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国家科技重大专项(2008ZX08006-005): 作品数：6 被引量：10H指数：2; 相关作者：戴建军顾晓龙张德福吴彩凤张廷宇更多>>; 相关机构：上海市农业科学院上海市农业遗传育种重点实验室动物遗传工程研究室四川农业大学更多>>; 发文基金：国家科技重大专项上海市科技兴农重点攻关项目上海市农科院青年科技发展基金更多>>; 相关领域：生物学农业科学更多>>

H19和IGF2R基因在体细胞克隆猪各组织中的甲基化状态被引量：6: 2012年; 为了探求新生克隆猪可能的死亡原因以及是否存在不完全的DNA甲基化重编程,本试验运用亚硫酸氢盐测序法分别检测了H19基因和IGF2R基因差异甲基化区(DMR)在新生死亡克隆猪和同期正常猪心脏、肝脏、脾脏、肺脏和肾脏中的甲基化状态。结果发现,H19基因DMR在克隆猪肺脏中表现为超甲基化,极显著高于正常猪(95.20%vs 46.80%P<0.01),且10个测序克隆中存在2处连续的全甲基化CpG位点(4～9位、12～S17位),而在其他组织中甲基化差异不显著(P>0.05);IGF2R基因DMR在肝脏中处于超甲基化状态,显著高于正常猪(80.00%vs 39.41%P<0.05),而在肺脏中为去甲基化状态,极显著低于正常猪(14.71%vs 66.47%P<0.01),在其他组织差异不显著(P>0.05)。结果说明,在死亡克隆猪中,H19基因DMR在肺脏和IGF2R基因在肝脏与肺脏中存在不完全的DNA甲基化重编程,这可能是导致克隆动物死亡的因素之一。; 吴志强谢一妮戴建军张廷宇吴彩凤张树山顾晓龙刘亮吴斌陈慧兰张德福马恒东; 关键词：DNA甲基化体细胞克隆

玻璃化快速冷冻仪（Vit-Master）在猪MⅡ期卵母细胞玻璃化冷冻中的应用研究: 为了提高猪成熟卵母细胞玻璃化冷冻效果,本试验应用玻璃化快速冷冻仪（Vit-Master）装置进行猪成熟卵母细胞的冷冻,以观察其冷冻效果。结果显示:浆状液氮降温速率（21345±1768℃/min）远远高于普通液氮降温速率...; 徐利戴建军张廷宇吴彩凤李维杰张树山顾晓龙李翔韩晓李芳芳; 关键词：卵母细胞; 文献传递

猪精浆蛋白基因PSP-Ⅰ和PSP-Ⅱ启动子序列克隆及生物信息学分析: 2011年; 分别用PCR方法扩增了1.7kbp和1.6kbp的猪PSP-Ⅰ和PSP-Ⅱ基因的启动子,并进行TA克隆,测序鉴定,测序结果用DNAstar程序与Genebank中的相应序列进行对比分析,结果显示与已发表序列的同源性分别为99.8%和96.3%。利用生物信息学的方法对克隆的1.7kbp和1.6kbp的猪PSP-Ⅰ和PSP-Ⅱ基因的启动子区进行了预测分析。PSP-Ⅰ和PSP-Ⅱ基因序列对比(mVista)分析发现,启动子0→-1000bp的保守性较高,其中0→-200bp核心启动子部分的序列同源性达到了100%,而-1000bp上游序列的保守性则较低。启动子的位置预测(Promoter Scan)结果显示,转录起始点上游200bp的区域为两基因的核心启动子位置。启动子区转录因子结合位点预测(TFSEARCH)发现,转录起始位点上游的1000bp区域内含有大量的顺式调控元件,并且得到了一系列潜在的转录因子结合位点。; 周辉云李庆平吴晗何庆玲宋成义陈国宏; 关键词：启动子

若干精子抗原基因在猪生殖道及成熟精子中的mRNA表达研究: 【目的】揭示若干精子抗原基因(SPAG1、SPAG5、SPAG6、SPAG11C和SPAG11E)在梅山公母猪生殖道及成熟精子中的mRNA时空表达规律。【方法】利用RT-PCR技术分析各基因在生殖道和精子中组织表达谱,利...; 宋成义高波吴晗王霄燕王升智周辉云陈国宏毛九德; 关键词：精子抗原生殖道精子; 文献传递

