目的探讨BMSCs移植治疗兔股骨头坏死(osteonecrosis of the femoral head,ONFH)后细胞在体内的存活情况及坏死股骨头内新骨形成情况。方法4～5月龄新西兰大白兔49只,雌性48只,雄性1只,体重2.0～2.5kg。取兔股骨及胫骨内骨髓,采用密度梯度离心法行BMSCs分离培养并传代。取第3代细胞行1,1’-双十八烷-3,3,3’,3’-四甲基吲哚羰花青-高氯酸盐(1,1’-dioctadecyl-3,3,3’,3’-tetramethylindocarbocyanine perchlorate,DiI)荧光标记,制备浓度为2.5×108个/mL细胞悬液。采用局部液氮注射冷冻法制备兔右侧ONFH模型。将雌兔随机分为3组,每组16只,A组单纯造模为对照,B组造模后注射自体DiI荧光标记BMSCs悬液4μL,C组造模后注射雄兔异体DiI荧光标记BMSCs悬液4μL。术后2、4、6、8周各组分别处死4只动物,行双侧股骨头X线观察,取股骨头标本行HE染色及Masson染色,测定新生骨小梁在股骨头所占的体积百分比。取心脏、肺、肝、脾、肾组织及股骨头标本组织,荧光显微镜下观察各组织中DiI荧光标记细胞的表达,PCR检测各组织中Y染色性别决定基因(sex determining region of the Y,Sry)的表达。结果术后动物均存活至实验完成。X线片示A组股骨头随时间延长逐渐出现骨坏死;B、C组股骨头骨密度逐渐增加,未出现骨坏死。组织学观察示B、C组随时间延长骨组织修复明显,A组无明显变化。各时间点B、C组新生骨小梁占股骨头体积百分比均高于A组,比较差异均有统计学意义(P<0.01),B、C组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。术后各时间点B、C组心脏、肺、肝、脾、肾组织均未见DiI荧光标记细胞。PCR结果显示,3组各时间点心脏、肺、肝、脾、肾组织中均未见Sry基因表达;C组各时间点股骨头标本可见Sry基因的表达,A、B组未见。结论异体BMSCs移植后细胞可在股骨头局部存活并诱导新骨形成,并未见体内其他组织中再分布。
