国家科技支撑计划(2012BAD12B03-3)
- 作品数：14 被引量：61H指数：5
- 相关作者：朱远茂马磊薛飞杨婷史鸿飞更多>>
- 相关机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所东北农业大学黑龙江省兽医科学研究所更多>>
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- 牛传染性鼻气管炎病毒gD蛋白表位鉴定
- 2015年
- 为鉴定牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)g D蛋白抗原表位,本研究利用p ET-30a原核表达系统表达、纯化了重组g D蛋白,采用超速离心纯化的IBRV免疫BALB/c小鼠,取脾淋巴细胞与SP2/0细胞进行融合,以重组g D蛋白作为包被抗原,通过间接ELISA筛选出一株稳定分泌抗g D蛋白的MAb杂交瘤细胞株(1G3)。间接免疫荧光结果表明:MAb与IBRV呈阳性反应,中和试验测定其腹水中和效价为1∶32。利用肽扫描技术原核表达GST融合短肽对MAb 1G3识别的抗原表位进行筛选鉴定,结果表明:该MAb识别的抗原表位为259EESKGYE265。蛋白序列分析表明该抗原表位在IBRV各分离株及牛疱疹病毒5型(Bo HV-5)中均保守。本研究为IBRV的糖蛋白g D的结构和免疫学特性及IBRV致病性的深入研究奠定了基础。
- 周跃辉朱远茂任建乐严昊王雪枝马磊史鸿飞薛飞
- 关键词：牛传染性鼻气管炎病毒单克隆抗体
- 我国牛病毒性腹泻/黏膜病研究进展及防控策略被引量：11
- 2016年
- 本文从病毒分离及基因分型、血清流行病学、诊断方法、免疫研究四个方面介绍了我国牛病毒性腹泻黏膜病的研究进展情况,并提出了防控策略。
- 薛飞朱远茂马磊
- 关键词：防控策略
- 牛病毒性腹泻病毒E0蛋白的表达与多克隆抗体制备被引量：4
- 2014年
- 为了制备BVDV的E0蛋白兔源多克隆抗体,试验采用大肠杆菌对E0蛋白进行了表达,根据已发表的BVDV的VEDEVAC株的全基因组序列设计1对扩增E0的引物,经RT-PCR扩增出长约680 bp的E0基因片段,然后将目的基因克隆到pET-30a载体上,经酶切鉴定获得阳性重组质粒后进行测序,再将测序正确的阳性重组质粒转化BL21表达菌,经扩大培养及IPTG诱导后获得以包涵体形式存在的重组E0蛋白,经亲和层析法纯化后进行Western-blot检测,同时以纯化的E0蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,并对E0多克隆抗体进行了中和试验和免疫荧光检测。结果表明:E0蛋白具有良好的反应性;E0多克隆抗体的病毒中和试验测定其中和抗体效价达到1∶128,具有良好的反应性和特异性。说明制备的重组E0蛋白多克隆抗体可以用于BVDV的检测。
- 王雪枝朱远茂史鸿飞严昊蔡红王姝马磊薛飞
- 关键词：牛病毒性腹泻病毒多克隆抗体IFA
- 我国牛传染性鼻气管炎研究现状及防控展望被引量：9
- 2016年
- 牛传染性鼻气管炎（IBR）,或称为传染性脓疱性外阴阴道炎（IPV）,是由牛传染性鼻气管炎病毒（IBRV）引起的牛的一种急性接触性传染病,在临床上表现多种病型,如上呼吸道黏膜炎症、结膜炎、乳房炎、脓疱性外阴阴道炎或龟头包皮炎、幼牛脑膜脑炎和流产等,可以认为是由同一种病原引起多种病症的疫病。世界动物卫生组织将IBR列为B类动物疫病。IBR于1953年在美国加利福尼亚州首次被报道,其后引起了全球重视。
- 薛飞朱远茂马磊
- 关键词：外阴阴道炎牛疱疹病毒龟头包皮炎病型基因缺失疫苗病毒中和试验
- 牛病毒性腹泻病毒p80蛋白的表达及其单克隆抗体的制备被引量：3
- 2016年
- 为了制备牛病毒性腹泻病毒（BVDV）p80蛋白单克隆抗体,试验采用BVDV接种牛肾细胞（MDBK）,提取病毒RNA,通过RT-PCR扩增出BVDV的p80基因,将其定向克隆到原核表达载体pET30a,得到重组表达质粒pET30a-p80。将重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）表达菌,挑选单菌落并扩大培养,经IPTG诱导和SDS-PAGE以及Western-blot分析表明重组蛋白p80获得了表达,分子质量约为44ku。同时用浓缩的BVDV培养液免疫6-8周龄的Balb/c小鼠,取免疫鼠脾细胞与SP2/0细胞进行融合。利用纯化的重组蛋白p80作为检测抗原的间接ELISA筛选阳性杂交瘤细胞,经过3次亚克隆后对获得的杂交瘤细胞进行间接免疫荧光（IFA）和抗体亚类鉴定及腹水的制备和效价的测定。结果表明：重组p80蛋白具有很好的反应性;获得8株稳定分泌针对BVDVp80蛋白的杂交瘤细胞株,分别为3E3、2A4、8H9、3G3、2B3、3G2、2G2和4A11;8株杂交瘤细胞株接种Balb/c小鼠制备腹水,采用BVDV作为包被原的间接ELISA方法测得其效价为1×10^5-1×10^7;8株杂交瘤细胞所分泌的MAb具有良好的反应性和特异性;8株单克隆抗体的抗体亚类均为IgM/κ。说明制备的重组p80蛋白单克隆抗体可试用于建立检测BVDV抗原的诊断方法。
