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日本血吸虫(中国大陆株)若干酶类基因的发现被引量：8: 2001年; 目的　运用表达序列标签 (EST)技术 ,从日本血吸虫 (Schistosomajaponicum ,Sj)cDNA文库中分离、鉴定出有潜在应用价值的血吸虫基因序列。方法　应用EST方法 ,从日本血吸虫cDNA文库中随机挑选出单个重组克隆 ,PCR扩增出插入片段 ,并进行PCR产物直接测序 ;将获得的序列资料与EBI和GenBank进行BLASTn和BLASTx同源性检索 ,对可能的酶类基因序列进行分析。结论　采用EST策略 ,可获得日本血吸虫 (中国大陆株 )若干酶类基因序列EST ,为进一步的cDNA全长扩增和克隆奠定基础。; 李晖婷余新炳吴忠道李焱包俊英邵筱; 关键词：日本血吸虫中国大陆株 CDNA文库表达序列标签

日本血吸虫未知基因的原核表达载体的构建和表达分析(英文)被引量：1: 2002年; 目的　构建日本血吸虫未知基因的原核表达载体 ,研究基因性质。　方法　首先将从日本血吸虫成虫 c DNA文库中筛选得到的未知基因 c DNA JAYL0 2 30亚克隆入原核表达载体 p ET2 8a(+)中 ,IPTG诱导重组蛋白的表达 ,免疫印记实验检测其免疫性质。　结果　成功构建重组原核表达载体 p ET2 8a(+) - JAYL0 2 30 ,并获得稳定表达的融合蛋白 ,免疫印记实验证明该融合蛋白具有免疫反应性。; 李焱余新炳吴忠道马长玲胡旭初; 关键词：日本血吸虫未知基因原核表达

日本血吸虫精氨酸酶的cDNA序列分析被引量：5: 2001年; 目的　对获得的日本血吸虫 (Schistosomajaponicum ,Sj)精氨酸酶基因cDNA序列进行二级结构预测。方法　采用生物信息学等技术对获得的Sj精氨酸酶编码基因序列进行开放读框 (ORF)的寻找 ,编码氨基酸的推导 ,蛋白质同源性比较以及二级结构的预测。结果　获得的cDNA序列为 10 6 1bp ,含有一个 840bp的阅读框 ,编码 2 79个氨基酸 ,属精氨酸酶家族 ,与国际蛋白质库中的酵母、蛙、人和大鼠精氨酸酶序列的同源性分别为 44 % ,5 0 % ,5 1% ,5 3%和 5 4%。Sj精氨酸酶氨基酸序列的 β转角、亲水性、平均可塑性和无规则卷曲的分布主要出现在N -末端AA残基 30～ 5 0 ,70～ 90和 180～ 2 0 0等 3个区域 ,是潜在的抗原表位。结论　推测Sj精氨酸氨基酸酶具有较好的抗原性。; 吴忠道李焱徐劲余新炳; 关键词：日本血吸虫精氨酸酶 CDNA序列抗原表位生物信息学

日本血吸虫新基因精氨酸酶的扩增及序列分析被引量：3: 2004年; 目的　获取并真核克隆日本血吸虫新基因精氨酸酶全长cDNA。方法　对本实验室曾获得精氨酸酶基因利用生物信息学进行分析 ,发现其 5’端尚缺一段序列 ;根据已知序列设计引物 ,用 5’端单巢式PCR从尾蚴文库中扩增 ,以获得精氨酸酶基因完整的阅读框 (ORF) ;用生物信息学技术对获得的精氨酸酶编码基因进行结构与功能的分析 ;并将新基因的完整编码阅读框克隆入真核表达载体pCDNA3 1。结果　用 5’端单巢式PCR从尾蚴文库中获得了精氨酸酶 5’端所缺序列 ,得到其完整的ORF ,其ORF长 10 95bp ,编码 36 4个氨基酸。利用生物信息学技术鉴定其为日本血吸虫精氨酸酶的完整cDNA序列。重组质粒经双酶切DCR及测序鉴定证明日本血吸虫精氨酸酶真核表达质粒构建成功。结论　成功获得、识别、扩增并克隆日本血吸虫精氨酸酶编码基因的全长cDNA。; 李孜余新炳吴忠道徐劲彭寨玉田春林赵霞; 关键词：日本血吸虫中国大陆株精氨酸酶克隆

日本血吸虫(中国大陆株)成虫表达序列标签的获取及新基因的发现被引量：8: 2001年; 目的　运用表达序列标签 (ExpressedSequenceTag ,EST)技术快速、经济地发现日本血吸虫 (中国大陆株 )新基因。方法　随机挑取日本血吸虫 (中国大陆株 )成虫cDNA文库单个重组克隆进行部分测序以获得EST ,获得的EST通过BLAST程序同EMBL寄生虫数据库和GenBank数据库进行比较及同源性分析。结果　本研究共随机挑取日本血吸虫 (中国大陆株 )成虫cDNA文库单个重组克隆 2 0 0个 ,获得了 76个有EST价值的序列 ,其中 7.9%为日本血吸虫已知序列 ,5 .3 %为日本血吸虫同源序列。曼氏血吸虫或其他生物的同源序列占有EST价值的序列的 2 2 .4 % ,未知序列占 5 9.2 %。在获得的76个有EST价值的序列中 ,66个成功在GenBankdbEST中登录。通过同源性分析 ,发现了一些令人感兴趣的基因。结论　EST方法有助于快速、经济地发现日本血吸虫 (中国大陆株 )成虫新基因。; 卞国武余新炳吴忠道徐劲单志新马长玲; 关键词：日本血吸虫 CDNA文库表达序列标签

