北京市自然科学基金(7112039)
- 作品数：8 被引量：14H指数：3
- 相关作者：朱光发吴春婷郭红娟靳丽妍黄艳更多>>
- 相关机构：首都医科大学附属北京安贞医院北京市心肺血管疾病研究所更多>>
- 发文基金：北京市自然科学基金国家自然科学基金北京市教育委员会科技发展计划面上项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- NF-κBp65/IκBα在非小细胞肺癌组织中的表达被引量：3
- 2014年
- 目的从蛋白和RNA水平研究NF-κBp65、IκBα在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织中的表达特点,探讨其在肺癌发生中的作用。方法免疫组化、Western blot方法检测NSCLC和癌旁肺组织中NF-κBp65和IκBα蛋白的表达,实时定量-PCR方法检测NF-κBp65和IκBα基因表达。结果共检测NSCLC组织62例(腺癌33例,鳞癌29例),癌旁肺组织27例。免疫组化显示NSCLC组织中NF-κBp65阳性表达率分别为58.6%和60.9%,显著高于癌旁肺组织(P均<0.0001),而IκBα阳性表达率分别为12.3%和1.4%,显著低于癌旁肺组织(P均<0.0001)。Western blot进一步证实:NF-κBp65蛋白在NSCLC组织中表达升高,IκBα蛋白表达降低。实时定量-PCR结果显示,NSCLC组织中NF-κBp65基因表达分别是癌旁肺组织的2.73±0.33倍和2.58±0.27倍(P=0.0046),而IκBα基因表达分别是癌旁肺组织的0.63±0.086倍和0.87±0.075倍(P=0.0208)。结论 NF-κBp65高表达和IκBα低表达可能在NSCLC发生过程中发挥重要作用。
- 郭红娟朱光发吴春婷靳丽妍刘双
- 关键词：非小细胞肺癌NF-ΚBP65IΚBΑ
- 己酮可可碱对脓毒症致急性肺损伤核因子-κB和明胶酶的干预作用
- 2012年
- 目的研究己酮可可碱（pentoxifylline，PTX）对急性肺损伤（acutelunginjury，Au）核因子-κB（nuclearfactor-κB，NF-κB）、明胶酶（gelatinase，MMP-2，MMP-9）的干预作用。方法将112只小鼠随机分为盐水对照组（NS组）、己酮可可碱对照组（PTX组）、手术组（CLP组）和己酮可可碱干预组（C＋P组）。采用盲肠结扎穿孔（cecalligationandpuncture，CLP）法复制脓毒症ALI模型，C＋P组在手术基础上尾静脉注射己酮可可碱40mg／kg干预。各组小鼠在对应时间段处死，观察肺病理改变；免疫组化染色检测肺NF-κB染色强度；逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测肺NF-κB、MMP-2、MMP-9的mRNA表达；酶联免疫吸附法（ELISA）测定支气管肺泡灌洗液（bronchoalveolarlavagefluid，BALF）中MMP-2、MMP-9的蛋白含量。结果盲肠结扎穿孑L能够引起Au。CLP组ALI病理表现明显，C＋P组较CLP组明显减轻。C＋P组肺组织NF-κB的染色强度、面积低于CLP组（P〈0．05或P〈0．01）。CLP组肺组织NF-κB、MMP-2、MMP-9的mRNA表达以及BALF中的MMP-2、MMP-9蛋白含量均高于C＋P组（P〈0．05）。结论急性肺损伤时，PTX能够抑制NF-κB活化及MMP-2、MMP-9蛋白的过量表达。抑制炎症反应，减轻肺损伤。
- 闫树凤朱光发张向峰靳丽妍吴春婷
- 关键词：己酮可可碱明胶酶
- 针对核因子-κB小干扰RNA防治脓毒症急性肺损伤的实验研究被引量：1
- 2012年
