国家自然科学基金(31271053)
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
- 相关作者：区彩文陈敏生张建武吴智业邓菊更多>>
- 相关机构：南方医科大学广州医科大学广州市番禺区人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省中医药管理局基金更多>>
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- MiR-499促进MSCs心肌样细胞分化及其机制的初步探讨被引量：2
- 2014年
- 目的:探讨miR-499体外是否能诱导大鼠骨髓来源的间充质干细胞(MSCs)向心肌细胞分化,并验证其是否通过靶作用于结肠腺瘤样息肉(APC)调控WNT信号通路发挥作用。方法:在MSCs中过表达miR-499后,Q-RT-PCR检测心肌特异性基因GATA4、Nkx2.5、cTnI及miR-499及其靶基因APC的表达情况,双荧光素酶报告系统验证靶基因APC。结果:niR-499、GATA4、Nk2.5、cTnI表达明显上调(P<0.05),但APC表达无明显差异(P=0.3);双荧光素酶报告系统结果显示与转染空载体组比较荧光素酶活性无明显变化(P=0.37);结论:miR-499可促进MSCs向心肌样细胞分化,但不通过靶作用于APC发挥促分化作用。
- 邓菊区彩文张建武吴智业刘启才陈敏生
- 关键词：MICRORNA骨髓间充质干细胞心肌样细胞WNT信号转导通路
- 小分子水凝胶结合腺病毒介导的肝细胞生长因子基因修饰对大鼠骨髓间充质干细胞生物学特性的影响
- 2013年
- 目的 观察小分子水凝胶（SMH）结合腺病毒（Ad）介导的肝细胞生长因子（HGF）基因修饰对大鼠骨髓间充质干细胞（MSC）生物学特性的影响.方法 取第9代MSC株进行实验,分为普通培养下MSC对照组（MSC组）、普通培养下转染Ad-HGF的MSC组（Ad-HGF＋MSC组）、在SMH中培养的转染Ad-HGF的MSC组（SMH＋Ad-HGF＋MSC组）、在SMH中培养的MSC组（SMH＋MSC组）.将Ad-HGF转染MSC,48 h后流式细胞仪检测转染率.采用实时定量PCR检测MSC组、Ad-HGF＋MSC组、SMH＋Ad-HGF＋MSC组细胞转染48 h后的mRNA水平.采用ELISA法测定Ad-HGF＋MSC、MSC、Ad-EGFP＋MSC、SMH＋Ad-HGF＋MSC组细胞上清液中HGF蛋白的含量,持续至转染后23 d.普通显微镜观察比较MSC组、SMH＋MSC组、Ad-HGF＋MSC组、SMH＋Ad-HGF＋MSC组细胞在转染继续培养7d后的形态.MTT法检测各组细胞1～7d的生长情况,绘制生长曲线.流式细胞仪检测转染2周后各组细胞表面标志物和细胞周期.各组细胞在5-aza诱导24 h后继续培养3周,免疫荧光化学检测细胞向心肌样细胞分化的能力情况.结果 Ad-HGF转染MSC 48 h后,转染率为74.7％.转染后48 h,MSC组Ct值为14.99;SMH＋Ad-HGF＋MSC组Ct值为8.38;Ad-HGF＋MSC组Ct值为8.51;转染两组均出现明确的HGF基因表达.Ad-HGF＋MSC组、SMH＋Ad-HGF＋MSC两组上清中均有HGF蛋白分泌,Ad-HGF＋MSC组转染后48 h含量达最高峰,为121 μg/L,持续至23 d.SMH＋Ad-HGF＋MSC组HGF含量高峰在第3天,达118μg/L,持续至23 d.MSC组、Ad-HGF＋MSC组细胞均呈成纤维细胞样生长,而转染或未转染Ad-HGF的MSC细胞在SMH水凝胶中三维培养时,细胞多为棒状,一些成球形,细胞之间的分支连接紧密,有聚集生长的趋势.Ad-HGF＋MSC组与MSC组细胞生长曲线相似,各时间点吸光度A值差异无统计学意义,生长趋势吻合.SMH＋MSC组与SMH＋Ad-HGF＋MSC组细胞生长速度前4d与MSC、Ad-HGF＋MSC组比较,吸光度A值差异均无统计学意义;4d后细胞的吸光度A
- 区彩文陈国钦张建武邓菊吴智业陈敏生
- 关键词：腺病毒肝细胞生长因子间质干细胞
