国家自然科学基金(31000897)
- 作品数:5 被引量:15H指数:2
- 相关作者:张敏张迟朱咪咪刘志辉吴莹莹更多>>
- 相关机构:浙江农林大学学研究院浙江省丽水市农业局更多>>
- 发文基金:国家自然科学基金浙江省自然科学基金浙江省大学生科技创新活动计划(新苗人才计划)项目更多>>
- 相关领域:农业科学更多>>
- ‘无籽’瓯柑CsLTP和CsLOX基因的克隆与表达分析被引量:2
- 2014年
- 采用同源序列法,结合cDNA末端快速扩增(rapid amplification of cDNA ends,RACE)技术,克隆获得‘无籽’瓯柑Citrus suavissima‘Seedless’脂转移酶基因CsLTP和脂氧合酶基因CsLOX的全长cDNA序列;CsLTP cDNA全长667 bp,1个开放阅读框,编码215个氨基酸,与脐橙C.sinensis,粗柠檬C.jambhiri的脂转移蛋白的相似性分别为95%和60%;CsLOX cDNA全长2 915 bp,1个开放阅读框,编码895个氨基酸,与粗柠檬、美洲黑杨Populus deltoids的相似性分别为99%和51%。荧光定量聚合酶链式反应(PCR)表明:CsLTP和CsLOX的表达量均在‘无籽’瓯柑花粉粒形成期开始显著下降,并显著低于普通瓯柑Citrus suavissima。‘无籽’瓯柑花粉发育过程中油脂的转运及氧化的异常,可能成为‘无籽’瓯柑花粉败育的原因之一。
- 张敏刘志辉宋雪恩朱咪咪党婉誉颜福花张迟
- 关键词:园艺学花粉败育荧光定量PCR
- ‘无籽瓯柑’CsRAD51基因的克隆及在花粉发育过程中的表达分析被引量:1
- 2017年
- ‘无籽瓯柑’的雄性不育主要表现为花粉败育,起始于小孢子母细胞减数分裂时期。本研究克隆了‘无籽瓯柑’减数分裂相关基因Cs RAD51,并采用荧光定量PCR检测其在瓯柑及‘无籽瓯柑’中的表达差异。结果显示,Cs RAD51基因的c DNA全长1210 bp,含有一个1029 bp的ORF区;其编码的蛋白质属于疏水性蛋白,分子量45740.1D,氨基酸数388,原子总数6 555,等电点10.20。同源性比对发现,‘无籽瓯柑’Cs RAD51的氨基酸序列与甜橙、麻疯树、油棕、黄瓜、黑杨等的RAD51蛋白高度同源,分别达99%,98%,98%,98%,98%。RT-PCR结果显示‘无籽瓯柑’Cs RAD51在小孢子母细胞、四分体以及单核花粉粒时期的相对表达量显著高于瓯柑。Cs RAD51的过量表达可能影响了DSBs的同源重组修复,致使‘无籽瓯柑’小孢子母细胞时期减数分裂异常。
- 吴莹莹张迟陈高峰孙靳俭朱咪咪张敏
- 关键词:雄性不育减数分裂RAD51
- ‘无籽’瓯柑小孢子母细胞减数分裂特性基因RAD51和MS1的表达差异分析被引量:1
- 2016年
- ‘无籽’瓯柑Citrus suavissima‘Seedless’是野生型瓯柑Citrus suavissima的芽变,其花粉完全败育,败育起始于小孢子母细胞减数分裂形成四分体时期。研究‘无籽’瓯柑小孢子母细胞减数分裂异常的分子机制,有利于深入认识果树芽变的发生机制。随机选择"无籽"瓯柑和瓯柑各3株,根据花蕾直径采集花粉母细胞时期(Ⅰ),四分体时期(Ⅱ),单核花粉粒时期(Ⅲ),双核花粉粒时期(Ⅳ)及花粉粒成熟期(Ⅴ)共5个时期的花蕾并分离花药,利用实时荧光定量聚合酶链式反应(q RT-PCR)分析减数分裂特性基因RAD51和MS1的相对表达量,3次重复。