国家自然科学基金(81302241)
- 作品数：5 被引量：3H指数：1
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- 相关机构：南京大学医学院附属鼓楼医院南京大学更多>>
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- 核糖体蛋白S7真核表达载体pIRES2-EGFP—RPS7的构建及其对293细胞凋亡的影响被引量：2
- 2013年
- 核糖体是蛋白质合成的场所，由核糖体RNA和核糖体蛋白组成。目前已发现80余种核糖体大、小亚基蛋白。除了参与蛋白合成，近年来研究结果显示核糖体蛋白还具有许多独立于核糖体外的生理功能，对细胞的分裂、增殖、分化和凋亡发挥重要的调节功能。不同的核糖体蛋白在肿瘤发生、发展过程中具有不同的作用。本研究旨在构建带有增强绿色荧光蛋白（EGFP）示踪的核糖体蛋白s7（RPS7）真核表达载体，观察RPS7对细胞凋亡的影响。
- 王庆飞丁慧禹立霞刘宝瑞张葵
- 关键词：核糖体蛋白真核表达载体细胞凋亡核糖体RNA蛋白合成
- 血清IL27水平与乙型肝炎疫苗免疫效果的相关性研究
- 2015年
- 目的研究血清IL27水平与乙型肝炎疫苗免疫效果的关系,探讨乙型肝炎疫苗免疫应答的影响因素或机制,为进一步提高疫苗的免疫效果提供新思路。方法通过随访400名按标准方案接种乙型肝炎疫苗后的健康大学生志愿者,化学发光法定量检测乙型肝炎病毒表面抗体(HBsAb)后,分别选取无、弱应答者和中、高应答者各40人为研究对象,采用ELISA法检测血清中IL27含量,并与免疫抗体HBsAb水平进行相关性分析,采用Graphpad 5.0软件进行分析。结果疫苗免疫后中、强应答组血清中IL27含量为(1 607.68±686.82)ng/L,显著高于无、弱应答组的(266.3±155.1)ng/L(P<0.05);血清HBsAb水平与IL27含量呈正相关,相关系数为0.84(P<0.05)。结论血清中IL27水平与机体对乙型肝炎疫苗的免疫效果高度相关,IL27水平低下可能是乙型肝炎疫苗无、弱应答发生的原因或机制之一。
- 张楠王庆飞张家方荣海顾光煜生媛陈军浩
- 关键词：乙型肝炎疫苗免疫应答
- 核糖体蛋白S7对宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响
- 2015年
- 目的初步探讨核糖体蛋白S7（RPS7）对宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响。方法用构建的带增强绿色荧光蛋白（EGFP）报告基因的RPS7重组表达质粒pIRES2-EGFP-RPS7转染HeLa细胞作为实验组，以转染空载体pIRES2-EGFP的细胞作为对照组，流式细胞仪检测带绿色荧光细胞的含量，Western blotting检测细胞中RPS7蛋白表达；用带有荧光染料藻蓝蛋白（APC）的磷脂结合蛋白-V（Annexin-V）试剂对瞬时过表达和稳定干扰RPS7的细胞进行染色，流式细胞仪分析细胞凋亡水平。结果在获得的瞬时过表达RPS7的HeLa细胞中，细胞凋亡水平明显高于转染空载体的细胞［（10.00±0.60） %∶（5.73±0.61）%］，差异有统计学意义（t=8.63, P=0.001）。另一方面，抑制RPS7表达的ShRPS7细胞凋亡水平低于对照细胞［（3.08±0.49）%∶（5.97±0.63）%］，差异有统计学意义（t=6.40, P=0.003）。结论上调RPS7表达具有促进HeLa细胞凋亡的作用，而下调RPS7表达可抑制HeLa细胞的凋亡。
