上海市科学技术委员会基础研究重点项目(05JC14013)
- 作品数：10 被引量：55H指数：5
- 相关作者：于颖彦朱正纲刘炳亚计骏刘卫仁更多>>
- 相关机构：上海交通大学医学院附属瑞金医院中国科学院同济大学附属东方医院更多>>
- 发文基金：上海市科学技术委员会基础研究重点项目国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- IRX1真核表达载体的构建及在胃癌细胞SGC-7901中的定位被引量：6
- 2009年
- 目的构建pEGFP—IRX1真核表达载体，体外转导至SGC-7901胃癌细胞株，观察IRX1基因转染后蛋白表达与细胞内定位。方法PCR扩增IRX1全长1443bp编码序列，将PCR扩增产物连接入pGEM-Teasy载体，经测序确认序列无误后，亚克隆入pEGFP—N1载体，构建pEGFP-IRX1真核表达载体。采用Lipofectamine2000转染SGC-7901胃癌细胞株，在荧光显微镜下观察外源性IRX1基因导入后在胃癌细胞内的表达与亚细胞定位。结果成功构建有绿色荧光蛋白融合的IRX1真核表达载体，外源性IRX1基因在胃癌SGC-7901细胞中表达成功，在荧光显微镜下IRX1表达蛋白定位于细胞核内。结论pEGFP—IRX1真核表达载体构建成功，并可在细胞内表达，这将为IRX1在胃癌内的功能研究奠定基础。
- 刘卫仁于颖彦倪培华吴建林计骏张佳年陈雪华刘炳亚朱正纲
- 关键词：胃癌真核表达载体
- 核因子-κB／p65反义寡核苷酸对胃癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制被引量：5
- 2008年
- 目的观察核因子（NF）-κB／p65反义寡核苷酸（ASODN）对胃癌细胞增殖和凋亡的影响。方法设计合成NF-κB／p65 ASODN，按照0．05、0．1、0，2、0．3、0，4、0．5μmol／L不同浓度转染胃癌SGC-7901细胞株，设正义寡核苷酸（SODN）、错义寡核苷酸（MSODN）和空白对照组进行比较。利用荧光染色观察转染效果，噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞生长抑制率（IR），流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡情况。结果与SODN、MSODN及对照组比较，ASODN组细胞增殖明显受到抑制（P〈0．05），72h IR为58.3％，且这种抑制作用呈浓度依赖性。FCM结果显示ASODN可诱导细胞的凋亡。结论NF-κB ASODN能抑制胃癌细胞生长，其机制与ASODN诱导的细胞凋亡有关，NF-κB可作为胃癌治疗的新靶点。
- 李琦于颖彦朱正纲刘炳亚王理伟林言箴
- 关键词：NF-ΚB胃肿瘤反义寡核苷酸类脱噬作用
- 胃癌5号染色体短臂杂合性缺失的精细作图及其相关基因探讨被引量：8
- 2006年
- 目的探讨胃癌5号染色体短臂（5p）微卫星标记杂合性缺失（LOH）与胃癌组织学表型的相关性。方法收集80例手术切除的胃癌标本及其配对正常胃黏膜组织。部分标本抽提基因组DNA，选用分布于5号染色体短臂上17个微卫星多态标记进行LOH分析；部分标本以10％中性福尔马林固定，石蜡包埋，进行常规切片染色，采用Lauren分型法进行组织病理学分型。结果5号染色体短臂17个微卫星标记的平均信息性病例比例为60．0％（48／80），35．0％（28／80）的病例至少一个位点检测到LOH。D5S2849位点（7．77eM）LOH频率最高，为35．2％（19／54）。5p最小丢失区域在6．67～9．