猪繁殖候选基因ERK1/2的cDNA克隆与表达: ＜正＞引言胞外信号调控激酶（Extracellular signal-regulated kinase,ERK）或丝裂原活化蛋白激酶（Mitogen-activatedprotein kinase MAPK）,属于Ser...; 胡永胜张伟方梅霞聂庆华张细权; 关键词：克隆; 文献传递

三种冷冻方法对猪MⅡ期卵母细胞线粒体分布和损伤的影响: (目的)本研究的目的旨在探讨三种冷冻方法对猪MII期卵母细胞玻璃化冷冻后线粒体的分布和超微结构变化的影响。（方法）通过透射电镜、Rhodamine-123（R-123）荧光染色和体外发育观察,（结果）结果显示,（1）无论...; 戴建军吴彩凤张廷宇张树山徐利张德福; 关键词：玻璃化线粒体; 文献传递

纳米化聚酰胺-胺型树枝状聚合物对猪精子介导基因转移效率的影响被引量：3: 2013年; 为优化猪精子介导的基因转移(SMGT)技术,提高转基因效率,本试验利用纳米化聚酰胺-胺型树枝状聚合物(PAMAM-D)为载体介导猪精子转染外源DNA,经原位杂交检测其阳性率,体外受精(IVF)分析外源基因的表达。结果显示,0.5μg线状质粒DNA中加入PAMAM-D(质量比20∶1)阳性率最高(P<0.05);孵育时间为90、120min时,阳性率显著高于30、60min组(19.94%、18.57%与8.50%、13.87%;P<0.05);以此条件处理精子,阳性率显著高于无载体和脂质体处理组(23.93%与7.25%、13.25%;P<0.05)。各处理精子经IVF后,PAMAM-D组EGFP表达率显著高于其他2组(9.19%与4.81%、3.43%;P<0.05),各组绿色荧光胚胎经基因组PCR分析均能检测到EGFP基因。结果表明,PAMAM-D可有效介导猪精子转染外源DNA,并通过体外受精将外源基因导入胚胎中。; 吴斌戴建军张廷宇张树山吴彩凤顾晓龙陈会兰张德福马恒东; 关键词：精子

体细胞克隆巴马小型猪部分生理生化指标的初步测定被引量：1: 2011年; 目的探讨体细胞克隆巴马小型猪的生理生化指标特性。方法采用全自动血球计数仪和全自动生化仪，对体细胞克隆巴马小型猪血液的部分生理和生化指标进行测定和分析。结果体细胞克隆巴马小型猪生理生化指标和同期普通巴马小型猪没有显著差异，与人类大部分指标接近。结论体细胞克隆巴马小型猪和人类的生理生化特性有一定的相似性。; 陈会兰张德福吴彩凤戴建军张廷宇张树山顾晓龙吴斌; 关键词：体细胞克隆巴马小型猪生理指标生化指标

小型猪克隆胚的构建及胚胎移植研究: 2011年; 目的建立小型猪的体细胞核移植技术，为开展转基因小型猪动物模型研究提供技术支撑。方法应用体细胞核移植技术，以小型猪胎儿成纤维细胞和枫泾猪耳成纤维细胞作为供体细胞进行体细胞核移植，并将两种重构胚混合后进行胚胎移植。结果两种供体细胞在体外发育能力上无显著差异（P〉0．05）；电融合后进行化学激活能部分提高囊胚发育率，但差异不显著（P〉0．05）。两种方法生产的小型猪和枫泾猪克隆胚胎混合后，经胚胎移植均能顺利产下4只健康后代。经微卫星亲缘关系鉴定，克隆猪lOO％与供体细胞相同，与代孕母猪无关。结论建立的克隆平台能够用于克隆猪的生产。; 戴建军李垚顾晓龙张廷宇吴彩凤张树山吴斌陈会兰陈学进张德福; 关键词：体细胞核移植克隆小型猪化学激活

猪繁殖候选基因TDRP1的克隆及序列分析: 引言哺乳动物的精子生成是一个复杂的细胞分裂分化过程,由于缺少合适的研究模型,对于精子发生的具体机制一直还难以有确切的解释,尤其是对关键基因的认识,还比较缺乏。近年来,研究人员在人的身上发现了一个与精子生成相关的新基因TD...; 张伟方梅霞聂庆华张细权; 文献传递

国家科技重大专项(2008ZX08006-005)