国家自然科学基金(81171173)
- 作品数：18 被引量：71H指数：4
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- 直接贴壁法体外分离培养大鼠骨髓内皮祖细胞被引量：2
- 2016年
- 取90gSPF级SD大鼠的双后肢骨髓,分别使用直接贴壁法和密度梯度离心法获得大鼠骨髓单个核细胞,用内皮培养体系EGM-2培养基进行定向诱导分化7~14d获得大鼠内皮祖细胞。免疫荧光染色和细胞功能学鉴定内皮祖细胞,观察内皮祖细胞出现的时间和数量,CCK-8法鉴定细胞的增殖能力。与密度梯度离心法相比,直接贴壁法在内皮祖细胞出现的时间、数量和增殖能力差异有统计学意义（P〈0.01）。因此,相对于密度梯度离心法,直接贴壁法培养出的内皮祖细胞分化时间更短、数量更多且增殖能力更强。
- 方晓王康康高维陆张辉尹宗生
- 关键词：内皮祖细胞骨髓密度梯度离心法
- 促红细胞生成素对脊髓源性神经干细胞分化能力的影响被引量：4
- 2016年
- 目的探讨成体大鼠脊髓源性神经干细胞(NSCs)在促红细胞生成素(EPO)的作用下体外分化的形态学表现,为成体脊髓源性NSCs移植治疗脊髓损伤提供理论基础。方法利用无血清悬浮培养,体外分离培养SD大鼠脊髓源性NSCs,随后以含血清培养基贴壁诱导分化培养7 d,行免疫细胞化学染色,以抗巢蛋白(Nestin)鉴定NSCs,以抗微管相关蛋白2(MAP2)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫荧光染色检测NSCs的分化情况。选取第3代NSCs,向培养基中添加EPO,使EPO的终浓度为10 IU/ml,并设不添加EPO的对照组,免疫荧光共聚焦显微镜下分别观察并计数各组神经元/细胞总数得出百分率。结果 SD大鼠脊髓组织体外悬浮培养可获得大量神经球,所获得的神经球均表达Nestin蛋白,以含血清培养基贴壁诱导分化培养,可检测出MAP2和GFAP阳性细胞;EPO组诱导分化后,表达MAP2阳性细胞较对照组显著提高(P<0.05)。结论 SD大鼠脊髓体外培养可获得NSCs,EPO可促进成体脊髓源性NSCs向神经元方向分化。
- 李小波张辉王少滨刘杰余涛杜怡斌尹宗生
- 关键词：神经干细胞促红细胞生成素神经元分化
- 血管内皮祖细胞在脊髓损伤修复中的研究进展被引量：5
- 2013年
- 脊髓损伤（SCI）是骨科临床工作中一种常见损伤，死亡率和致残性高，其发病率呈逐年上升趋势，给社会和家庭造成沉重负担。可是SCI的治疗至今仍缺乏有效措施，损伤后神经功能的恢复是国内外医学界的一个难题。
- 杜公文杜怡斌张辉尹宗生
- 关键词：内皮祖细胞神经干细胞脊髓损伤
- 富白细胞和血小板纤维蛋白凝胶对BMSCs在兔股骨头缺血性坏死中成骨作用的影响被引量：1
- 2017年
- 目的观察富白细胞和血小板纤维蛋白凝胶(L-PRF)联合骨髓间充质干细胞(BMSCs)在兔股骨头缺血性坏死(ANFH)试验中对成骨作用的影响。方法48只新西兰白兔随机分为A、B、C、D 4组(各组12只),均造双侧ANFH模型。后给予ANFH修复方法:A组单纯行髓芯减压;B组行髓芯减压联合L-PRF凝胶移植;C组行髓芯减压联合BM-SCs移植;D组行髓芯减压联合BMSCs和L-PRF凝胶移植。A、B、C、D组于术后4、8、12周摄X片后,每组随机选取4只行相关组织学检查、新生骨体积分数、新生血管计数、X射线评分。结果各组股骨头坏死中呈现不同程度的新骨形成。C、D组新骨的体积分数,血管计数及X射线评分较A、B组差异显著,其中D组比其余各组均高,B组强于A组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论L-PRF凝胶在医治兔AN-FH模型中对BMSCs成骨有促进作用,并拟使用L-PRF凝胶和BMSCs兼并髓芯减压治疗ANFH提供理论指导。
- 方晟方家刘方晓王康康尹宗生
- 关键词：股骨头缺血性坏死髓芯减压富血小板纤维蛋白
- Wnt3a基因沉默对内皮祖细胞增殖的影响被引量：1
- 2015年
