河南省科技攻关计划(0623031400)
- 作品数：3 被引量：11H指数：2
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- 发文基金：河南省科技攻关计划更多>>
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- SV40T抗原真核表达载体的构建及其在食管癌细胞EC9706中的表达鉴定
- 2008年
- 构建胃壁细胞特异性表达载体pcDNA3.1(-)/HKSV和非特异性表达载体pcDNA3.1(-)/SV,行酶切及测序鉴定。用脂质体转染法将构建的载体导入食管癌细胞EC9706细胞株,RT-PCR法检测SV40T抗原基因的表达,免疫组化法检测蛋白表达情况。结果限制性内切酶分析与测序结果示H+/K+ATP酶β亚基启动子与SV40T基因成功构建于pcDNA3.1(-)真核表达载体中;转染细胞提取基因组DNA及总RNA,分别经PCR和RT-PCR反应扩增出618 bp和272 bp的特异性片段,非特异性表达载体pcDNA3.1(-)/SV瞬时转染时SV40T抗原表达阳性,而特异性表达载体pcDNA3.1(-)/HKSV转染组蛋白表达阴性。认为构建特异性表达载体pcDNA3.1(-)/HKSV并在食管癌细胞EC9706中检测其表达为转基因肿瘤动物模型的建立奠定了理论基础。
- 陈辉杜春艳谢庆瑞马慧洁张钦宪
- 关键词：SV40T抗原转染真核载体
- SV40T胃壁细胞定位表达转基因小鼠的建立被引量：8
- 2008年
- 目的构建胃壁细胞定位表达SV40T的真核表达载体并制备转基因小鼠动物模型,为研究胃癌发病机制提供动物模型。方法从构建的胃壁细胞特异性表达载体pcDNA3.1(-)/HKSV中酶切回收3.8kb的基因片段H+-K+ATPaseβpromoter/SV40T,通过显微注射的方法制备转基因小鼠,PCR和Southern blotting检测阳性转基因小鼠并建系繁殖,RT-PCR检测基因的表达情况。结果将422枚注射过的受精卵移植给16只假孕雌鼠,共生出77只仔鼠,移植成功率为18.2%。在出生的77只仔鼠中,2#、4#、8#、16#、24#、51#、57#、61#、68#、73#经PCR检测为阳性首建鼠。除68#不育外,其他9个品系首建鼠共生出99只F1代鼠。8#品系23只F1代尚未发现阳性鼠,另8个品系F1代经PCR和Southern blotting检测发现31只阳性鼠,阳性率为40.8%(31/76)。RT-PCR检测F1代阳性鼠均仅在胃组织中有SV40T基因的表达,而在心、肝、肾、肺、食道、肠、骨骼肌等组织中均不表达。不育首建鼠处死解剖发现胃组织有肿瘤存在。结论建立了胃壁细胞定位表达SV40T基因的转基因小鼠动物模型。
- 陈辉金辉杜春艳顾鹏宇王纯耀张钦宪高翔
- 关键词：SV40T抗原SOUTHERNBLOTTING转基因小鼠
- 昆明鼠超数排卵影响因素研究被引量：3
- 2012年
- 为探讨昆明鼠超数排卵的最佳条件,提高超排效果,比较促性腺激素使用剂量、孕马血清促性腺激素(PMSG)与人绒毛膜促性腺激素(hCG)注射间隔时间、超排小鼠所处发情周期阶段及小鼠周龄等因素对昆明鼠超数排卵结果的影响。PMSG 8IU+hCG 8IU、间隔46h～48h注射组超排效果最好;3周龄、8周龄～10周龄雌鼠较4周龄～7周龄雌鼠超排效果好,小鼠发情间期或发情前期开始超排的效果显著高于发情周期的其他时期。
- 崔元戎金辉杜春艳王纯耀陈辉张钦宪
- 关键词：超数排卵
- SV40T胃壁细胞定位表达转基因小鼠的建立及生物学特性研究
- 本实验构建了胃壁细胞特异性真核表达载体 pcDNA3.1(一)/HKSV,从该载体酶切回收 3.8kb 的基因片段 H+-K+ATPase β promoter/SV40T,通过显微注射的方法构建转基因小鼠, PCR 和...
- 陈辉金辉张钦宪高翔郑红李晓文
- 关键词：转基因小鼠
- 文献传递
