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国家自然科学基金(30871752)

作品数:32 被引量:91H指数:6
相关作者:刘志刚夏立新闫浩易海涛邬玉兰更多>>
相关机构:深圳大学深圳出入境检验检疫局华南理工大学更多>>
发文基金:国家自然科学基金深圳出入境检验检疫局科技计划项目国家质检总局科技计划项目更多>>
相关领域:生物学医药卫生轻工技术与工程更多>>

文献类型

  • 32篇中文期刊文章

领域

  • 17篇生物学
  • 16篇医药卫生
  • 4篇轻工技术与工...

主题

  • 10篇克隆
  • 10篇花生
  • 10篇ARA
  • 7篇免疫
  • 6篇基因
  • 6篇过敏
  • 5篇蛋白
  • 5篇免疫学
  • 5篇免疫学鉴定
  • 5篇克隆表达
  • 5篇基因克隆
  • 5篇纯化
  • 4篇原核表达
  • 4篇致敏原
  • 4篇H2
  • 4篇变应原
  • 4篇H
  • 3篇大细胞
  • 3篇印迹
  • 3篇原核

机构

  • 31篇深圳大学
  • 4篇深圳出入境检...
  • 1篇南昌大学
  • 1篇华南理工大学
  • 1篇中南大学湘雅...
  • 1篇中山火炬职业...

作者

  • 30篇刘志刚
  • 17篇夏立新
  • 12篇闫浩
  • 9篇易海涛
  • 6篇邬玉兰
  • 5篇吴序栎
  • 4篇汤慕瑾
  • 4篇赵郭存
  • 4篇张强
  • 4篇刘芳
  • 3篇刘晓宇
  • 3篇李建杰
  • 3篇李荔
  • 3篇杨成彬
  • 3篇肖杰
  • 3篇黄钟
  • 3篇陈家杰
  • 2篇邹菊
  • 2篇徐宏
  • 2篇孔小丽

传媒

  • 7篇江西师范大学...
  • 5篇免疫学杂志
  • 3篇中华微生物学...
  • 2篇中国免疫学杂...
  • 2篇食品科技
  • 2篇中国公共卫生
  • 2篇深圳大学学报...
  • 1篇江西农业大学...
  • 1篇食品工业科技
  • 1篇食品科学
  • 1篇中国油料作物...
  • 1篇南昌大学学报...
  • 1篇Biomed...
  • 1篇中国生物工程...
  • 1篇食品与生物技...
  • 1篇中国病原生物...