- 目的探讨wnt3a基因沉默对内皮祖细胞(EPCs)增殖的影响。方法体外分离、培养及鉴定EPCs。将沉默型p EGFP-shRNA-wnt3a重组质粒转染EPCs;Western blot法分析wnt3a在EPCs中的表达变化;MTT分析wnt3a沉默对EPCs增殖的影响。结果鉴定培养的细胞为EPCs;Western blot法结果提示p EGFP-shRNA-wnt3a转染EPCs后明显抑制了wnt3a蛋白的表达。MTT提示沉默型pEGFP-shRNAwnt3a转染组吸光度值明显低于空白对照组。结论成功分离、培养出EPCs,wnt3a有效沉默明显抑制EPCs的增殖,为进一步的实验提供了基础。
- 余涛杜怡斌杜公文张辉张硕方家刘高维陆尹宗生
- 关键词：内皮祖细胞WNT3A基因沉默基因转染细胞增殖
- EPO/EPOR信号通路对成体脊髓神经干细胞分化作用的实验研究被引量：1
- 2016年
- 目的研究促红细胞生成素(EPO)及其受体(EPOR)信号通路对大鼠成体脊髓神经干细胞(NSCs)分化的影响。方法取成年SD大鼠脊髓细胞,在培养基DMEM/F12中进行培养,取第3代NSCs作为研究对象:在实验组的培养液中再加入重组人促红细胞生成素(rhE PO),同时在培养液中使用等体积生理盐水作为对照组。采用免疫荧光染色方法和Western blot法,检测NSCs上EPOR蛋白表达情况;采用免疫荧光染色法检测NSCs的分化现象。结果免疫荧光染色结果显示实验组与对照组NSCs中均有EPOR蛋白表达,实验组较对照组增强;Western blot结果显示实验组EPOR蛋白表达水平较对照组增高,差异有统计学意义(P<0.01);免疫荧光染色法显示实验组NSCs分化为神经元的比例高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论rhEPO能激活EPO/EPOR信号通路,从而提高成体脊髓NSCs向神经元分化的能力。
- 王少滨张辉李小波刘杰杜怡斌尹宗生
- 关键词：神经干细胞分化促红细胞生成素受体
- 大鼠外周血内皮祖细胞分离培养与鉴定被引量：1
- 2017年
- 目的获得大鼠外周血内皮祖细胞(EPCs)并进行鉴定。方法首先采用密度梯度离心法获得大鼠外周血单个核细胞,然后用EGM-2完全培养基体外培养条件下诱导单个核细胞分化为靶标细胞,最后分别用EPCs特异性标记物CD133和Flk-1检测及内吞乙酰低密度脂蛋白(ac-LDL)和荆豆凝集素-1(UEA-1)的能力,识别和鉴定靶标细胞。结果靶标细胞培养至第6天呈纺锤形,梭状排列,具有与典型EPCs形态一致的生物学特征,CD133及FLK-1双抗体荧光检测结果阳性,内吞ac-LDL及UEA-1的能力实验结果阳性,证明该纺锤形细胞为EPCs。结论通过密度梯度离心法及多细胞因子诱导大鼠外周血单个核细胞获得EPCs的方法可行,该方法可为EPCs的基础研究及临床应用提供理论与实验方法学基础。
- 杜公文高维陆张辉尹宗生
- 关键词：内皮祖细胞细胞分离细胞培养细胞鉴定
- IGF-1对兔脂肪干细胞增殖和成骨分化的影响被引量：3
- 2019年
- 目的探讨胰岛素样生长因子(IGF-1)对兔脂肪干细胞(ADSCs)增殖和成骨分化的影响。方法无菌条件下从兔颈后部取出脂肪组织,I型胶原酶消化法将ADSCs从脂肪组织中分离,观察细胞生长。采用免疫荧光法检测ADSCs表面特异性标志物CD90&P3代ADSCs在成脂和成骨诱导培养液的诱导下向成脂和成骨方向分化,油红0、茜素红染色定性鉴定。在成骨诱导培养基中加入IGF-1,设置培养基IGF-1浓度为0、5、10、20 ng/mi四组,观察不同浓度IGF-1对ADSCs增殖活性、碱性磷酸酶(ALP)和钙离子含量的影响。CCK-8法检测各组ADSCs的增殖活性,茜素红染色定性检测各组ADSCs的成骨分化能力;通过测定ALP和钙离子含量定量检测各组ADSCs成骨分化能力。结果原代及传代的兔ADSCs均呈长梭形或成纤维细胞样外观,生长分化活跃。免疫荧光检测ADSCs高度表达表面特异蛋白CD90,培养的细胞具有成骨分化和成脂分化的能力&IGF-1可以促进ADSCs增殖活性和提高ADSCs的ALP、钙离子含量&IGFV浓度越高,ADSCs增殖活性和ALP、钙离子含量越高&结论IGF-1可以促进兔ADSCs的增殖与成骨分化.
