国家高技术研究发展计划(2009AA03Z312)
- 作品数：10 被引量：22H指数：3
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- 相关机构：中国人民解放军总医院贵阳医学院附属医院吉林大学白求恩第一医院更多>>
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- 软骨素酶ABC处理化学去细胞异体神经后的形态学观察被引量：2
- 2010年
- [目的]观察软骨素酶ABC处理化学去细胞异体神经后,硫酸软骨素蛋白多糖(CSPG)去除效果以及对活性成分层粘蛋白(Laminin)的影响。[方法]取12根新鲜猪坐骨神经,每段长60 mm,应用7%脱氧胆酸钠与7%Triton X-100制备化学去细胞异体神经后,随机分为两组。实验组(n=6):软骨素酶ABC处理组,将6根去细胞异体神经浸泡在包软骨素酶ABC(2 U/ml)的PBS(pH7.4);对照组(n=6)为PBS液浸泡。两组处理时间均为16 h37℃水浴。分别对两组神经行HE染色以及CSPG、Laminin免疫荧光染色观察。[结果]实验组与对照组HE纵切片均未能观察到细胞,红染的神经基底膜呈波浪状纵形排列,轴突消失而形成管柱状空隙;对照中CSPG免疫荧光染色阳性,经软骨素酶ABC处理后CSPG免疫荧光染色阴性;而实验组和对照组基底膜管成分层粘蛋白免疫荧光染色显示为阳性。[结论]经软骨素酶ABC处理的去细胞异体神经特异性降解了不利于神经生长的成分CSPG,而对去细胞神经中促神经生长成分Laminin无影响,可能是修复周围神经缺损的良好的移植物。
- 赵斌王玉彭江张莉赵喆许文静卢世璧
- 关键词：化学去细胞异体神经组织学观察
- 化学去细胞异体神经促神经再生的体外实验研究被引量：6
- 2010年
- [目的]对大鼠化学去细胞异体神经蛋白成分进行电泳分析,观察去细胞异体神经中的蛋白组分;制备去细胞神经薄膜,接种背根神经节,观察其结构对神经生长的影响。[方法]按Sondell法制备大鼠的去细胞异体神经,将制备好的神经进行电泳分析,观察28～30 kDa区域的髓鞘蛋白的去除程度;将制备的神经进行冰冻切片,接种鸡胚背根神经,进行神经纤维荧光染色,观察神经纤维在神经切片上的生长方向。[结果]去细胞异体神经电泳结果显示:28～30 kDa区域髓鞘蛋白完全消失,化学萃取的去细胞神经可以完全去除髓鞘蛋白;背根神经节发出大量的神经纤维沿着去细胞神经基底膜管方向生长。[结论]去细胞异体神经中无残留引起免疫反应的髓鞘蛋白,保留的基底膜管结构对促神经纤维再生具有引导性作用。
- 王玉彭江张莉赵斌赵喆杨昱许文静卢世璧
- 关键词：化学去细胞异体神经蛋白电泳背根神经节神经再生
- 化学去细胞异体神经移植修复鼠全面神经的实验研究
- 2011年
- 目的利用具有"一主干多分支"特征的化学去细胞同种异体神经(CEAN)修复大鼠面神经缺损并评价修复效果。方法取成年SD大鼠双侧面神经进行去细胞同种异体面神经制备和自体面神经冻融处理并进行结构评价。取成年雄性SD大鼠30只,制备大鼠左侧面神经10 mm缺损模型,随机分成3组(n=10),分别为采用自体神经移植组(A组)、去细胞同种异体面神经移植(CEANA)组(B组)和自体神经液氮冷冻组(C组),术后行大体观察和组织学观察。结果利用化学法可制备出保留天然成分和空间结构的具有"一干多支"特征的CEAN。术后12周,A组、B组有髓神经纤维总数均优于C组(P<0.05),A组与B组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论保留天然成分和空间结构的具有"一干多支"特征的CEANA可用于修复大鼠全面神经缺损的治疗,具有同自体神经移植相似的修复效果。
- 赵斌杨昱詹胜锋彭江王玉赵喆任志午张莉许文静卢世璧
- 关键词：周围神经化学去细胞同种异体神经
- 人脐带Wharton胶间充质干细胞的生物学特性及雪旺细胞分化研究被引量：1
- 2010年
