中国博士后科学基金(2005038364)
- 作品数：8 被引量：28H指数：4
- 相关作者：苏旭田梅赵宝锋阮建磊李文建更多>>
- 相关机构：中国疾病预防控制中心中国科学院近代物理研究所吉林大学更多>>
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- pEgr-sTRAIL体外转染联合^(60)Co γ射线照射诱导肿瘤细胞凋亡及Caspase-3活化被引量：1
- 2009年
- 为探讨Egr-1启动子调控TRAIL基因表达的辐射增敏作用及其作用机制,采用体外瞬时转染pEgr-sTRAIL辐射诱导表达载体联合不同剂量60Coγ射线照射,观察其诱导肿瘤细胞凋亡的作用及其与凋亡执行分子Caspase-3活化的关系。结果表明重组质粒体外瞬时转染联合不同剂量60Coγ射线照射可诱导肿瘤细胞凋亡,并具有随剂量增高而增加的趋势。Western blot及分光光度法检测Capase-3活性均显示转染重组质粒pEgr-sTRAIL接受不同剂量γ射线照射后,其Caspase-3活性明显增高,亦有随着剂量增高而增高的趋势。提示γ射线可通过激活Egr-1启动子增加TRAIL诱导凋亡及活化Caspase-3的作用从而提高肿瘤细胞的辐射敏感性。
- 田梅郭志英赵宝锋阮建磊苏旭
- 关键词：Γ射线细胞凋亡CASPASE-3
- Smac基因对γ射线照射诱导的宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响被引量：10
- 2007年
- 将Smac基因全长cDNA转染HeLa细胞,以探讨Smac基因过表达对γ射线诱导的宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响及其可能机制。转染24小时后Western Blot结果表明,转染Smac基因全长cDNA的HeLa/Smac细胞其Smac基因表达量与转染pcDNA3.1空载体的HeLa/pcDNA3.1细胞Smac基因表达量相比上调,而相反Smac基因的底物Survivin基因表达量下调。γ射线照射后HeLa/Smac细胞与HeLa/pcDNA3.1细胞相比凋亡率显著升高,Caspase-3活性上调,但HeLa/Smac细胞与HeLa/pcDNA3.1细胞相比DNA损伤及修复无显著变化,对细胞周期也无明显影响。
- 赵宝锋田梅阮建磊苏旭
- 关键词：SMAC基因Γ射线HELA细胞细胞凋亡
- ^12C^6＋重离子诱导可溶性TRAIL表达增强及其抗肿瘤作用的实验研究被引量：2
- 2007年
- 目的构建可被辐射诱导激活的表达载体pEgr-sTRAIL,研究其体外瞬时转染联合不同剂量的^12C^6＋离子辐照对人宫颈癌HeLa细胞凋亡和增殖活性的影响。方法SOEing PCR法克隆可溶性TRAIL基因,测序正确后连入pcDNA3.1-Egr质粒,构建pEgr-sTRAIL表达载体;采用GeneCompanionTM聚阳离子转染试剂体外瞬时转染人宫颈癌HeLa细胞;接受不同剂量的^12C^6＋照射后,RT-PCR法检测目的基因 mRNA水平的表达,流式细胞术检测细胞凋亡,克隆形成实验检测细胞增殖存活。结果成功构建了辐射诱导表达载体pEgr-sTRAIL;瞬时转染联合^12C^6＋离子照射可在mRNA水平上诱导sTRAIL表达增强;随照射剂量的增加,转染pEgr-sTRAIL的HeLa细胞凋亡率明显增加,克隆形成率明显下降。结论^12C^6＋离子可诱导重组质粒pEgr-sTRAIL在被转染的HeLa细胞中表达增高,体外基因-^12C^6＋离子联合治疗可诱导肿瘤细胞凋亡明显增多,具有显著的肿瘤抑制作用。
- 田梅赵宝锋阮建磊李文建苏旭
- 关键词：细胞凋亡克隆形成人宫颈癌HELA细胞
- ^(60)Co γ-射线诱导人膀胱癌EJ细胞中磷酸化组蛋白H2AX焦点形成被引量：6
- 2008年
- 目的探讨60Co γ-射线是否可在人膀胱癌EJ细胞中诱导磷酸化组蛋白H2AX焦点形成以及形成的焦点数量与照射剂量及照射后时间的关系。方法免疫印迹法和流式细胞分析法用于检测不同剂量60Co γ-射线照射后EJ细胞中γH2AX蛋白表达的变化;免疫荧光法检测不同剂量照射后以及2 Gy照射后不同时间EJ细胞中γH2AX焦点的数量。结果γ-射线照射后γH2AX蛋白表达明显增加,但量效关系不明显;免疫荧光法可检测γH2AX焦点形成的数量和大小,并且存在剂量-效应关系及有时间依赖性,随着照射剂量的增加,γH2AX焦点数目及大小均明显增加,照射的剂量范围从0.1~4.0 Gy均可检测,照射后24 h仍可检测到γH2AX焦点,但焦点数随时间延长而减少、减弱。结论免疫荧光法检测照射后γH2AX焦点数目可敏感、直观地反映DNA损伤及修复情况,有望成为辐射检测及辐射致癌的好的生物指标。
- 田梅潘艳阮健磊苏旭
- 关键词：EJ细胞DNA损伤
- 可溶性人TRAIL基因表达载体的构建及其诱导肿瘤细胞凋亡的实验研究被引量：4
- 2006年
