAVI五邻体重组蛋白作为抗原,优化反应条件,建立了FAVI间接penton-ELISA抗体检测的方法。抗原最佳包被浓度为1.5μg/孔,最适包被条件为37℃,2h后4℃过夜;血清最佳稀释度为1∶100;酶标二抗的最佳工作浓度为1∶2000;ELISA阴、阳性临界值为0.335。用penton-ELISA方法检测100份鸡血清样品,阳性率为41%。
罗思思谢芝勋谢志勤刘加波庞耀珊邓显文谢丽基范晴
关键词:ELISA
Ⅰ群禽腺病毒100K蛋白主要抗原区基因片段的表达及鉴定被引量:3
2012年
利用PCR技术对Ⅰ群禽腺病毒(FAVⅠ)100K蛋白主要抗原区片段进行扩增,得到约1062bp的基因片段;将其克隆到原核表达载体pGEX-4T-1,经测序及序列分析确证其正确插入到表达载体,成功构建重组表达载体pGEX-100K。重组质粒转化大肠杆菌DH5α,用IPTG诱导表达,对表达的蛋白用SDS-PAGE电泳和Western-blot分析。结果表明,100K蛋白主要抗原区基因片段得到良好的表达,表达的蛋白以可溶形式存在,分子质量约为64.5ku,与预测值相符;表达的100K蛋白与FAVⅠ阳性血清发生特异性结合,具有良好的反应原性,为FAVⅠ诊断试剂盒的研制奠定基础。
罗思思谢芝勋刘加波谢丽基庞耀珊邓显文谢志勤范晴彭宜
Ⅰ群禽腺病毒五邻体基因的克隆及原核表达被引量:17
2011年
根据GenBank中I群禽腺病毒(AAV)基因组序列,设计了1对特异性引物。以CELO毒株基因组DNA为模板,通过PCR扩增出结构蛋白五邻体基因(penton),将其克隆到原核表达载体pGEX-4T-1的EcoR I和Xho I位点,构建了原核表达载体pGEX-penton。将其转化到感受态细胞DH5α中,经IPTG诱导,SDS-PAGE分析,获得了45.9 ku的融合蛋白。用不同的IPTG浓度和时间诱导表达,得出诱导的最佳IPTG浓度为1.5 mmol/L,最佳时间为4 h。用尿素提取包涵体表达产物,得到penton纯化蛋白,浓度为2.98 mg/mL。经Western-bolt分析,该蛋白具有良好的反应原性。
罗思思谢芝勋邓显文刘加波庞耀珊谢志勤谢丽基彭宜
关键词:克隆PENTON原核表达
共1页<1>
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