- 目的:探讨针对核因子-κB(NF-κB)P65的小干扰RNA(siRNA)在脓毒症急性肺损伤防治中的保护作用。方法:将体质量18 g～20 g,雄性,昆明小鼠70只,随机分为健康组、脓毒症组、特异干扰组及乱序对照组,后3组均设置术后6 h、12 h 2个亚组(每组10只)。术前1 h特异干扰组尾静脉注射NF-κB P65 siRNA反转录病毒,乱序对照组注射scrambled siRNA反转录病毒,健康组及脓毒症组注射等量0.9%氯化钠液;分别对脓毒症组、特异干扰组及乱序对照组小鼠行盲肠结扎穿孔(CLP)手术构建急性肺损伤模型;术后6 h、12 h留取肺组织标本,观察肺病理改变;湿干质量比值(W/D);肺NF-κB染色强度;NF-κB mRNA、基质金属蛋白酶-9 mRNA(MMP-9 mRNA)及蛋白的活性水平。结果:采用CLP法成功构建小鼠急性肺损伤模型。与脓毒症组和乱序对照组比较,特异干扰组术后6 h、12 h肺组织较同时段脓毒症及乱序对照组肺组织病理损害及W/D值,NF-κB P65 mRNA,MMP-9 mRNA及蛋白活性减低,其中在6 h差异有统计学意义(P<0.05)。结论:针对NF-κB P65的siRNA抑制NF-κB的表达后,能够抑制脓毒症所致的早期的过度炎症反应,减轻急性肺损伤。
- 李丛锋朱光发王君靳丽妍闫树凤吴春婷
- 关键词：小干扰RNA核因子-ΚB基质金属蛋白酶-9急性肺损伤
- 核因子κB信号通路在肺癌中的作用被引量：1
- 2013年
- 核因子κB（nuclear factor-κB,NF-κB）是调控多种基因表达的核转录因子,其活化失调不仅与各种炎症性疾病有关,而且在肺癌的发生、发展、转移及治疗中也发挥着重要的作用.近年来研究发现,NF-κB可能是抗癌药物治疗的靶点,为肺癌等恶性肿瘤的治疗提供了新思路.
- 郭红娟朱光发
- 关键词：核因子ΚBIΚB激酶肺癌
- 肺鳞癌和腺癌组织E_2F-1和c-myc及p14^(ARF)蛋白表达临床病理学意义的探讨被引量：2
- 2012年
- 目的:研究E2F-1、c-myc和p14ARF蛋白在肺鳞癌及腺癌中的表达情况,探讨其在肺癌发生发展中的作用机制及其与临床病理学特征间的关系。方法:应用免疫组化二步法检测71例肺鳞癌、腺癌及相应癌旁组织中E2F-1、c-myc和p14ARF蛋白的表达情况。结果:肺鳞癌及腺癌组织中E2F-1和c-myc蛋白的阳性表达率分别为83.1%(59/71)和81.7%(58/71),高于癌旁组织中的8.5%(6/71),P<0.05。p14ARF蛋白的阳性表达率为52.1%(37/71),低于相应癌旁组织的74.6%(53/71),P<0.05。并与患者年龄、性别、肿瘤大小、组织分化、病理分型、有无淋巴结转移及TNM分期无关,P>0.05。E2F-1、c-myc和p14ARF蛋白表达经相关分析显示两两相关,P<0.05。结论:肺鳞癌及腺癌内可见E2F-1和c-myc蛋白的过表达及p14ARF蛋白的表达缺失,可能与癌的发生发展有关。
- 陈东庞俊伟王伟肖磊朱光发
- 关键词：肿瘤抑制蛋白质类
- 人核因子-κBp65 shRNA慢病毒载体构建及对肺癌细胞恶性生物学行为的影响被引量：3
- 2014年
- 背景与目的核因子-κB作为重要转录因子,与多种恶性肿瘤的发生发展有着密切联系,直接或间接抑制NF-κBp65的表达可逆转肿瘤细胞生物学行为。构建人核因子-κBp65基因shRNA重组质粒,感染A549细胞并筛选出稳定细胞株,对其迁移、粘附能力进行鉴定。方法设计并合成人核因子-κBp65的乱序对照序列(scramble)和干扰序列(shRNA)构建重组质粒,在5’端引入一个BamHI位点,3’端引入一个XhoI位点和EcoRI位点;感染A549细胞并由嘌呤霉素做稳转株的筛选;应用Western blot、qRT-PCR技术检测NF-κBp65的干扰效果及IκBα蛋白表达水平的变化;Transwell、MTT法分析其对A549细胞迁移、粘附能力的影响。