- 朱思斌张雪江飞许易诚尹宗生
- 关键词：脂肪干细胞成骨分化
- 骨髓源性EPCs对脊髓源性NSCs增殖分化的影响被引量：4
- 2015年
- 目的观察骨髓源性内皮祖细胞(EPCs)对脊髓源性神经干细胞(NSCs)增殖分化的影响。方法通过密度梯度离心法获取骨髓血单个核细胞,以EBM-2进行诱导培养EPCs并进行免疫细胞化学染色鉴定,成熟的方法获取及鉴定SD大鼠的脊髓NSCs,1×105/ml第3代NSCs置于Transwell小室下层与1×105/ml上层原代EPCs进行体外1∶1共培养,以单纯第3代的NSCs培养为对照,培养7 d,双盲法分别计数各组在相差显微镜下神经球形成的数目,并用目镜测微尺测量神经球的平均直径,通过5%血清诱导培养NSCs7 d后,行β-微管蛋白-Ⅲ免疫荧光染色,Hoechst细胞核染色后在显微镜下计算神经元/细胞总数得出百分率。结果骨髓源性EPCs与脊髓源性NSCs共培养组神经球平均数目为(22.27±3.85)个,平均直径为(61.70±7.21)μm,诱导培养后分化为神经元的平均百分率为(46.10±3.70)%,与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.01)。结论骨髓源性EPCs能促进脊髓源性NSCs增殖及其向神经元分化。
- 张硕杜怡斌杜公文张辉余涛方家刘高维陆尹宗生
- 关键词：NSCSEPCS增殖分化微环境
- 神经根沉降征在腰椎管狭窄和腰椎间盘突出症中的差异被引量：3
- 2016年
- 目的研究神经根沉降征在腰椎管狭窄症(LSS)和腰椎间盘突出症(LDH)中的差异。方法选取2013年4月至2015年4月安徽医科大学第一附属医院骨科住院患者183例,其中LSS患者63例,包括中央型LSS组50例,侧隐窝型LSS组13例,LDH组120例。术前采用日本骨科协会评分(JOA评分)、视觉模拟评分(VAS评分)、腰痛评分标准(ODI)功能障碍指数及步行负荷实验评价两组患者临床表现,并记录所有患者在MRI扫描中最小硬膜囊横截面积(CSA)。比较3组患者MRI扫描中神经根沉降征阳性率大小。结果 LSS患者中,中央型LSS组中出现神经根阳性数46(92%),侧隐窝型LSS组中出现阳性数为3(23%),LDH组中出现神经根阳性数为18(15%),差异有统计学意义(P<0.05)。3组患者JOA评分、VAS评分、ODI功能障碍指数比较差异无统计学意义(P>0.05),步行距离、CSA比较差异有统计学意义(P<0.05)。在LSS组中神经根沉降征阳性患者与阴性患者VAS评分、ODI功能障碍指数、CSA与步行距离比较,差异有统计学意义(P<0.05),JOA评分差异无统计学意义(P>0.05)。结论神经根沉降征阳性也存在于LDH患者中,但广泛存在于LSS患者中,尤其对中央型LSS诊断具有较高的敏感性。
- 韩国嵩张刚常俊黄斐廖法学尹宗生
- 关键词：腰椎管狭窄腰椎间盘突出