通过SPSS 16.0的最小显著差法(LSD)在0.01水平上进行各样品间的相对表达量差异分析。结果表明:RAD51和MS1基因的表达高峰均集中在第Ⅰ时期和第Ⅱ时期,且此时花药中的相对表达量均极显著(P<0.01)高于花蕾。第Ⅰ时期花药中,‘无籽’瓯柑RAD51的相对表达量为瓯柑的3.7倍,MS1可达300倍;但同时期花蕾中,RAD51的相对表达量仅1.1倍,MS1为140.0倍。‘无籽’瓯柑RAD51基因在第Ⅰ时期和第Ⅱ时期的相对表达量极显著(P<0.01)高于瓯柑,说明‘无籽’瓯柑小孢子母细胞和四分体时期的细胞内均存在DNA受损现象;‘无籽’瓯柑MS1基因在第Ⅰ时期的相对表达量极显著(P<0.01)高于瓯柑,但第Ⅱ时期极显著(P<0.01)低于瓯柑,推测‘无籽’瓯柑败育花粉的形成与MS1基因表达紊乱引起油脂分泌、转运异常密切相关。
- 朱咪咪张迟常爱玲党婉誉周彩红俞狄虎吴莹莹张敏
- 关键词:园艺学减数分裂MS1
- ‘瓯柑’及其无子突变体花粉发育的细胞学观察被引量:12
- 2014年
- 【目的】观察‘瓯柑’及其无子突变体的花粉形态和花药发育过程,探讨‘无子瓯柑’花粉败育的时期和方式。【方法】以雄性不育的‘无子瓯柑’和可育的有子瓯柑为试材,采用半薄树脂切片、扫描电镜、透射电镜等方法对其花药发育过程和花粉形态进行观察。【结果】有子瓯柑花粉粒饱满,‘无子瓯柑’花粉粒多干瘪、畸形。‘无子瓯柑’小孢子母细胞形成期正常,在四分体时期开始出现异常,在单核期出现明显异常,虽然能形成花粉壁,但小孢子细胞质收缩、解体,最终只剩余空瘪的花粉壳。在成熟花粉粒时期,‘无子瓯柑’花药的绒毡层附近有大量的脂类物质残存,营养物质未能被花粉粒充分利用,有子瓯柑绒毡层附近无脂类物质残存,营养物质被花粉粒利用充分。【结论】‘无子瓯柑’花粉母细胞正常,花粉败育开始于小孢子母细胞减数分裂期至四分体时期,小孢子母细胞减数分裂过程的不正常是导致其花粉败育的主要原因。
- 张迟张敏朱铨刘志辉颜福花吴连海徐象华周晓音陈翔
- 关键词:花粉败育小孢子母细胞
- ‘无子瓯柑’CHS基因家族的克隆和表达分析被引量:2
- 2019年
- 为研究查尔酮合成酶基因(CHS)家族在‘无子瓯柑’Citrus suavissima‘Seedless’雄性不育发生过程中的作用,以克里曼丁橘Citrus clementina基因组数据库为参照,在‘无子瓯柑’和瓯柑Citrus suavissima的转录组和蛋白质组测序结果中筛选出4个CHS同源差异表达基因,并对其克隆和表达量分析,对克里曼丁橘CHS基因家族成员进行生物信息学分析。结果表明:‘无子瓯柑’和瓯柑CHS基因编码区核苷酸序列相似度达98%以上。小孢子母细胞发育各时期CHS基因表达量在瓯柑和‘无子瓯柑’间差异显著。与瓯柑相比,‘无子瓯柑’小孢子母细胞时期Ciclev10005133m,Ciclev10030093m和Ciclev10015535m的表达量显著下调;减数分裂时期Ciclev10005133m,Ciclev10001405m和Ciclev10015535m的表达量显著下调;四分体时期Ciclev10001405m和Ciclev10030093m的表达量显著减少。在花粉粒成熟时期的花蕾中,Ciclev10001405m与Ciclev10005133m在花药中特异性表达。CHS同源基因在花药不同时期中的差异表达可能是‘无子瓯柑’花药发育异常的重要原因,并最终导致‘无子瓯柑’雄性不育。
- 俞狄虎张迟柯甫志敬露阳顾雪娇吴宝玉张敏
- 关键词:园艺学查尔酮合成酶雄性不育基因家族