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肽类毒素(蜘蛛、蝎、芋螺)的三维结构被引量：1: 2006年; 多肽类毒素研究是目前毒素研究的一个重点,对多肽类毒素的三维结构的研究是了解其结构与功能关系的重要基础.对蜘蛛、蝎以及芋螺这3类代表性的有毒动物的多肽类毒素在结构研究方面的进展及其三维结构的特点进行了介绍.其中,蜘蛛毒素多肽分子的结构主要发现有ICK模体(Inhibitor Cystine Knot motif)和D DH模体(disulfided-irectedh-airpin)两类,蝎毒素中长链肽类毒素分子和短链肽类毒素分子的结构明显不同,前者以CSα/β结构模体(Cyss-tabilizedα/βfold m otif)为主,后者则以α/β脚手架结构模体(α/βscaffoldm otif)为主.相对于蜘蛛和蝎而言,芋螺肽类毒素分子的三维结构则表现得更为复杂多样.; 廖智梁宋平; 关键词：二硫键

敬钊毒素-V突变体K12A-JZTX-V的化学合成与氧化还原复性: 2008年; 敬钊毒素-V(Jingzhaotoxin-V,JZTX-V)是从敬钊缨毛蛛粗毒中纯化到的一种新型河豚毒素不敏感型钠通道抑制剂,由29个氨基酸残基组成,含有三对二硫键.为了深入研究该毒素的结构与功能关系,应用芴甲氧羰基(Fmoc)固相多肽化学合成方法合成了用丙氨酸(Ala)替代JZTX-V第12位赖氨酸残基的突变体K12A-JZTX-V,合成粗品经反相高效液相色谱分离纯化和MALDI-TOF质谱鉴定,证明化学合成是成功的.线性多肽经谷胱甘肽氧化复性后,复性产物经质谱测定其相对分子量为3549.63,比线性分子的理论分子质量低6,说明六个半胱氨酸已经配对形成了三对二硫键.; 曾雄智全妙华皮建辉梁宋平; 关键词：固相多肽合成突变体氧化复性

Lys4突变对敬钊缨毛蛛毒素-V钠通道活性的影响被引量：1: 2008年; 敬钊缨毛蛛毒素-V(jingzhaotoxin-V,JZTX-V)是从敬钊缨毛蛛粗毒中纯化到的一种新型河豚毒素不敏感型钠通道抑制剂,为了深入研究该毒素的结构与功能关系,应用芴甲氧羰基(Fmoc)固相多肽化学合成方法合成了用丙氨酸(Ala)替代JZTX-V第4位赖氨酸残基的突变体K4A-JZTX-V,合成线性多肽经反相高效液相色谱分离纯化后进行谷胱甘肽氧化复性.复性产物分别用MALDI-TOF/TOF质谱进行相对分子质量的鉴定,用膜片钳电生理方法进行电压门控钠通道抑制活性分析.研究结果表明,Lys4被Ala取代后,K4A-JZTX-V对大鼠背根神经节细胞膜上表达的河豚毒素敏感型(TTX-S)钠通道的抑制活性与天然JZTX-V基本相当,提示Lys4与JZTX-V对TTX-S钠通道的抑制活性关系不大;而K4A-JZTX-V对河豚毒素不敏感型(TTX-R)钠通道的抑制活性却比天然JZTX-V下降了约8.3倍,说明Lys4是JZTX-V与河豚毒素不敏感型钠通道抑制活性相关的氨基酸残基.; 曾雄智邓梅春彭莹魏文廷王贤纯梁宋平; 关键词：固相多肽合成突变体氧化复性膜片钳

一种新型人血小板聚集抑制剂的纯化与初步活性鉴定被引量：5: 2008年; 目的从敬钊缨毛蛛粗毒中纯化一种新型人血小板聚集抑制剂,并进行活性鉴定。方法采用阳离子交换与反相高效液相色谱法从敬钊缨毛蛛粗毒中分离到一种新型多肽组分,并命名为敬钊去整合素-I。采用基质辅助激光解析/电离飞行时间质谱测定分子量,用人血制备富含血小板的血浆并加入敬钊去整合素-I,采用血小板聚集仪测定二磷酸腺苷ADP诱导血小板聚集作用。结果从敬钊缨毛蛛粗毒中分离到一种新型多肽组分,其相对分子质量为3 631.42,对血小板具有明显抑制作用,但它对血小板聚集的作用受剂量的影响很大,总的趋势是较低浓度时促进血小板的聚集,较高浓度时则抑制血小板的聚集。结论敬钊去整合素-I是一种源于蜘蛛粗毒的新型人血小板聚集抑制剂,但其对血小板的影响在高浓度与低浓度时产生的效应相反,其准确的作用机制还有待深入研究。; 曾雄智徐敏梁宋平; 关键词：蜘蛛反相高效液相色谱质谱血小板活性鉴定

