国家自然科学基金(30871700)
- 作品数：6 被引量：44H指数：4
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- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 猕猴桃L-艾杜糖脱氢酶基因的克隆及转化
- 2011年
- 以猕猴桃果实为材料,利用电子克隆技术获得了L-艾杜糖脱氢酶(L-Idonate dehydrogenase,IDH)基因,然后将其转入番茄中,为了解猕猴桃IDH基因如何调控AsA的降解奠定基础。结果表明,获得的猕猴桃IDH基因cDNA全长为1 239bp,含有一个1 080bp的开放阅读框,编码359个氨基酸;成功构建了IDH基因植物表达载体pWR-IDH及工程农杆菌,以番茄叶片及茎段为受体,通过农杆菌介导法进行转化,获得了4株经PCR和RT-PCR检测呈阳性的转基因植株。
- 梁东邹珺李明军马锋旺
- 关键词：猕猴桃基因克隆
- 阔叶猕猴桃果实GalDH cDNA克隆及其在大肠杆菌中的表达被引量：5
- 2009年
- 以猕猴桃属植物中果实维生素C含量最高的阔叶猕猴桃(Actinidia latifolia Merr.)果实为试材,经RT-PCR扩增获得约1.0kb的L-半乳糖脱氢酶cDNA片段。生物信息学分析表明,该cDNA片段长为997bp,最大开放阅读框为960bp,可编码319个氨基酸残基,命名为AlGalDH,GenBank登录号为EU525846,核苷酸序列及其推导的氨基酸序列与已知其它植物GalDH核苷酸、氨基酸序列间的同源性分别在76%和70%以上,且具有醛酮还原酶的保守结构域。构建了其原核表达载体pET-AlGalDH并转化大肠杆菌BL21,经0.1mmol.L-1IPTG诱导,获得具有较高活性的表达融合蛋白6×His-AlGalDH。经Ni-His亲和磁珠分离纯化,获得单一的融合目的蛋白条带,测定其酶活为120pmol.min-1.mg-1。
- 尚增振王小华马锋旺梁东
- 关键词：克隆原核表达
- 兰州百合基因枪转化方法的研究被引量：14
- 2010年
- 以兰州百合试管苗鳞片叶为受体,通过基因枪转化法将脱氢抗坏血酸还原酶基因(DHAR)转入兰州百合,并用GUS染色、PCR扩增和Southern杂交等技术进行转基因株系的检测.结果表明:以兰州百合鳞片叶为受体材料,在轰击压力1 100 psi、轰击距离6 cm时,抗性率高达14%,转化率为1.5%;10 mg/L的潮霉素对鳞片叶具有很好筛选作用.GUS分析发现,转化株系叶片为蓝色;PCR检测和Southern杂交进一步证实抗性株系为转基因植株,且为单拷贝.
- 师守国梁东王顺才马锋旺
- 关键词：兰州百合脱氢抗坏血酸还原酶
- 猕猴桃果实发育过程中AsA代谢产物积累及相关酶活性的变化被引量：19
- 2009年
- 以美味猕猴桃品种‘秦美’果实为材料,研究了其生长发育过程中与AsA代谢循环系统相关的物质抗坏血酸(AsA)、谷胱甘肽(GSH)、草酸(OA)、酒石酸(TA)和过氧化氢(H2O2)的含量及相关酶活性的变化及其相互关系。结果表明:在果实生长发育过程中,花后AsA含量明显增加,花后30d达到最高后开始下降,花后75d后基本保持不变。就整个果实中总的AsA积累量而言,花后开始显著增加,到45d达到最大值后至成熟基本保持不变。这表明猕猴桃果实的AsA积累主要发生在幼果期。GSH随着果实发育在花后120d前其含量及积累量均有增加,但积累也主要发生在幼果期。OA含量的变化与H2O2含量和抗坏血酸过氧化物酶(APX)活性相似,均在花后开始显著下降,到花后30d后变化不大;而TA含量的变化趋势与AsA一致。抗坏血酸氧化酶(AO)、单脱氢抗坏血酸还原酶(MDHAR)和脱氢抗坏血酸还原酶(DHAR)的活性变化基本一致,均在花后开始显著升高,60d达到最大后迅速下降,在90d后至成熟基本保持不变。
- 侯长明李明军马锋旺梁东杜国荣
- 关键词：猕猴桃果实代谢物酶活性
- 阔叶猕猴桃GalDH基因植物表达载体的构建及转化番茄的研究被引量：4
- 2012年
- L-半乳糖脱氢酶(GalDH)是L-半乳糖途径合成抗坏血酸(ASA)的关键酶之一,为了研究GalDH基因的功能,获得转基因植株,用限制性内切酶BamHⅠ和KpnⅠ将已克隆的阔叶猕猴桃GalDH基因从克隆载体pMD-19T切下,定向插入到植物表达载体pCSB,成功构建阔叶猕猴桃GalDH基因植物表达载体pCSB-GalDH及工程农杆菌,以Micro-Tom番茄叶片及茎段为受体,通过农杆菌介导法转化番茄,PCR检测、GUS染色和Real-time PCR检测表明,阔叶猕猴桃GalDH基因已整合到番茄基因组中。
- 王爱连王平平梁东马锋旺
- 关键词：番茄
- 猕猴桃GalUR表达与抗坏血酸积累的关系被引量：5
- 2011年
- 通过RT-PCR从美味猕猴桃(Actinidia deliciosa)果实中克隆了D-半乳糖醛酸还原酶(GalUR)全长cDNA序列,并分析其序列特征,进行原核表达,制备特异抗体,分析其mRNA及蛋白表达水平与果实发育过程及不同组织中抗坏血酸(AsA)合成和积累的关系。结果表明:克隆的GalURcDNA(GenBank登录号为GU339035)包含的最大开放阅读框(open reading frame,ORF)为990bp,编码329个氨基酸残基,预测分子量为37kD,与报道的草莓等其他植物GalUR具有较高的相似性。构建的pET-32a(+)-GalUR载体在大肠杆菌BL21(E.coliBL21)中异源表达后,获得了主要以包涵体存在约58kD的融合蛋白GalUR-His(His约21kD)。以该蛋白制备抗体,与重组蛋白的Western杂交表明该抗体能与GalUR蛋白发生特异反应。对猕猴桃可溶性蛋白杂交显示,猕猴桃体内GalUR蛋白的分子量约37kD。在猕猴桃不同组织和发育过程中,GalUR表达水平与AsA含量表现为高度一致,但前体饲喂发现,与L-半乳糖相比,D-半乳糖醛酸并不能有效促进猕猴桃AsA的合成。这些结果表明以单体形式存在的GalUR与猕猴桃AsA合成有着密切关系,但它可能并不是猕猴桃AsA积累的主要调控环节。
- 李明军刘军梁东郭春苗马锋旺
- 关键词：猕猴桃原核表达维生素C