- [目的]研究人脐带Wharton胶间充质干细胞(WJMSCs)的生物学特性及向雪旺细胞诱导分化的可能性,为神经组织工程提供新的种子细胞。[方法]去除新鲜人脐带动、静脉和脐带外膜组织,获得Wharton胶,采用组织块培养法获得脐带Wharton胶中的干细胞,免疫荧光鉴定WJMSCs的细胞表面特异标记CD44,CD105,CD34,CD45,Stro-1,Vimentin和Nestin,评价干细胞的生物学特性;采用b-FGF和Forskolin等诱导WJMSCs向雪旺细胞分化,光镜观察诱导后细胞形态的变化;免疫荧光染色鉴定雪旺细胞特异性标记物p75和GFAP的表达;Western分析诱导前后雪旺细胞特异性标记物GFAP的表达。[结果]分离培养的WJMSCs免疫荧光染色CD44、CD105、Stro-1和Vi-mentin表达阳性,而CD34、CD45和Nestin表达阴性,具有间充质干细胞的生物学特性;WJMSCs经过胶质细胞生长因子的作用,光镜下发现诱导的细胞形态与雪旺细胞相似;免疫荧光染色p75和GFAP阳性;Western结果显示诱导的雪旺细胞标记物GFAP表达阳性。[结论]人脐带Wharton胶间充质干细胞可诱导分化成为雪旺样细胞,其表型和分子特征与雪旺细胞相似,诱导分化的人脐带Wharton胶间充质干细胞是一种理想的神经组织工程的种子细胞。
- 王玉张莉彭江赵斌陈继凤赵喆许文静卢世璧
- 关键词：脐带间充质干细胞雪旺细胞
- 不同种属颅外段面神经结构的比较被引量：2
- 2011年
- 目的通过比较鼠、兔、犬、人颅外段的面神经主干及各分支的解剖学和组织学结构,总结"一干多支"周围神经的特点。方法在外科显微镜下解剖、分离出鼠、兔、犬、人的颅外段面神经主干及颞支、颧支、颊支、下颌缘支、颈支5个分支,各20根全面神经,分别进行石蜡切片HE染色,半薄切片甲苯胺蓝染色,超薄切片电镜观察,运用图像分析软件Image.pro.plus.5.0,分别记录各种属面神经主干及各分支的神经直径、神经分束、轴突直径、髓鞘厚度等结构特点。结果面神经直径鼠<兔<人<犬;面神经分束,鼠2～4束,兔2～6束,人5～9束,犬各分支均只有1束;轴突直径鼠<兔<犬<人;髓鞘厚度鼠<兔<犬<人。结论不同种属的"一干多支"神经具有不同的特点。
- 赵斌龙璇杨昱任志午彭江王玉张莉许文静赵喆詹胜锋卢世璧赵庆
- 关键词：面神经周围神经神经解剖学
- 不同种属坐骨神经的结构差别
- 2010年
- 目的测量不同种属的坐骨神经解剖结构差异,为粗大神经的化学去细胞工艺提供解剖学方面的参考。方法取正常新鲜人、猪、犬、大鼠坐骨神经,每段长10 mm,剔除外膜结缔组织。HE染色后测量神经束膜厚度;Laminin免疫组化后根据神经束标注颜色的像素求得神经束内截面积占神经截面积百分比。结果人、犬、猪、大鼠坐骨神经束膜厚度(F=7.48,P<0.05)和神经束内截面积占神经截面积百分比(F=8.10,P<0.05)均有统计学差异。结论不同种属坐骨神经的解剖结构数据存在显著差异,对去细胞神经的处理具有指导意义。
- 王鑫彭江王玉任志午赵斌张莉许文静赵喆詹胜锋卢世璧赵庆
- 关键词：坐骨神经神经解剖学周围神经化学去细胞同种异体神经
- 大鼠脂肪干细胞向雪旺细胞诱导分化能力的研究被引量：4
- 2011年
- 目的:研究脂肪干细胞(ADSCs)向雪旺细胞的诱导分化,为神经组织工程提供新的种子细胞。方法:取SD大鼠项背处的皮下脂肪,分离出脂肪干细胞并培养传代,流式细胞仪检测细胞表面特异标记CD29,CD34,CD44,CD45,CD90,以评价干细胞的生物学特性;采用b-FGF和forskolin等诱导脂肪干细胞向雪旺细胞分化,光镜观察诱导后细胞形态的变化;免疫荧光染色鉴定雪旺细胞特异性标记物S100、P75和GFAP的表达;PCR检测诱导前后雪旺细胞特异性标记物S100、P75的表达。结果:分离培养的鼠脂肪干细胞CD29、CD90表达呈阳性,而CD34、CD44和CD45表达呈阴性,具有脂肪干细胞的生物学特性;脂肪干细胞经过胶质细胞生长因子的作用,光镜下发现诱导的细胞形态与雪旺细胞相似;免疫荧光染色S100、P75和GFAP阳性;RT-PCR结果显示诱导的雪旺细胞标记物S100和P75表达上调。结论:脂肪干细胞可诱导分化成雪旺细胞,其表型和分子特征与雪旺细胞相似,诱导分化的脂肪干细胞是一种理想的神经组织工程的种子细胞。
