中国博士后科学基金(2005038187)
- 作品数：6 被引量：11H指数：2
- 相关作者：霍霞张宝徐锡金齐宗利彭琳更多>>
- 相关机构：汕头大学南方医科大学更多>>
- 发文基金：中国博士后科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生文化科学更多>>
- FUS1基因慢病毒载体的构建被引量：1
- 2008年
- 目的:构建FUS1基因慢病毒载体,包装病毒,体外高效感染细胞。方法:采用PCR技术从人脐带来源的间充质干细胞中扩增出FUS1基因,并将其接入慢病毒载体pSL6-IRES-EGFP中,经PCR、酶切和测序鉴定后,与包装质粒共转染293T细胞,制备慢病毒。将病毒转染BEL7404和DLD-1细胞,观察病毒转染效果。结果:经过PCR测序鉴定,克隆了pSL6-FUS1-IRES-EGFP重组子;所包装的病毒对细胞的感染效率>90%。结论:成功地克隆FUS1基因于慢病毒载体,制备了高效感染细胞的慢病毒。
- 张宝霍霞彭琳齐宗利徐锡金李燕郑良楷丘波
- 关键词：慢病毒属转染
- LipofectAMINE2000与Fugene6转染细胞的效率比较被引量：4
- 2007年
- 目的:比较LipofectAMINE2000与Fugene6转染细胞的效果。方法:将含有Firefly和Renilla荧光素酶基因的质粒分别用LipofectAMINE2000和Fugene6转染293T、HepG2和DLD-1细胞,于48h后裂解细胞测定荧光素酶活性。结果:在293T细胞中,LipofectAMINE2000转染组的萤火虫(Firefly)和Renilla荧光素酶活性分别是Fugene6转染组的6.5和5.6倍(P<0.005);在HepG2细胞中,LipofectAMINE2000转染组的Firefly和Renilla荧光素酶活性分别是Fugene6转染组的44和49倍(P<0.001);而在DLD-1细胞中,两者无差别。结论:转染试剂LipofectAMINE2000和Fugene6对不同细胞的转染效果存在差异,当进行转染实验时,对于不同的细胞须根据情况进行选择。
- 张宝霍霞徐锡金齐宗利郑谨彭琳
- 关键词：转染
- 分子生物学实验教学的体会被引量：4
- 2007年
- 以分子生物学为代表的生命科学,已成为21世纪的前沿学科之一,其基本理论已渗透到生物学的各个领域,并且促进了许多学科的兴起和发展,同时许多学科需要这门技术对生命科学加以深入研究。随着现代信息技术的飞速发展,尤其是网络技术的发展,学生获得知识的途径增多;另外,社会实践对学生技术能力的要求也在不断提高。因此出现了这样一种现象：本科生教育研究生化。
- 张宝
- 关键词：分子生物学教学探讨
- CYP3A4基因原核表达质粒构建与诱导表达被引量：2
- 2007年
- 以质粒pCWNF14为模板,采用PCR技术扩增出CYP3A4基因,并将其接入pET-22b(+)、pET-28b(+)和pET-32a(+)载体中,经PCR测序鉴定后,转化Rosetta(DE3)2pLysS细菌,并用IPTG诱导表达.采用考马斯亮蓝染色的方法检测重组蛋白表达,3个表达重组质粒中,只有pET-32a(+)-CYP3A4可以表达目的蛋白;在低浓度IPTG(50μmol/L)诱导6h,所表达的CYP3A4蛋白约占细菌总蛋白的40%,且该蛋白不溶于8mol/L的尿素,而溶于去污剂10mmol/L3-((3-Cholamidopropyl)dimethylammonio propanesulfonic acid(CHAPS))和0.3%lauroyl sarcosine(SKL).成功地使CYP3A4基因在原核系统中高效表达.
- 张宝霍霞齐宗利徐锡金李燕林懿彭琳
- 关键词：CYP3A4
- CYP2 B6基因表达质粒的构建及在大肠杆菌中的表达
- 2007年
- 目的:构建CYP2 B6基因原核表达质粒,在大肠杆菌[Rosetta2(DE3)pLysS]中高效表达重组蛋白。方法:以质粒为模板,用PCR技术扩增出CYP2 B6基因,并将其分别插入pET-22b(+)、pET-28b(+)和pET-32a(+)质粒中,经PCR、测序鉴定后,转化Rosetta2(DE3)pLysS,并用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。结果:经PCR、测序鉴定,构建了CYP2 B6基因表达质粒;采用考马斯亮蓝染色法检测重组蛋白表达,pET-22b(+)-CYP2 B6未见目的蛋白表达;pET-28b(+)-CYP2 B6有目的蛋白表达,约占蛋白总量的5%;而pET-32a(+)-CYP2 B6可以高效地表达CYP2 B6,在低浓度(50μmol/L)IPTG诱导3 h后,所表达的CYP2 B6蛋白约占细菌总蛋白的30%;质谱分析结果进一步证实所表达的蛋白为CYP2 B6。结论:成功地使CYP2 B6基因在原核系统中高效表达。
- 张宝霍霞徐锡金齐宗利郑谨彭琳
- 关键词：CYP2B6大肠杆菌
- FUS1基因原核表达质粒构建与诱导表达
- 2007年
- 目的构建FUS1基因原核表达质粒,在大肠杆菌[Rosetta(DE3)2plys]中高效表达重组蛋白。方法采用PCR技术从人脐带来源的间充质干细胞中扩增出FUS1基因,并将其接入pET-32a(+),经PCR、测序鉴定后,转化Rosetta(DE3)2plys细菌,并用IPTG诱导表达。结果经过PCR、测序鉴定,克隆了pET32a(+)-FUS1重组子;在低浓度IPTG(25μmol/L)诱导3h,RosettaDE3可以高效地表达重组蛋白,约占细菌总蛋白的40%。结论成功地克隆到FUS1基因,并使其在原核系统中高效表达。
- 张宝霍霞彭琳齐宗利徐锡金李燕丘波郑良楷
- 关键词：基因表达原核表达质粒
