广西壮族自治区自然科学基金(0640153)
- 作品数：2 被引量：27H指数：2
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- 相关机构：广西中医学院附属瑞康医院广西中医学院更多>>
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- 密度梯度离心与贴壁法相结合体外分离培养兔骨髓基质干细胞:1～3代细胞生长特性被引量：15
- 2007年
- 目的:采用密度梯度离心与贴壁培养相结合的方式,对兔骨髓基质干细胞进行体外分离、培养和扩增。方法:实验于2006-11/2007-08在广西医科大学完成。①实验方法:取6周龄大白兔8只,麻醉后切开皮肤充分暴露下肢骨,无菌条件下穿刺股骨干骺端,抽吸骨髓液约12mL,以等体积磷酸盐缓冲液稀释,注入含有等体积人淋巴细胞分离液的离心管中,离心收集中间云雾状细胞层,磷酸盐缓冲液洗涤,去除多余的脂肪细胞及组织液,加入适量的含双抗的10%胎牛血清DMEM培养液吹打制成细胞悬液,离心后弃上清,以1×108L-1密度接种于培养瓶中,37℃、体积分数为0.05的CO2饱和湿度培养。48h后首次换液,弃去未贴壁或已死去的细胞,隔日换液。至8～12d贴壁细胞融合为单层时胰蛋白酶消化传代。②实验评估:用倒置相差显微镜观察每天细胞的生长情况。取第1～5代处于对数生长期的细胞,计算贴壁率,同时绘制细胞生长曲线。结果:①兔骨髓基质干细胞生长情况及形态学特点:原代培养8h骨髓基质干细胞开始贴壁生长,其他杂质细胞悬浮于培养基中;3d后贴壁细胞逐渐变为梭形并且增大,少数细胞呈现多角形,高倍镜下可见细胞质丰富,细胞较大,呈椭圆形,轮廓清晰,核内可见核仁存在;1周后大部分细胞贴壁延伸,体积变大,数目增多,多呈长梭形或三角形;第12天细胞呈集落生长。第1～3代兔骨髓基质干细胞体外培养生长稳定,增殖迅速,细胞形态基本相同。第4代细胞体积始增大,胞内有颗粒样物质出现。第5代细胞体积更大,细胞呈椭圆形改变,部分细胞开始脱落死亡,增殖能力较前4代明显下降。②细胞贴壁率:接种后12h第1～3代细胞贴壁率为95%,第4代细胞贴壁率为88%,至第5代细胞贴壁能力差,贴壁率仅为72%。③细胞生长曲线:第1～3代细胞生长曲线基本相同,第4,5代细胞长势均明显下降。结论:采用密度梯度离
- 潘华王大伟李红波张志伟
- 关键词：骨髓基质干细胞细胞分离细胞培养
- 三七总皂苷对酒精诱导骨髓基质干细胞分化影响的实验研究被引量：13
- 2008年
- 目的:三七总皂苷能阻断受体操纵性钙通道,增强一氧化氮的扩张血管作用,改善微循环,具有抗缺血再灌注损伤的作用,关于三七总皂苷对酒精性骨坏死防治作用的研究尚少。实验拟观察三七总皂苷对酒精诱导兔骨髓基质干细胞成脂分化的抑制作用。方法:实验于2006-11/2007-08在广西医科大学完成。①实验材料:三七总皂苷由江苏康宝制药有限公司提供(国药准字Z32020670)。4周龄大白兔由广西医科大学实验动物中心提供,清洁级,实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准。②实验方法:采用密度梯度离心法与贴壁法相结合体外分离、培养兔骨髓基质干细胞。取第3代细胞,并随机分为3组:空白组:细胞在含10%胎牛血清DMEM培养基中培养,不加酒精和三七总皂苷;模型组:每次更换培养液时加酒精0.09mol/L;50mg/L三七总皂苷组:每次更换培养液时,加0.09mol/L酒精与三七总皂苷50mg/L;100mg/L三七总皂苷组:每次更换培养液时,加酒精0.09mol/L与三七总皂苷100mg/L。③实验评估:检测细胞内三酰甘油含量与碱性磷酸酶活性。结果:①干预14d时,模型组细胞内碱性磷酸酶活性降低,明显低于三七总皂苷干预组和空白组(P<0.05)。三七总皂苷干预两组细胞内碱性磷酸酶活性,与空白组比较差异无统计学意义(P>0.05)。②干预21d时,模型组脂滴最多,三七总皂苷干预两组较模型组明显减少(P<0.05),空白组未见明显脂滴出现。③三七总皂苷干预组和空白组三酰甘油含量差异无统计学意义(P>0.05),三七总皂苷干预组和空白组细胞内三酰甘油含量低于模型组细胞内三酰甘油含量(P<0.05)。结论:三七总皂苷能抑制酒精诱导的兔骨髓基质干细胞成脂分化,而促进成骨分化,可能有治疗酒精性骨股头缺血性坏死的作用。
- 王大伟潘华李红波王换新陈跃平顾国龙
- 关键词：三七总皂苷酒精成脂分化