41eM区间（涵盖2．7eM，1．18Mb），定位为5p15．33区，包括D5S417、D5S2849、D5S1492和D5S2088位点。28例携带LOH的病例中，24例（85．7％）为肠型胃癌，4例（14．3％）为弥漫型胃癌，肠型胃癌的LOH频率显著高于弥漫型胃癌病例（P〈0．01）。NCBI基因数据库检索显示，该区内含有IRX1、IRX2和CEI3个基因。结论5p15．33区发生的分子遗传学改变可能参与胃癌的形态分化和发展，使胃癌分化成肠型与弥漫型不同的组织学类型。5p15．33最小丢失区内的基因簇可能与胃癌，尤其是肠型胃癌的发生发展相关。
- 于颖彦计骏陆云步磊刘炳亚朱正纲林言箴
- 关键词：胃癌5号染色体相关基因
- 同源盒基因在胃肠道发育与胃肠道肿瘤发生中的作用
- 2006年
- 同源盒基因分为HOX基因和Para-HOX基因两大类。作为一类高度保守的基因家族,其在胚胎发育过程中发挥了重要作用;近年来它与肿瘤的关系也受到越来越多的关注。此文对同源盒基因在胃肠道发育及胃肠道肿瘤发生中的作用作一综述。
- 潘玉申于颖彦朱正纲
- 关键词：同源盒基因HOX基因胃肠道发育胃肠道肿瘤
- 胃癌中IRX1基因的表达及生物信息学功能预测被引量：4
- 2006年
- 目的:研究胃癌中同源盒基因IRX1的表达并分析该基因的结构与功能特征。方法:从NCBI基因数据库中提取IRX1基因(NM-024337)编码序列及5'端转录起始点上、下游各3,000bp,利用生物信息学程序进行基因结构与蛋白同源性分析;对7株人胃癌体外培养细胞株及57例胃癌采用半定量RT-PCR方法检测IRX1基因mRNA表达。结果:IRX1基因转录起始点上游富含CpG岛;基因编码蛋白质含有HOX与IRO两个模序,3'端第400～450氨基酸为富含脯氨酸区域;IRX1～IRX6为高度同源性蛋白。7株胃癌细胞株中4株IRX1表达消失,3株表达降低。57例正常胃粘膜有IRX1mRNA表达,但对应的胃癌组织中20例(35.09%)mRNA表达下降,其中肠型胃癌占65%。结论:IRX1基因在胃癌中呈不同程度的表达下调,并与胃癌的形态学表型,尤其是肠型胃癌明显相关。IRX1基因转录起始点上游存在高甲基化结构基础。
- 于颖彦计骏潘玉申刘炳亚朱正纲林言箴
- 关键词：胃肿瘤基因基因表达生物信息学
- 低温冻存时间对肿瘤组织生物大分子的影响被引量：17
- 2009年
- 目的:探讨低温冻存时间对生物大分子DNA、RNA及蛋白质的影响,观察经长期低温冻存的肿瘤样本是否仍可满足科研的需求。方法:选择上海交通大学医学院附属瑞金医院上海消化外科研究所肿瘤样本库内2002至2006年间收集的手术切除胃癌标本20对(包括肿瘤组织及配对正常组织),用于提取组织总蛋白质和核酸,二喹啉甲酸(BCA)法测定蛋白浓度,采用凝胶电泳鉴定RNA、DNA完整性。采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测核转录因子-κB(NF-κB)亚单位P65的mRNA表达;蛋白印迹(Western blot)法检测NF-κB蛋白表达。另随机抽取46例胃癌标本,检测其NF-κBP65的单核苷酸多态性(SNP)位点变异。结果:所有抽提DNA的吸光度比值(A260/A280)均在1.7～2.1间,电泳条带清晰,可检测出SNP位点变异。与保存1～2年者相比,储存3年或以上的标本NF-κBP65 mRNA与蛋白表达均有下调(P=0.03,P<0.01)。结论:组织样本低温保存在5年范围内,其DNA分子的完整性与质量均未受影响;RNA与蛋白质分子在低温保存1～2年内尚不影响癌基因表达的分析结果,但低温保存3年或以上的标本中RNA及蛋白质均有不同程度降解。