结果成功构建重组质粒并筛选出A549/NF-κB p65scramble稳转株和A549/NF-κB p65 shRNA稳转株;A549/NF-κB p65 shRNA稳转细胞株与A549/NF-κB p65 scramble稳转细胞株及A549细胞相比NF-κBp65的mRNA、蛋白表达水平均下调;IκBα蛋白水平明显下调;细胞迁移能力及粘附能力均降低。结论本实验通过RNA干扰技术构建的重组慢病毒可有效抑制NF-κBp65 mRNA和蛋白的表达水平;抑制NF-κBp65可明显降低A549细胞的迁移和粘附能力。
- 郭红娟朱光发吴春婷
- 关键词：核因子-ΚBP65IΚBΑ慢病毒载体
- 人核因子κBp65核定位信号缺失突变对A549细胞恶性表型的影响被引量：3
- 2015年
- 目的鉴定人核因子κB(NF-κB)p65核定位信号(NLS)缺失突变质粒即pc DNA3.1(+)-NF-κBp65ΔNLS(简称NF-κBp65ΔNLS)的表达功能,以及其对低表达NF-κBp65的A549细胞株即A549/NF-κBp65 shRNA细胞增殖、迁移和粘附能力的影响。方法培养人A549/NF-κBp65 shRNA细胞株,分为对照组、转染pc DNA3.1(+)组、转染NF-κBp65ΔNLS组。应用间接免疫荧光、实时荧光定量-PCR和Western blot技术检测NF-κBp65的细胞内定位及mRNA、蛋白表达水平的变化;应用MTT、Transwell和细胞粘附实验分析转染NF-κBp65ΔNLS质粒对A549/NF-κBp65 shRNA细胞增殖、迁移、粘附能力的影响。结果成功构建人NF-κBp65ΔNLS真核表达质粒。转染NF-κBp65ΔNLS质粒的A549/NF-κBp65 shRNA细胞与对照组及转染pc DNA3.1(+)组比较,NF-κBp65 mRNA表达水平明显上调(10.63±0.84比1.04±0.21和1.23±0.22,P<0.01),NF-κBp65蛋白表达水平明显升高(1.07±0.06比0.53±0.02和0.59±0.04,P<0.01),且NF-κBp65蛋白主要位于细胞浆内,在肿瘤坏死因子α刺激后NF-κBp65蛋白并未明显进入细胞核。与对照组及转染pc DNA3.1(+)组比较,转染NF-κBp65ΔNLS质粒的A549/NF-κBp65 shRNA细胞的增殖、迁移和粘附能力均有不同程度增强。结论通过基因突变技术构建无NLS的NF-κBp65真核表达质粒,可明显增强A549/NF-κBp65shRNA细胞株内NF-κBp65 mRNA和蛋白的表达水平,并使NF-κBp65蛋白定位于细胞浆内;同时,细胞浆内过表达NF-κBp65ΔNLS蛋白可明显增强A549/NF-κBp65 shRNA细胞的增殖、迁移和粘附能力,提示滞留于细胞浆内的NF-κBp65仍可通过影响NF-κB信号通路相关蛋白参与调节肺癌细胞的生物学行为。
- 黄艳吴春婷郭红娟朱光发
- 关键词：P65核定位信号
- 核因子κB信号通路为靶点进行非小细胞肺癌治疗的研究进展被引量：1
- 2014年
- 肺癌是最常见的恶性肿瘤之一,占全球癌症死亡原因的首位.癌症的发生和发展取决于细胞生存和死亡信号之间的平衡.核因子κB（nuclear factor-κB,NF-κB）作为主要的细胞生存信号,参与了肿瘤发生和发展等多个过程,并与癌细胞对放疗及化疗抵抗相关.以NF-κB信号通路为靶点进行非小细胞肺癌治疗是当今研究及讨论的热点,抑制NF-κB的活化可能为非小细胞肺癌的治疗提供一条新的途径.
- 黄艳朱光发
- 关键词：核因子ΚB信号通路非小细胞肺癌靶向治疗