年份

  • 7篇2012
  • 14篇2011
  • 8篇2010
  • 3篇2009
32 条 记 录,以下是 1-10
排序方式:
平榛主要过敏原Corh1单克隆抗体的制备与鉴定被引量:1
2011年
目的制备和鉴定鼠抗平榛主要变应原Cor h 1的单克隆抗体(Monoclonal Antibody,McAb)。方法用重组Cor h 1蛋白为免疫原,免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤NS-1细胞融合。通过间接ELISA法筛选分泌特异性McAb的杂交瘤细胞。用杂交瘤细胞株诱导小鼠产生腹水,再用蛋白A亲和层析法纯化抗体。采用Ig类与亚类鉴定试剂盒鉴定该单克隆抗体的Ig亚型;通过间接ELISA、Western Blotting鉴定该McAbs的特性和交叉性。结果获得4株可稳定分泌鼠抗平榛主要变应原Cor h 1的McAbs,其Ig亚型均为IgG1,均具有良好的效价;ELISA和Western Blotting分析表明该4株单抗均能识别重组Cor h 1蛋白,其中3株单抗能够识别天然平榛提取物。结论成功制备了4株鼠抗平榛主要变应原Cor h 1的单克隆抗体,为建立平榛主要变应原Cor h 1检测及纯化方法奠定了基础。
赵郭存张强邹菊黄钟刘志刚
关键词:主要变应原单克隆抗体杂交瘤细胞交叉性
花生过敏原Ara h 8的克隆表达、纯化及免疫学鉴定被引量:3
2011年
目的:克隆花生主要过敏原Ara h 8基因,表达并纯化该蛋白,检测其免疫活性。方法:提取花生总RNA,设计特异性引物,RT-PCR克隆花生Ara h 8基因;将反转录的基因连入pMD19-T Simple Vector,提质粒酶切鉴定并测序。将测序正确的片段连入原核表达载体pET-32a(+)上,并转入BL21(DE3)宿主表达菌中;IPTG诱导表达;通过Ni2+亲和层析(FPLC)纯化目的蛋白Ara h 8;Western blot检测该重组蛋白的免疫原性。结果:测序结果表明克隆的花生Ara h 8基因片段全长为474 bp,编码157个氨基酸,与GenBank中蛋白序列100%相同。重组蛋白纯化后经SDS-PAGE鉴定,目的蛋白大小与理论值相符。Western blot结果表明该蛋白与花生过敏病人混合血清中IgE结合,具有免疫原性。结论:成功克隆并表达纯化了花生过敏原Ara h 8,该基因表达的重组蛋白具有良好的免疫原性。
易海涛刘志刚刘芳闫浩汤慕瑾肖小军夏立新
关键词:ARAH克隆表达纯化免疫印迹
经合理的序列重组制备花生主要过敏原Ara h 2低致敏衍生物被引量:4
2011年
目的:构建经序列重组的Ara h 2表达载体,表达并纯化该蛋白,鉴定其低致敏原性。方法:根据已鉴定的Ara h 2 IgE抗原表位,利用基因工程技术将Ara h 2基因进行合理的组合,并将其序列进行合成,再将合成后的基因连入原核表达载体pET-32a(+)上,然后转入Origami宿主表达菌中;IPTG诱导表达;通过Ni2+亲和层析(FPLC)纯化目的蛋白;Western blotting和ELISA鉴定该重组蛋白的低致敏原性。结果:测序结果表明合成后的序列成功转入原核表达载体pET-32a(+)上。重组蛋白纯化后经SDS-PAGE鉴定,目的蛋白大小与理论值相符。Western blotting和ELISA结果均表明通过基因工程改造的Ara h 2蛋白(S-Ara h 2)与重组的Ara h 2(R-Ara h 2)蛋白相比,结合花生过敏病人混合血清中IgE显著降低。结论:成功构建了经序列重组的Ara h 2表达载体,该基因表达的重组蛋白具有良好的低致敏原性,这将会为花生过敏患者的脱敏治疗提供了新的安全疫苗基础。
易海涛刘芳夏立新闫浩刘飞燕李建杰刘志刚
关键词:花生H疫苗
时间分辨免疫荧光法测定食物中花生过敏原成分被引量:1
2010年
目的:建立双抗体夹心时间分辨荧光免疫法[Time-resolved Fluoroimmunoassay(TRFIA)]测定食物中花生过敏原蛋白成分,为进出口食品中花生过敏原成分检测和由花生导致的食物过敏性疾病的预防提供技术基础。方法:提取花生蛋白,免疫小鼠制备抗花生总蛋白的多克隆抗体,用该抗体包被酶标板,并用生物素标记该多抗作为捕捉抗体,Eu3+标记的链酶亲和素和以β-二酮体为主的增强液等试剂,建立双抗夹心TRFIA方法,检测该方法的灵敏度,同时用于13种食品中花生过敏原蛋白成分检测。结果:初步地研制出双抗体夹心TRFIA法检测食品中花生过敏原蛋白成分,具有特异性,和其最低检出限为0.1ng/mL,标准曲线在0.1~160ng/mL范围内线性良好;11种食品检测结果与食物过敏原标签标注内容相符,而2种标示不详的食品检测结果均呈现阳性。
刘志刚李佳娜顾耀亮夏立新陈家杰
关键词:时间分辨荧光免疫法花生过敏原多克隆抗体食物过敏
花生主要过敏原Ara h1的纯化被引量:8
2011年
采用硫酸铵沉淀及凝胶过滤层析方法,纯化花生主要过敏原蛋白Ara h1,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结合免疫印迹实验(Western-Blotting)进行鉴定。结果表明:可纯化出纯度90%以上的Ara h1过敏原蛋白。