- 任志午赵喆王玉陈继凤詹胜锋刘炎许文静张莉彭江卢世璧
- 关键词：脂肪干细胞雪旺细胞诱导分化
- 大鼠股神经再生趋化性效果评价被引量：1
- 2011年
- [目的]评价股神经损伤后神经功能的恢复效果,进一步探讨股神经趋化性再生的评价方法。[方法]雄性Wistar大鼠30只,分为对照组、电生理检测组、标记组,每组10只,于右侧股神经分叉上4 mm处行断端吻合术。术后8周,行电生理和组织学检查,并分别用F488和DiI逆行示踪标隐神经和股神经肌支,观测脊髓前角中示踪剂的分布及数目。[结果]实验动物术侧活动受限;术侧运动诱发电位潜伏期:2.16 ms±0.44 ms,波幅:2.01 mv±0.70 mv,与正常侧相比,其潜伏期延长(P<0.05),波幅降低(P<0.05);NF-200染色显示神经断端吻合口连续性良好;标记组脊髓前角中被标记的神经元颜色和数目分别为绿色:80.2±9.6、红色:200.6±17.9、橙色:26.9±4.4,而对照组中仅为红色:726.7±119.0(P<0.05)。[结论]在进行周围神经损伤再生评价时,除了行为学、电生理和组织形态学常规检测外,采用逆行示踪标记神经元计数的方法可以作为趋化性再生效果评价的一个选择。
- 詹胜锋王玉杨启友彭江赵斌张莉赵喆任志午刘炎孟昊业许文静卢世璧
- 关键词：股神经电生理逆行示踪
- 采用多重标记物示踪化学去细胞异体神经修复大鼠面神经缺损被引量：1
- 2010年
- [目的]探索用荧光金、量子点、固蓝"三标"逆行示踪方法来评价化学去细胞异体神经移植修复大鼠面神经缺损后颊支、下颌缘支、颈支的再生及神经的物质运输功能。[方法]外科显微镜下解剖、分离出鼠的左侧颅外段面神经主干及各分支(颞支、颧支、颊支、下颌缘支、颈支),在出茎乳孔处离断面神经主干,分别在距该断点10 mm处离断5个分支,移植化学去细胞异体全面神经,术后2个月暴露面神经,在颊支、下颌缘支、颈支吻合口远端分别注射荧光金、量子点、固蓝,3 d后脑干取材,冰冻切片,并在荧光显微镜下观察脑干内3种示踪剂的分布情况。[结果]将发源于脑干的面神经核团进行冰冻切片,荧光显微镜下观察到被荧光金、量子点、固蓝标记的神经元分别显示出黄色、红色和蓝色。[结论]根据神经轴浆运输的原理,采用多种标记物示踪法评价异体神经移植修复面神经损伤后神经干及各分支连续性的恢复情况,操作简便,可靠易行,是一种理想的评价方法。
- 杨昱彭江杨启友王玉赵斌眭翔张莉王鑫许文静卢世璧
- 关键词：荧光金逆行示踪面神经神经移植
- 双向差速法制备高纯度雪旺细胞的实验研究被引量：5
- 2011年
- [目的]利用乳鼠的雪旺细胞与成纤维细胞贴壁及复合酶消化分离速度不同的特点,建立简单而快速提取和纯化雪旺细胞的方法。[方法]取3 d SD大鼠双侧坐骨神经,在解剖镜下剥离去除神经外膜,剪碎后用0.2%复合胶原酶(Collagenase NB4)消化,细胞悬液接种于预先用多聚赖氨酸包被的培养瓶差速贴壁30 min,然后将细胞悬液移入一新的培养瓶培养48 h;用0.05%复合胶原酶37℃消化30 min,振荡分离雪旺细胞与成纤维细胞,培养48 h后在相差显微镜下观察细胞形态;计数、纯度测定;免疫细胞化学鉴定和流式细胞仪检测所得的雪旺细胞的纯度。[结果]经过2次纯化后,每25 cm2培养瓶可获取约(117.2±3.4)×104个细胞;第一轮纯化后雪旺细胞纯度达86.99%±1.53%,经2次纯化后纯度为98.32%±0.12%,两轮纯化之间有显著性差异,P<0.001;P75NTR免疫细胞化学鉴定细胞为阳性,流式细胞仪检测雪旺细胞纯度达97.9%。[结论]双向差速复合胶原酶消化法是一种高效、快捷的雪旺细胞纯化方法。
- 刘炎张莉宫旭陈继凤王玉赵斌任志午詹胜峰许文静彭江卢世璧
- 关键词：雪旺细胞纯化差速贴壁法周围神经再生
