国家科技重大专项(2009ZX08008-009B)
- 作品数：3 被引量：8H指数：1
- 相关作者：袁玉国成勇于宝利杨廷佳安礼友更多>>
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- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 程序化冷冻对小鼠胚胎发育的影响被引量：1
- 2009年
- 取小鼠原核(220枚)、2~4细胞胚胎(227枚)、桑椹胚(127枚),将其分为3组,每一时期胚胎分成两半,一半取出后立即冷冻复苏并体外培养至囊胚,另一半体外培养至囊胚后冷冻复苏,子宫冲取囊胚(78枚)冷冻复苏为对照组;各组囊胚均移植至子宫,比较程序化冷冻对小鼠早期胚胎存活率的影响。结果表明:原核、2~4细胞胚胎、桑椹胚体外培养至囊胚后冷冻复苏率分别为56.4%、72.2%、81.6%,移植产仔率分别为38.1%、41.6%、56.8%,原核、2~4细胞组复苏率和产仔率极显著或显著低于对照组,桑椹胚组与对照组差异不显著,显示体外培养对早期胚胎冷冻存活有影响;原核、2~4细胞胚胎、桑椹胚冷冻后体外培养至囊胚,胚胎移植后产仔率分别为25.3%、28.2%、42.1%,与对应胚胎时期体外培养至囊胚冷冻复苏后移植产仔率相比,原核、2~4细胞组均存在显著差异,而桑椹胚组差异不显著,显示原核、2~4细胞的早期胚胎体外培养至囊胚后冷冻可提高冷冻存活率。
- 袁玉国李锋郭磊缪明星冯亚杰柏亚军成勇
- 关键词：小鼠胚胎体外培养
- 含双筛选基因的人乳铁蛋白乳腺特异表达载体的构建及其表达
- 为提高表达构件的表达水平和表达稳定性,采用CMV组成型启动子和牛αs1-CSN基因调控元件组成双启动子调控元件.为检验其表达状况,在上述调控元件中插入hLF cDNA,组成重组构件pbCNCS/LF36,为便于后续体细胞...
- 袁玉国安礼友杨廷佳于宝利赵俊辉曹玉娟成勇
- 关键词：人乳铁蛋白双启动子小鼠胎儿成纤维细胞荧光蛋白
- 文献传递
- 人工锌指核酸酶突变EGFP基因的功能分析被引量：1
- 2013年
- 锌指核酸酶技术在基因定点修饰中具有效率高和特异性好等特点,并成功应用于数十种生物。目前,该技术是否能应用羊上尚未报道。为了敲除转基因山羊标记基因(EGFP),构建了一对针对EGFP外显子上的锌指核酸酶表达载体,将其电转染至转EGFP基因胎儿成纤维细胞中,研究了锌指核酸酶突变EGFP基因的效率和方式,利用基因显微注射单细胞获得获得的转基因(EGFP)细胞系作为锌指核酸酶的靶细胞。结果显示,通过锌指核酸酶的突变作用,转染后的细胞发绿色荧光比例下降,测序结果显示在EGFP外显子中插入1个碱基G,导致编码EGFP基因的阅读框改变,从而起到基因突变的作用。结果表明,文中构建的锌指核酸酶对EGFP基因有突变作用,可以为以后获得无标记基因供核细胞进行体细胞核移植生产克隆羊奠定基础。
- 袁玉国于宝利宋绍征周峰张利清顾迎迎禹明慧成勇
- 关键词：核移植EGFP基因打靶
- 人乳铁蛋白乳腺特异性表达载体的构建及其功能的验证被引量：6
- 2011年
- 构件pbCNCS/LF36经微注射获得转基因小鼠,同时为了准确筛选出整合的单克隆细胞,增加1个Cre/LoxP-GFP-Neo系统构建成pAPLM,将其转染山羊胎儿成纤维细胞筛选阳性细胞。结果表明:小鼠受体妊娠率28.5%,产仔32个,PCR整合检测4只阳性(3♀、1♂,整合率12.5%)。构件产生的3只母鼠和4号后代母鼠乳汁中重组人乳铁蛋白(hLF)用ELISA方法检测,表达量分别为3.8、2.8、0.9mg.mL-1,4号后代3只母鼠表达量分别为4.2、3.9、3.6mg.mL-1。构件pAPLM片段转染细胞后,经G418筛选,挑取单克隆扩大培养,其中8株PCR阳性克隆细胞荧光显微镜观察100%都有GFP的表达。以上结果证实,双启动子能调控外源基因在乳腺中特异高水平表达hLF,双标记基因可提高筛选阳性供核细胞的准确性,这为进一步作体细胞转基因克隆奠定基础。
- 袁玉国安礼友于宝利杨廷佳成勇
- 关键词：人乳铁蛋白双启动子小鼠胎儿成纤维细胞荧光蛋白