吴序栎肖杰刘志刚吕志平刘骏杰
关键词:花生ARAH1蛋白纯化过敏
鸡蛋主要过敏原卵类粘蛋白基因的克隆及原核载体构建与表达被引量:4
2009年
目的:本研究利用PET表达载体克隆,表达鸡蛋主要过敏原卵类粘蛋白基因,为鸡蛋过敏疾病的特异性诊断和治疗以及进一步的实验研究奠定了一定的基础。方法:提取鸡输卵管组织总RNA,利用RT-PCR技术扩增卵类粘蛋白基因(ovomucoid,OVM),并与已知序列进行同源性比较,将该片段连接入原核表达载体pET-28a,IPTG诱导表达目的蛋白。结果:成功克隆鸡蛋主要过敏原卵类粘蛋白(ovomucoid,OVM)的全长基因,该基因的开放阅读框长度为633bp(包括终止密码子),编码210个氨基酸,与GenBank提供的OVM基因序列同源性达99%。该序列编码的蛋白为小分子量蛋白,相对分子质量约为21kD,与理论值均相符。IPTG诱导表达后,SDS-PAGE分析表明目的蛋白在宿主大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达。结论:本研究采用体外重组的方法克隆出卵类粘蛋白基因,并实现在大肠杆菌中大量表达,这为后续鸡蛋食品基础性研究奠定基础。
陈大玮邬玉兰刘志刚吴序栎孔小丽
关键词:鸡蛋基因克隆原核载体
经基因工程改造的花生主要过敏原Ara h 2制备及其低致敏原性鉴定被引量:3
2011年
构建经基因工程改造的Ara h 2表达载体,表达并纯化该蛋白,鉴定其过敏原性。将花生主要过敏原Arah 2基因序列进行颠换,并将颠换后的序列进行合成,再将合成后的基因克隆到原核表达载体pET-32a(+)上,然后转入Origami宿主表达菌中;利用Isopropylβ-D-1-Thiogalactopyranoside(IPTG)诱导表达;通过Ni2+亲和层析纯化目的蛋白;Western blotting和ELISA鉴定该重组蛋白的过敏原性。测序结果表明合成后的序列成功整合到原核表达载体pET-32a(+)上。重组的目的蛋白纯化后经SDS-PAGE鉴定,蛋白大小与理论值相符。Western blotting和ELISA结果均表明经基因工程改造的Ara h 2(F-Ara h 2)蛋白与重组的Ara h 2(R-Ara h 2)蛋白相比,结合花生过敏患者混合血清中IgE显著降低。成功构建经基因工程改造的Ara h 2表达载体,初步的体外实验表明该基因表达的重组蛋白具有低致敏原性。
易海涛刘芳贾梦阳汤慕瑾曹小勇夏立新刘志刚
关键词:基因工程花生
设计和鉴定花生主要过敏原Ara h 2低致敏原衍生物
2011年
构建序列重新组合的Ara h 2表达载体,表达并纯化该蛋白,鉴定其低致敏原性。将Ara h 2基因进行合理的缺失和重排,并将重排后的基因T-Ara h 2克隆到原核表达载体pET-32a(+)上,然后转入Origami宿主表达菌中;再用IPTG诱导其表达;通过Ni2+亲和层析(FPLC)纯化目的蛋白;Western-blotting和ELISA鉴定该重组蛋白的低致敏原性。测序结果表明重排后的序列成功克隆到原核表达载体pET-32a(+)上。重组蛋白纯化后经SDS-PAGE鉴定,目的蛋白大小与理论值相符。Western-blotting和ELISA结果均表明:T-Ara h 2与重组的Ara h 2(R-Ara h 2)蛋白相比,结合花生过敏病人混合血清中IgE显著降低。成功构建了基因重排的Ara h 2表达载体,该重组蛋白具有良好的低致敏原性。
易海涛刘志刚夏立新
关键词:花生ARAH
蜜蜂主要变应原酸性磷酸酯酶基因的克隆及原核表达载体的构建
2010年
目的克隆蜜蜂Apis cerana cerana主要变应原酸性磷酸酯酶(Api m3)基因,构建其原核表达载体。方法根据已知序列设计带有酶切位点的特异性引物,以提取的蜜蜂总RNA为模板RT-PCR扩增目的基因,并进行序列分析。将基因片段亚克隆到PET-28a表达载体上。结果获得蜜蜂Api m3基因,构建了其原核表达载体。基因分析显示该基因全长1 167 bp,编码388个氨基酸,推测分子质量单位为45.279 9 ku,等电点为5.53。序列分析显示与Gen-Bank中已知基因的同源性为97%。结论成功克隆蜜蜂Api m3基因并构建原核表达载体,对进一步进行变应原表达和免疫学活性鉴定有积极意义。
张强叶卫翔刘志刚陈思罗新萍黄钟
关键词:蜜蜂基因克隆原核表达载体
腰果过敏原Ana o 2结构及抗原表位预测被引量:4
2012年
腰果是引起人们过敏的主要食物之一。作者采用生物信息学方法,通过Pubmed网络服务器、生物信息分析软件SOPMA、swiss-model网络服务器、DNAStar生物分析软件等对腰果主要过敏原Ana o 2的结构和抗原表位进行预测,分析Ana o 2蛋白的抗原表位可能是108-111,181-186,217-218,234-238,244-255,283-287。这为腰果过敏原的进一步研究提供理论参考,并对开发低过敏腰果制品提供帮助。
朱倩倩吴序栎肖杰成小娟lujun刘志刚徐宏
关键词:腰果抗原表位
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