山东省优秀中青年科学家科研奖励基金(BS2009NY010)
- 作品数：4 被引量：9H指数：2
- 相关作者：王金宝杜以军吴家强刘月月赵鹏伟更多>>
- 相关机构：山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室山东省农业科学院山东农业大学更多>>
- 发文基金：山东省优秀中青年科学家科研奖励基金山东省自主创新成果转化重大专项项目现代农业产业技术体山东省现代农业产业技术体系创新团队建设专项资金系建设专项资金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- PRRS流行毒株与减毒活疫苗TJM-F92株qPCR区分方法的建立与应用被引量：3
- 2013年
- 为快速准确区分PRRS流行毒株与减毒活疫苗TJM-F92株以及对流行毒株进行定量检测,按GenBank中发表的美洲型PRRSV SX-1分离株、弱毒疫苗株NSP2基因缺失部位的不同设计了一对特异性引物,通过RT-PCR和体外转录的方法,构建了体外转录RNA作为标准品,并对反应条件和反应体系进行优化,旨在建立一种敏感性高、特异性强、重复性和稳定性良好的qPCR鉴别方法。结果表明,该方法最低能检测出1.0×101拷贝/μL的模板,敏感性比常规PCR高100倍;应用该方法对218份临床样本进行鉴别与定量,qPCR检出率较常规RT-PCR高12.9个百分点。研究表明,qPCR鉴别方法的建立实现了对PRRS流行毒株与疫苗毒株的快速区分以及对流行毒株的定量检测,为PRRS的快速诊断提供了依据。
- 刘月月陶海英杜以军王兴东于江赵鹏伟刘思当王金宝吴家强
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征体外转录NSP2基因
- 环二鸟苷酸(c-di-GMP)作为潜在免疫佐剂的研究进展
- 环二鸟苷酸(cyclic diguanylate,c-di-GMP)是在细菌中普遍存在的第二信使分子,参与调节多种生理功能,近年来研究发现环二鸟苷酸作为免疫调节剂作用于真核细胞可产生很好的免疫调节作用,一系列的体内、体外...
- 丛晓燕孙文博时建立于江赵鹏伟李俊杜以军吴家强陈蕾陈智王金宝
- 关键词：疫苗佐剂免疫
- 文献传递
- 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒Nsp1蛋白锌指结构1(ZF1)突变体的构建及活性鉴定
- 2013年
- 本试验旨在构建高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)SX-1株非结构蛋白Nsp1的真核表达质粒,并对Nsp1蛋白锌指结构1(ZF1)进行定点突变,检测其在真核细胞中的表达活性。利用TRIzol法提取总RNA,RT-PCR扩增Nsp1目的基因,经双酶切构建pCI-neo-Nsp1真核表达质粒后对Nsp1蛋白锌指结构1的8C、10C、25C和28C的4个位点进行定点突变,成功获得分别突变为A和S的8个突变体。转染HeLa细胞,通过间接免疫荧光方法(IFA)和Western blotting检测Nsp1蛋白的活性。IFA结果显示,Flag抗体检测时蛋白质主要分布在细胞质和细胞核中,Myc抗体检测时蛋白质主要分布在细胞核中。Western blotting结果显示,Flag抗体检测时,S突变体出现大小约为44和20ku条带,A突变体出现约为44ku条带;Myc抗体检测时,S突变体出现大小约为44和27ku条带,A突变体出现大小约为44ku条带。试验结果表明,本试验成功构建了Nsp1突变体的真核表达质粒,证实其能在真核细胞中表达,为进一步研究Nsp1蛋白的锌指结构是否对机体Ⅰ型IFN产生起下调作用提供基础。
- 赵鹏伟吴家强杜以军李俊孙文博丛晓燕时建立彭军于江刘月月王金宝
- 关键词：活性鉴定
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒SX-1株N蛋白单克隆抗体的制备被引量：1
- 2011年
- 用纯化的重组HIS标签N蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗PRRSV N蛋白的单克隆抗体(McAb),经细胞融合获得5株可分泌特异性McAb的抗PRRSV N蛋白的杂交瘤细胞1A12,3F11,5A3,5F9,4E4。其中1A12,3F11,5A3,4E4杂交瘤上清与HIS-N蛋白与GST-N蛋白两种抗原包被的ELISA反应均为阳性。5F9与HIS-N蛋白包被的ELISA反应为阳性,而与GST-N蛋白包被的ELISA反应呈阴性。单抗1A12,3F11,4E4,5A3与HIS-N与GST-N蛋白的Western blotting反应均为阳性,而5F9只与HIS-N反应。IFA检测显示1A12,3F11,5A3,4E4株单抗都有明显的荧光,说明其与PRRSV呈阳性反应。同时,ELISA检测又有很好的特异性。
- 丛晓燕吴家强李俊时建立杜以军孙文博尹斐斐谷琳王金宝
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白单克隆抗体
- 鲁中地区猪高热性疾病的病理变化及病原学调查研究被引量：5
- 2012年
- 为研究鲁中地区猪高热性疾病的病理变化及主要发病原因,对2011年1月-2012年3月患高热性疾病的56个患病猪群109头病猪进行了临诊症状及剖检病变观察,并对发病猪群进行追踪调查,采集363份发病猪群的血清,用ELISA方法检测血清样品的CSFV、PRRSV及PCV2抗体,用RT-PCR和PCR方法检测病料中这3种病原,并对病料进行病理组织学及免疫组化检测。结果显示:患高热性疾病的猪群均已免疫过CSF、部分免疫过PRRS弱毒活疫苗,但均未进行PCVD疫苗免疫;发病猪群的CSF、PRRS及PCV2均有较高的抗体阳性率;病猪以淋巴组织急性炎症、间质性肺炎、病毒性脑炎的病变为主,其病变率分别为92.3%、76.1%和66.1%;CSFV、PRRSV和PCV2的病原检出率分别为30.27%、66.97%、41.28%,其中CSFV与PRRSV、CSFV与PCV2、PRRSV与PCV2二重感染检出率分别为16.51%、6.42%、28.44%,三者共感染检出率为4.59%,8.26%的病料未检测到这3种病原,属其它病原感染所致。序列分析表明CSFV流行株正在向着远离猪瘟兔化弱毒疫苗的方向发展,PRRSV均为高致病性变异毒株,PCV2则为毒力较强的PCV2b型。CSFV、PRRSV、PCV2是目前导致鲁中地区猪高热性疾病的主要病原,其中以PRRSV变异强毒感染最为常见,共感染是导致重症型猪高热性疾病的主要原因,病例还多见支原体、副猪嗜血杆菌等细菌病继发感染的病变,故该区域猪高热性疾病为多病原混合感染所致。
- 刘月月吴家强任庆海张绍武吴好庭张玉玉赵鹏伟彭军李俊杜以军王金宝刘思当
- 关键词：猪瘟猪繁殖与呼吸综合征猪圆环病毒病病理变化病原学