- 丁慧凌静娴陈军浩张葵王庆飞
- 关键词：宫颈肿瘤细胞凋亡
- 稳定干扰核糖体蛋白RPS7基因表达的宫颈癌HeLa细胞株的建立被引量：1
- 2013年
- 目的建立稳定抑制RPS7基因表达的宫颈癌HeLa细胞株。方法设计并合成靶向人RPS7基因的shRNA寡核苷酸片段，克隆到逆转录病毒载体pSIREN中，构建重组质粒pSIREN-RPS7-shRNA，转染293T细胞，将包装产生的重组逆转录病毒感染宫颈癌HeLa细胞，经嘌呤霉素筛选获得稳定的细胞克隆，用real-timePCR和Western印迹检测细胞中RPS7mRNA和蛋白表达水平。结果获得了经测序鉴定正确的重组逆转录病毒质粒，逆转录病毒感染HeLa细胞后用嘌呤霉素筛选出的稳定细胞中，RPS7mRNA和蛋白水平均显著低于干扰对照细胞。结论成功构建了靶向人RPS7基因的shRNA逆转录病毒载体，建立了稳定抑制RPS7基因表达的宫颈癌HeLa细胞株．为进一步研究RPS7在宫颈癌中的生物学功能和作用机制提供了可靠的细胞模型。
- 丁慧禹立霞凌静娴刘宝瑞张葵王庆飞
- 关键词：SHRNA逆转录病毒载体宫颈癌
- 两种ErbB2/Neu阳性-PTEN缺失乳腺癌基因工程小鼠模型的建立及其生物学特征比较被引量：1
- 2014年
- 目的：建立两种ErbB2／Neu阳性-PTEN缺失的乳腺癌基因工程小鼠模型并比较其生物学特征。方法：利用先前建立的由鼠乳腺肿瘤病毒（MMTV）启动子同时驱动活化型ErbB2／Neu基因和重组酶Cre表达的FVB／N—MMTV—NIC小鼠与Flox-PTEN小鼠交配；或将由内源性启动子驱动活化型ErbB2／Neu基因表达的FVB／N-ErbB2^KI、FVB／N—MMTV—Cre及Flox—PTEN三种基因工程小鼠交配；PCR分别扩增Neu、Cre和PTEN基因，对其子代小鼠进行基因型鉴定；免疫组织化学法检测乳腺组织ErbB2／Neu和PTEN蛋白表达。对两种模型的成瘤时间、肿瘤数目、肺转移等生物学特征进行比较，观察肿瘤组织病理学形态，免疫组织化学法检测肿瘤细胞Ki-67表达，TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡水平。结果：经基因型鉴定和组织蛋白表达分析，获得了两种ErbB2／Neu阳性-PTEN纯合型缺失的乳腺癌基因工程小鼠模型；一是由MMTV外源性启动子同时驱动活化型ErbB2／Neu和Cre表达，抑癌基因PTEN条件性敲除的NIC／PTEN^-/-模型；二是由MMTV-Cre使内源性启动子驱动ErbB2／Neu基因表达，PTEN条件性敲除的ErhB2^KI／PTEN^-/-模型。NIC／PTEN^-/-模型的平均成瘤时间低于ErbB2^KI／PTEN^-/-模型（30d与368d，P〈0．01）；肿瘤数目、肺转移率均高于ErbB2^KI／PTEN^-/-模型（分别为10个与1～2个，75．0％与37．5％，均P〈0．01）；两种模型肿瘤呈现不同的组织病理形态，肿瘤细胞凋亡水平相当（P〉0．05）；NIC／PTEN^-/-模型Ki-67阳性细胞百分率高于ErhB2^KI／PTEN^-/-模型（86．9％±2．8％与37．4％±7．2％，P〈0．01）。结论：两种不同表型的ErbB2／Neu阳性-PTEN缺失的乳腺癌基因工程小鼠为探索ErbB2／HER2阳性乳腺癌的发生、发展规律及更有效的防治方案提供了理想的动物模型。
- 王庆飞丁慧刘宝瑞张葵
- 关键词：基因,ERBB-2染色体缺失