- 目的构建可溶性肿瘤坏死因子(TNF)相关凋亡诱导配体TRAIL基因表达载体并研究其瞬时转染对肿瘤细胞凋亡的影响。方法采用重叠延伸PCR法克隆含有TNF-α信号肽的人TRAIL基因,并将其连入pUCm-T载体,测序正确后克隆入表达载体pcDNA3.1中,采用Gene-CompanionTM非脂质体型聚阳离子转染试剂体外瞬时转染人膀胱癌EJ细胞,RT-PCR法检测目的基因mRNA水平的表达,Westernblot检测细胞培养上清中目的基因的表达,流式细胞术检测细胞凋亡,克隆形成实验检测细胞存活。结果成功构建了可分泌表达的人可溶性TRAIL表达载体,体外转染TRAIL的EJ细胞凋亡率均显著高于未转染细胞及转染空载体细胞的凋亡率,并明显抑制细胞存活,细胞存活率为51.34%,明显低于未转染细胞及转染空载体的细胞存活率。结论所构建的可溶性TRAIL表达载体转染肿瘤细胞可诱导细胞凋亡及抑制肿瘤细胞的生长存活。
- 田梅朴春姬赵宝峰李修义苏旭
- 关键词：TRAIL细胞凋亡细胞存活膀胱癌EJ细胞
- Smac基因联合^12C^6＋离子照射对膀胱癌EJ细胞的生物效应观察
- 2007年
- 目的观察smac基因能否提高膀胱癌EK细胞^12C^6＋离子照射的生物效应。方法实验分为3组：空白对照组、转染空载体组、转染smac基因组。利用免疫组化及流式细胞仪方法检测3组细胞内smac基因表达。转染24h后对3组分别进行0、2和4Gy ^12C^6＋离子照射，用克隆形成实验对3个组分别检测细胞的存活分数并利用流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果免疫组化结果表明转染pcDNA3．1／smac的细胞其smac基因表达量明显高于转染空载体pcDNA3．1的细胞和空白组细胞。流式细胞仪数据显示，smac基因转染细胞smac基因的荧光强度（3080）显著高于转染空载体组（2256）（P〈0．05），而后者与空白对照组间比较差异无统计学意义（P〉0．05）。克隆形成实验结果表明，转染smac基因组细胞^12C^6＋离子照射后的存活分数较转染空载体组细胞显著降低（P〈0．05）。流式细胞仪测定结果表明，^12C^6＋离子照射的转染smac基因组的细胞凋亡率明显高于转染空载体组（P〈0．05）。结论外源smac基因转染膀胱癌细胞株能显示高表达，并能提高膀胱癌细胞的凋亡率，与^12C^6＋离子照射结合后能显著降低细胞存活分数和进一步增高凋亡率。
- 赵宝锋田梅阮健磊苏旭李文建
- 关键词：SMAC基因碳离子EJ细胞细胞凋亡
- smac基因的克隆及过表达对宫颈癌HeLa细胞γ射线敏感性的影响被引量：6
- 2006年
- 目的克隆smac(thesecondmitochondria-derivedactivatorofcaspases,smac)基因,构建真核表达载体pcDNA3·1/smac,并转染宫颈癌HeLa细胞,探讨smac基因过表达对宫颈癌HeLa细胞γ射线敏感性的影响。方法用RT-PCR的方法从HeLa细胞总RNA中克隆smac基因,连入pcDNA3·1载体并测序。将测序正确的pcDNA3·1/smac载体转染HeLa细胞系,利用RT-PCR法及Westernblot鉴定HeLa细胞内smac基因的表达。γ射线照射后48h利用MTT法检测各组细胞生长抑制率。结果测序结果表明成功的从HeLa细胞总RNA中扩增了全长smac基因。RT-PCR及Westernblot结果表明,转染pcDNA3·1/smac的HeLa/smac细胞中,smac基因表达量明显高于未转染的HeLa细胞及转染空载体pcDNA3·1的HeLa/pcDNA3·1细胞的表达量。不同剂量的γ射线照射48h后,MTT结果表明,γ射线对转染pcDNA3·1/smac的HeLa/smac细胞的生长抑制率(38·85%)显著高于空白组HeLa细胞(17·64%)及转染空载体pcDNA3·1的HeLa/pcDNA3·1细胞(20·32%)。结论成功地克隆了smac基因,在宫颈癌HeLa细胞中过表达外源smac基因能够提高其对γ射线的敏感性,有望开辟提高宫颈癌放疗敏感性的新途径。
- 赵宝锋田梅雷宏伟苏旭
- 关键词：SMAC基因Γ射线HELA细胞
- ^(12)C^(6+)对小鼠肝组织中脂类过氧化和血清抗氧化活力的影响
- 2007年
- 目的研究12C6+重离子全身照射对小鼠肝组织中脂类过氧化和血清抗氧化活力的影响。方法采用硫代巴比妥酸法测定重离子6Gy辐照后各组肝组织中脂质过氧化值;采用电子自旋共振自旋捕集技术检测辐照后各组血清对羟基的清除率。结果12C6+重离子全身辐照后46、70、82h组肝组织中脂质过氧化值明显增加,与对照组相比差异有显著性(P<0.01),但未出现峰值;辐照后各组血清对羟基的清除率明显下降,其中82h组的清除率最低,辐照后各组与对照组相比差异有显著性(P<0.01)。结论12C6+重离子全身辐照能引起小鼠肝组织中脂类过氧化并能使血清抗氧化活力下降。
- 高刚杨英杰苏旭李文建
- 关键词：重离子脂质过氧化
