“十五”国家科技攻关计划(2001BA308A02-14)
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 相关作者：许煜泉葛宜和黄显清张雪洪更多>>
- 相关机构：上海交通大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 假单胞菌M18转录调节因子σ^S基因与无启动子lacZ基因融合突变株的构建和鉴定
- 2006年
- 通过菌落原位杂交和Southern杂交,从假单胞菌M18基因组文库中克隆了rpoS基因及相邻序列。为了深入研究影响rpoS基因表达的调控因素,运用同源重组技术,将无启动子β-半乳糖苷酶基因(-′lacZ)插入并融合于rpoS基因中,构建了假单胞菌M18rpoS基因突变株M18SZ。Miller法测定显示,突变株M18SZ的β-半乳糖苷酶可高达480U,而野生株检测不到β-半乳糖苷酶活性。表明,突变株中的rpoS基因与无启动子β-半乳糖苷酶基因已融合并且表达。在KMB培养基中生长量测定(OD600)的结果表明,突变株与野生株生长存在显著差异。
- 葛宜和许煜泉
- 关键词：假单胞菌M18RPOSLACZ插入突变
- 假单胞菌M18调控因子GacA与RsmA的相关性及对抗生物质合成代谢调控机制的分析被引量：3
- 2006年
- 假单胞菌M18是一株可同时合成并分泌吩嗪-1-羧酸(Phenazine-1-carboxylic acid,PCA)和藤黄绿脓菌素(Pyoluteorin,Plt)两种抗生物质的生防菌株。为了进一步研究假单胞菌M18抗生物质合成代谢的调控方式与机制,在分别构建gacAr、smA等单基因突变株基础上,又构建了gacArsmA双基因突变株M18GR以及gacA′-l′acZ和rsmA′-′lacZ等翻译融合表达载体(pMEGA和pMERA)。通过在PPM和KMB两种培养基中发酵培养和两种抗生物质PCA和Plt的HPLC定量测定显示,双突变株M18GR的PCA和Plt的合成量不论在PPM还是在KMB培养基中都介于单突变株M18G和M18R之间。由实验结果分析推测,两种调控因子对抗生物质合成的调控作用不是发生在转录水平,很可能发生在转录后水平。由β-半乳糖苷酶的定量分析表明,在假单胞菌M18中,两种调控因子不存在自诱导机制;虽然GacA未调控RsmA的合成,但RsmA可能部分正向调控GacA的表达。
- 葛宜和黄显清张雪洪许煜泉
- 关键词：假单胞菌M18GACARSMA双突变
