浙江省“钱江人才计划”(2009R10030)
- 作品数：2 被引量：13H指数：1
- 相关作者：汪琨崔志峰朱廷恒冯娟张剑云更多>>
- 相关机构：浙江工业大学更多>>
- 发文基金：浙江省“钱江人才计划”浙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)基因组中T-DNA整合模式分析被引量：1
- 2011年
- 【目的】研究灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)基因组中T-DNA插入位点的整合模式特征。【方法】利用农杆菌(Agrobactirium tumfacience)介导法构建灰葡萄孢菌T-DNA插入突变体库。利用热不对称交错PCR(TAIL-PCR)技术对转化子中T-DNA的旁侧序列进行扩增和克隆,对获得的旁侧序列进行比对分析。【结果】T-DNA插入在灰葡萄孢菌基因组非编码区的占69%,插入在外显子的占30%。T-DNA在插入的过程中发生了碱基缺失、增加等重组现象,其中左边界(left border,LB)整合到基因组碱基缺失较少,有的保持完整,而右边界(right border,RB)及其近邻的T-DNA区域缺失碱基较多。T-DNA的插入位点还发现有额外的序列插入。【结论】对灰葡萄孢菌中插入T-DNA的整合模式的分析为开展该菌的功能基因组学奠定了基础。
- 刘佳张剑云朱廷恒汪琨崔志峰
- 关键词：灰葡萄孢T-DNATAIL-PCR
- 农杆菌介导的灰葡萄孢T-DNA插入突变体库构建及插入位点分析被引量：12
- 2010年
- 【目的】利用农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导法对灰葡萄孢(Botrytis cinerea)进行转化,构建T-DNA插入突变体库,为从分子水平上认识灰葡萄孢的致病机制打下基础。【方法】以含有pCAMBIA 1390双元载体的农杆菌对灰葡萄孢进行转化,利用潮霉素进行筛选。对抗性稳定的转化子进行生物学和形态学观察,采用离体番茄叶片进行致病性测定。利用TAIL-PCR技术对突变体中T-DNA的旁侧序列进行克隆。【结果】得到了一些突变体,表现为生长速率减缓、产孢能力下降、致病力减弱等。克隆并分析了其中一个突变体中T-DNA插入的位置和旁侧序列。【结论】本实验建立了农杆菌介导的灰葡萄孢转化体系,构建了T-DNA插入的灰葡萄孢突变体库。用TAIL-PCR进行突变体中T-DNA旁侧序列的分析是可行的。
- 冯娟朱廷恒崔志峰汪琨
- 关键词：灰葡萄孢农杆菌介导