间斑寇蛛L.tredecimguttatus粗毒抗血清制备及其活性分析: 2006年; 间斑寇蛛Latrodectustredecimguttatus是世界上毒性最强的蜘蛛之一,其毒液中含有许多大分子物质,可用于制备抗血清。将粗毒过滤除菌后作为抗原,加弗氏佐剂背部皮下免疫豚鼠。加强免疫3次后经检测抗血清效价达到1:8,再次加强免疫后断颈处死豚鼠放血,分离血清,经饱和硫酸铵分级沉淀及阴离子交换柱层析纯化后,采用westernblot法检测抗体所在峰。离体大鼠输精管电刺激收缩反应实验及活体动物给药实验均表明抗体对毒素具有明显的中和作用。特异性间斑寇蛛毒素抗血清为治疗间斑寇蛛咬伤奠定了基础。; 晏晓军段志贵周远峰王贤纯梁宋平; 关键词：间斑寇蛛抗血清纯化

雷氏大疣蛛毒素-V的分离纯化与初步活性鉴定: 2007年; 雷氏大疣蛛(Macrothele raveni)是最近发现的异仿蛛科大疣蛛属的蜘蛛新种.雷氏大疣蛛毒素-V就是以该蜘蛛粗毒为原料,利用阴、阳离子交换层析和反相高效液相色谱分离纯化得到并命名的一种新型蜘蛛毒素.利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱仪分析得知它的相对分子质量为3133.48;通过初步活性研究证明雷氏大疣蛛毒素-V是一种昆虫专一性神经毒素.; 曾雄智梁宋平; 关键词：蜘蛛离子交换层析反相高效液相色谱

海南捕鸟蛛毒素-Ⅲ的固相化学合成和氧化复性: 2007年; 应用芴甲氧羰基(Fm o c)固相化学合成了海南捕鸟蛛毒素-Ⅲ,并优化了其最佳氧化复性条件。最佳的氧化复性条件为pH7.5的重蒸水溶液体系,样品质量浓度为0.1g/L,还原型谷胱甘肽和氧化型谷胱甘肽的浓度分别为1.0mm o l/L和0.1mm o l/L、L-A rg浓度为1.0m o l/L。复性产物经质谱测定其相对分子质量为3 607.68;与天然毒素等量混合后用高效液相色谱分析得到单一峰;膈神经-膈肌标本生理实验结果表明,合成的毒素具有与天然毒素相同的生物学活性,从而可确定二者在结构与功能上具有一致性。; 皮建辉全妙华曾雄智; 关键词：氧化复性反相高效液相色谱基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱

敬钊毒素-V剪切体Y1-JZTX-V的化学合成与氧化复性及其钠通道活性鉴定被引量：3: 2007年; 应用芴甲氧羰基(Fmoc)固相方法化学合成了敬钊毒素-V(JZTX-V)分子N-端酪氨酸残基剪切体(Y1-JZTX-V),并且通过反相高效液相色谱和质谱对不同条件下的氧化复性结果进行监测,从而得到该剪切体的最佳氧化复性条件:0.1mol/L Tris-HCl缓冲液、pH7.50、1mmol/L还原型谷胱甘肽(GSH)、0.1mmol/L氧化型谷胱甘肽(GSSG)、样品浓度为0.05mg/L、复性温度为4℃。膜片钳电生理实验结果显示敬钊毒素-V剪切体Y1-JZTX-V对大鼠背根神经节(DRG)细胞上表达的河豚毒素不敏感型(TTX-R)与河豚毒素敏感型(TTX-S)钠电流均有抑制作用,其半数抑制浓度(IC50)分别为(160±2.5)nmol/L和(39.6±3.2)nmol/L。与天然的敬钊毒素-V相比,该剪切体对大鼠DRG细胞上的TTX-S钠电流的抑制作用基本一致,但对TTX-R钠电流的抑制作用却大大降低,表明敬钊毒素-V分子N-端的酪氨酸残基是一个与TTX-R钠通道结合活性相关的氨基酸残基。; 全妙华曾雄智皮建辉邓梅春梁宋平; 关键词：化学合成复性钠离子通道

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