福建省自然科学基金(2008j0088)
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
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- hMAM-EP调控HSV-TK腺病毒载体的构建及其对乳腺癌细胞的靶向杀伤被引量：1
- 2012年
- 目的:分别构建人乳腺珠蛋白(human mammaglobin,hMAM)基因增强子和启动子(enhancer and promoter ofhMAM,hMAM-EP)调控的增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)报告基因和单纯疱疹病毒胸苷激酶(herpes simple virus thymidine kinase,HSV-TK)自杀基因两种重组腺病毒载体,探讨hMAM-EP调控的HSV-TK在乳腺癌细胞特异性表达及其对乳腺癌的靶向治疗作用。方法:构建hMAM-EP-EGFP和hMAM-EP-TK重组质粒载体,将重组质粒目的基因转移到腺病毒骨架黏粒载体pAxcwit2,并转染HEK 293细胞获得重组腺病毒载体Ad-EP-EGFP和Ad-EP-TK。将Ad-EP-EGFP感染乳腺癌细胞T-47D、ZR-75-30和鼻咽癌细胞5-8F,荧光显微镜观察EGFP的表达。将Ad-EP-TK感染T-47D细胞,给予1、10、20、50μg/ml前药更昔洛韦(ganciclovir,GCV),观察TK基因对乳腺癌细胞的特异杀伤作用。结果:成功构建hMAM-EP调控的重组腺病毒载体Ad-EP-EGFP和Ad-EP-TK。Ad-EP-EGFP感染后,乳腺癌T-47D细胞可见EGFP表达,但ZR-75-30细胞和5-8F细胞无表达。与未感染组或感染Ad-EP-EGFP组相比,Ad-EP-TK重组腺病毒联合GCV(50μg/ml)组T-47D细胞存活率显著降低[(35.69±0.07)%vs(91.74±0.02)%,(87.69±0.11)%;P<0.05],且随GCV质量浓度的增加,T-47D细胞存活率逐渐下降,在MOI=100、GCV质量浓度分别为1、10、20、50μg/ml条件下,细胞存活率分别为(94.34±0.04)%、(86.26±0.02)%、(66.51±0.09)%、(35.69±0.07)%。结论:hMAM-EP调控的HSV-TK自杀基因在乳腺癌T-47D细胞中特异性表达,Ad-EP-TK联合GCV可靶向杀伤乳腺癌T-47D细胞。
- 于建刚吴金香庞春秀林德馨
- 关键词：单纯疱疹病毒胸苷激酶基因更昔洛韦重组腺病毒
- hMAM启动子／增强子调控表达载体构建和调控作用被引量：2
- 2012年
- 目的构建人乳腺珠蛋白（human mammaglobin，hMAM）启动子／增强子调控报告基因表达载体，探讨hMAM启动子／增强子序列在乳腺癌细胞中的特异性调控作用。方法应用PCR技术，从基因组DNA中扩增出hMAM启动子／增强子DNA序列，构建于PGL3报告基因上游，分别转染体外培养的乳腺癌细胞MDA—MB-415、T47D及胃癌细胞7901，分析启动子和增强子序列对乳腺癌细胞的基因表达调控作用。结果酶切图谱分析、DNA序列测定表明成功构建hMAM启动子／增强子调控的表达载体；荧光素酶报告基因检测结果分析表明，hMAM启动子／增强子能够调控报告基因的表达。结论hMAM启动子／增强子，在MDA—MB-415乳腺癌细胞具有调控基因表达的作用；
- 吴金香于建刚林德馨庄祥龙
- 关键词：乳腺癌人乳腺珠蛋白基因表达调控基因治疗