- 杨立新朱远茂周跃辉任建乐马磊杨婷薛飞
- 关键词：牛病毒性腹泻病毒免疫印迹试验单克隆抗体IGM间接免疫荧光试验
- 牛病毒性腹泻病毒LJ36/14的分离与鉴定被引量：4
- 2016年
- 为确定牛呼吸道传染病的病原,本研究对2014年从黑龙江省发生牛呼吸道传染病的某肉牛场采集的40份鼻拭子进行了病毒分离,结果分离到一株牛病毒性腹泻病毒(BVDV),命名为LJ36/14株。病毒鉴定结果表明,分离株在单层MDBK细胞中不产生细胞病变;利用BVDV p80蛋白的单克隆抗体(MAb)进行的间接免疫荧光试验表明接种LJ36/14株的细胞结果显示阳性。分离株的TCID_(50)为10^(5.9)/0.1 mL。对该分离株的5'端非编码区(5'UTR)和Npro基因进化树分析表明该分离株为国内首次分离并鉴定的基因亚型,即BVDV1v亚型。本研究为了解BVDV地理分布和流行情况及BVDV疫苗的制发奠定了基础。
- 朱远茂杨立新马磊任建乐杨婷薛飞
- 关键词：牛病毒性腹泻病毒间接免疫荧光反转录-聚合酶链式反应
- 牛多杀性巴氏杆菌分离鉴定及应用噬菌体展示技术筛选TbpA蛋白抗原表位
- 多杀性巴氏杆菌是动物机体上呼吸道和眼部黏膜的常在菌群,当机体受到应激或其他呼吸性病原体感染时,常发生内源性感染。牛巴氏杆菌病多发于运输应激的牛群或者犊牛群中。现有的牛出败灭活疫苗免疫原是荚膜血清型B型的多杀性巴氏杆菌,然...
- 何泊宁
- 关键词：抗原表位
- 文献传递
- 牛副流感的流行、危害及其防控被引量：9
- 2016年
- 牛副流感（Bovine parainfluenza）是由牛副流感病毒3型（Bovine parainfluenza virus type 3,BPIV3）引起的一种急性接触性传染病,曾被称为“船运热”（Shipping fever）。应激因素如运输、转群、气候变化等容易诱发牛副流感病的局部流行。BPIV3感染牛多表现出精神沉郁、
- 朱远茂马磊杨婷宋文凤薛飞
- 关键词：副流感病毒急性接触性传染病VIRUS应激因素气候变化
- 牛源A型多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及毒力基因检测被引量：10
- 2019年
- 为确定黑龙江省2个规模化奶牛场犊牛急性呼吸道感染的病因,笔者进行了病原的分离纯化,细菌16S rDNA基因和多杀性巴氏杆菌特异性基因OmpH鉴定、生化试验、药敏试验、半数致死量试验、荚膜血清型分型及22种毒力因子的检测,以确定主要病原的种类、型别及生物学特性。结果表明,从死亡牛肺和患病牛鼻拭子分离的2株病原菌均为荚膜A型多杀性巴氏杆菌,分别被命名为WC16551和LY01,序列分析结果表明,其与牛源多杀性巴氏杆菌同源性达到99%以上。药敏试验显示2株菌均对恩诺沙星、环丙沙星高度敏感。半数致死量结果表明,LY01菌株的毒力明显强于WC16551菌株,2株分离菌均携带19种毒力因子,未检出hgbB、toxA和nanB三种基因。上述研究结果表明,导致2个牛场发病的主要病原菌为荚膜A型多杀性巴氏杆菌。
- 何泊宁周金玲赫鸣睿刘增禄刘增禄王丽吴陈华黄雯静刘宇岳山刘宇
- 关键词：毒力因子
- 牛病毒性腹泻病毒E2蛋白单克隆抗体的制备及初步鉴定被引量：3
- 2013年
- 为制备牛病毒性腹泻病毒(BVDV)糖蛋白E2单克隆抗体(MAb),利用原核表达并且纯化的重组糖蛋白E2(rE2)免疫BALB/c小鼠,取免疫后小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合。采用以BVDV为检测抗原的间接ELISA筛选阳性细胞克隆,经3次克隆纯化后获得2株稳定分泌抗E2特异性MAb的杂交瘤细胞株,分别命名为4E3与1G11。用4E3与1G11杂交瘤细胞株接种BALB/c小鼠制备腹水,采用rE2及BVDV包被的ELISA测得的效价分别是6.21×106和6.83×105及6.83×105和7.5×104。间接ELISA、Western blot、IFA试验表明两株杂交瘤细胞所分泌的MAb具有良好的反应性和特异性。经抗体亚类鉴定4E3与1G11均为IgM/κ。特异性试验表明4E3与1G11这2株MAb均不与牛传染性鼻气管炎病毒、牛副流感病毒3型、牛腺病毒3型反应;其中4E3不与猪瘟病毒反应,而1G11则可与猪瘟病毒发生交叉反应,这种反应特性可试用于BVDV与猪瘟病毒的鉴别诊断。所制备的4E3与1G11 MAb可以用于BVDV抗原的检测,为建立检测BVDV E2蛋白血清抗体的ELISA奠定了基础。
- 王姝朱远茂蔡红马磊史鸿飞吕闯董秀梅高欲燃薛飞
- 关键词：牛病毒性腹泻病毒E2单克隆抗体IGM