应用EST和电子克隆策略研究血吸虫表达基因谱被引量：15: 2005年; 目的开展血吸虫表达基因谱的研究,寻找新的疫苗候选分子和药物靶标。方法应用表达序列标签(EST)和电子克隆策略。结果获得了552个EST序列和487个电子延伸序列,其中104个EST序列在延伸前未表现同源性,而延伸后表现出有意义的同源性;获得了日本血吸虫基因表达谱的信息以及发现了有潜在药物和疫苗价值的新基因序列。结论本研究为日本血吸虫基因表达谱的研究提供更有效的研究思路。; 邵筱吴忠道刘翰腾邹赛德余新炳; 关键词：日本血吸虫新基因表达序列标签电子克隆

日本血吸虫RNA聚合酶转录因子SⅢ-p15真核正反义表达载体的构建和鉴定被引量：5: 2002年; 目的　构建日本血吸虫 RNA聚合酶转录延长因子 S - p15真核正反义表达载体 ,为进一步鉴定该因子的生物学功能奠定基础。方法　采用表达序列标签法从日本血吸虫成虫 c DNA文库中获得了 1个 RNA聚合酶转录因子 (S - p15 )全长 c DNA序列 ,克隆及序列测定后 ,将该片段正向及反向插入到真核表达载体 pc DNA 3中。重组载体采用氨苄青霉素 L B培养基筛选、双酶切、PCR及测序鉴定。结果　经鉴定 ,S - p15 - pc DNA3真核正反义表达载体构建成功。结论　构建成功 S -p15 - pc DNA3真核正反义表达载体 ,为下一步鉴定其生物学功能奠定基础。; 包俊英吴忠道徐劲余新炳; 关键词：日本血吸虫反义DNA 真核表达载体

日本血吸虫翻译控制肿瘤蛋白(TCTP)基因真核表达质粒的构建及其序列分析被引量：3: 2004年; 目的　研究日本血吸虫翻译控制肿瘤蛋白 (TCTP)基因的生物学功能。方法　根据已公布的日本血吸虫 TCTP(Sj TCTP)基因序列设计引物 ,从日本血吸虫成虫 c DNA文库中扩增出TCTP基因 ORF序列 ,并克隆到真核表达载体 pc DNA3.0中。结果　通过 PCR扩增、双酶切及测序鉴定证实重组质粒 pc DNA3.0 - TCTP已正确插入 Sj TCTP基因 ORF序列 ,该序列具有 TCTP特征性 TCTP1和 TCTP2结构。结论　 Sj TCTP基因真核表达质粒构建成功 ,为研究 Sj; 阮志燕吴忠道李孜徐劲曹爱莲余新炳; 关键词：日本血吸虫基因克隆

日本血吸虫再感染相关蛋白基因的克隆和原核表达(英文): 2004年; 目的　从日本血吸虫 (S .japonicum )尾蚴文库扩增S .japonicum再感染相关蛋白 (RIRP)基因 ,进行克隆并原核表达出RIRP ,为进一步的功能研究奠定基础。　方法　根据已登陆的S .japonicum成虫期RIRP基因的序列设计两条特异引物 ,以S .japonicum尾蚴cDNA文库为模板扩增RIRP基因cDNA ,将该基因的cDNA克隆入原核表达载体 pGEX 4T 1和真核载体 pcD NA3 .1。转化的克隆通过氨苄青霉素的筛选、PCR扩增、双酶切和最后的测序鉴定。重组的 pGEX 4T 1/RIRP在大肠埃希菌BL2 1(DE3 )中进行表达。SDS PAGE鉴定其在大肠埃希菌中的表达情况和分子质量。用抗 2 6kuGST单抗作western杂交进一步鉴定融合蛋白的表达。　结果　从S .japonicum尾蚴文库中扩增出一条长为 462bp的cDNA片段 ,经测序证实其为RIRP基因的全长cDNA。它编码含 15 3个氨基酸的蛋白质—RIRP ,预测其分子质量单位为 17.5 45ku。RIRPcDNA已被成功克隆入 pGEX 4T 1和pcDNA3 .1载体 ,大肠埃希菌BL2 1(DE3 )编码一个约 17ku的蛋白质。　结论　RIRP基因首次从S .japonicum尾蚴文库中扩增出来 ,并成功构建了原核和真核表达载体 ,而且 ,它首次由大肠埃希菌表达 ,表达蛋白的分子质量单位约 17ku。; 李孜余新炳吴忠道徐劲阮志燕; 关键词：克隆

日本血吸虫TCTP编码基因DNA免疫的效果评价被引量：1: 2008年; 目的评价pEGFP-TCTP真核重组质粒联合免疫佐剂CpG诱导小鼠保护性免疫的效果。方法构建日本血吸虫TCTP真核重组质粒,将pEGFP-TCTP注射入BABL/c小鼠,采用ELISA法检测免疫小鼠血清中IFN-γ水平;尾蚴攻击感染后45d处死小鼠,收集成虫和虫卵,计算减虫率和减卵率;小鼠肝脏送病理切片,计算虫卵肉芽肿的数量。结果TCTPDNA免疫保护性效果显示:实验组与阴性对照组相比,显示出一定的保护性效果,TCTP组的减虫率和减卵率分别为43.91%和53.48%,与GST组效果相似。DNA免疫后及感染后期,TCTP组与PBS对照组血清IFN-γ水平有显著性差异(P<0.05);攻击感染前后组间比较发现,GST组和GST+CpG组有显著性差异(P<0.05),提示CpG显著提高了DNA免疫的效果。结论SjTCTPDNA免疫能诱导较明显的保护性Th1免疫应答,CpG基序可以有效的诱导保护性Th1免疫应答,是一种有效的DNA免疫佐剂。; 阮志燕吴忠道曹爱莲; 关键词：日本血吸虫 CPG基序 DNA免疫

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