- 张佳年于颖彦计骏刘卫仁吴建林陈雪华刘炳亚朱正纲
- 关键词：肿瘤标本技术方法癌基因生物大分子低温冻存
- 肿瘤组织库建立的进展及意义被引量：19
- 2009年
- 收集高质量的人类肿瘤组织及以血液为主的体液样本是发现新型肿瘤生物标志物及药物作用新靶点的物质基础。高质量的生物样本也是决定转化医学研究的重要限速性因素。美国、加拿大、英国、法国等均已建立完备的肿瘤样本库。
- 于颖彦刘炳亚朱正纲
- 关键词：肿瘤病理学
- 生物芯片在胃癌药物病理学研究中的先导作用被引量：3
- 2007年
- 生物芯片是后基因组时代医学研究中的重要手段,其在转录组、蛋白质组与肿瘤功能基因组研究中的作用日益突出。基因芯片、蛋白芯片与组织芯片构成了生物芯片的主体,该技术有望在胃癌特异性标志物发现上发挥作用。药物病理学是临床病理学领域的新兴分支学科,其主要工作是利用病理学手段识别肿瘤组织存在的分子靶点,为临床针对性靶向治疗提供用药依据。
- 于颖彦
- 关键词：蛋白芯片组织芯片胃癌肿瘤标志物
- 胃癌中IRX1基因的表达及生物信息学功能预测
- 2007年
- 目的研究胃癌中同源盒基因IRX1的表达并分析该基因的结构与功能特征。方法从NCBI基因数据库中提取IRX1基因(NM-024337)编码序列及夕端转录起始点上、下游各3000bp,利用生物信息学程序进行基因结构与蛋白同源性分析;对7株人胃癌体外培养细胞株及57例胃癌采用半定量RT-PCR方法检测IRX1基因mRNA表达。结果IRX1基因转录起始点上游富含CpG岛;基因编码蛋白质含有HOX与IRO两个模序,3端第400～450氨基酸为富含脯氨酸区域;IRX1～IRX6为高度同源性蛋白。7株胃癌细胞株中4株IRX1表达消失,3株表达降低。57例正常胃黏膜有IRX1mRNA表达,但对应的胃癌组织中20例(35.09%)mRNA表达下降,其中肠型胃癌占65%。结论IRX1基因在胃癌中呈不同程度的表达下调,并与胃癌的形态学表型,尤其是肠型胃癌明显相关。IRX1基因转录起始点上游存在高甲基化结构基础。
- 于颖彦计骏潘玉申
- 关键词：胃肿瘤基因基因表达生物信息学
- 胃癌4q28位点杂合性缺失的研究与候选基因FAT4表达的验证被引量：2
- 2009年
- 目的:研究胃癌组织中4q28位点杂合性缺失(LOH)的频率,并验证该位点候选基因FAT4mRNA表达情况。方法:在4q28位点选择与FAT4连锁的2个微卫星标记D4S2975和D4S1644,应用PCR产物毛细管电泳法分析68例手术切除的胃癌标本中这2个微卫星位点的LOH频率;应用RT-PCR法验证9个胃癌细胞株及39例新鲜胃癌加配对正常组织中该位点FAT4mRNA的表达水平。将相关检测结果与多种临床病理参数进行比较分析。结果:68例胃癌组织中D4S2975和D4S1644位点的LOH频率分别为35.56%(16/45)和40.74%(11/27),2个微卫星位点平均LOH频率为38.15%。检测39例新鲜胃癌及配对正常组织的FAT4mRNA表达水平,其中12例(30.77%)胃癌组织的FAT4mRNA表达较其配对正常组织明显下降。经与多种临床病理参数比较分析发现,FAT4mRNA表达下调与胃底贲门部胃癌密切相关(P=0.029),40岁以下青年型胃癌有FAT4表达丢失倾向,但差异无统计学意义(P=0.095)。结论:胃癌中4q28位点存在较高频率的LOH,对该位点内候选抑癌基因FAT4mRNA表达验证显示,部分胃癌组织存在FAT4表达下调,该基因下调与胃癌的发生部位及患者年龄间可能存在一定关系。
- 吴建林刘卫仁于颖彦计骏张佳年陈雪华刘炳亚朱正纲
- 关键词：胃肿瘤基因表达杂合性缺失
