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广东省产业技术研究与开发资金计划项目(2012B031800340)

作品数：9 被引量：6H指数：2
相关作者：吉晓滨谢景华刘启才梁俊毅李宁更多>>
相关机构：广州市第一人民医院广州医科大学广州医学院更多>>
发文基金：广东省产业技术研究与开发资金计划项目更多>>
相关领域：医药卫生更多>>

文献类型

  • 9篇期刊文章
  • 1篇学位论文

领域

  • 10篇医药卫生

主题

  • 8篇细胞
  • 5篇喉癌
  • 4篇鳞状
  • 4篇鳞状细胞
  • 3篇葡萄球菌
  • 3篇球菌
  • 3篇肿瘤
  • 3篇细胞癌
  • 3篇鳞状细胞癌
  • 3篇免疫
  • 3篇抗原
  • 3篇喉癌HEP-...
  • 3篇喉鳞状细胞
  • 3篇喉鳞状细胞癌
  • 3篇EXOSOM...
  • 2篇血管
  • 2篇真核
  • 2篇真核载体
  • 2篇葡萄球菌肠毒...
  • 2篇葡萄球菌肠毒...

机构

  • 9篇广州市第一人...
  • 7篇广州医科大学
  • 1篇广州医学院

作者

  • 9篇谢景华
  • 9篇吉晓滨
  • 7篇刘启才
  • 3篇李宁
  • 3篇梁俊毅
  • 2篇李雯
  • 2篇苏娟
  • 1篇吕景礼

传媒

  • 2篇中国耳鼻咽喉...
  • 2篇临床耳鼻咽喉...
  • 2篇中华临床医师...
  • 1篇中国耳鼻咽喉...
  • 1篇中国免疫学杂...
  • 1篇现代肿瘤医学

年份

  • 1篇2020
  • 6篇2015
  • 2篇2014
  • 1篇2013
共 9 条 记 录，以下是 1-10
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排序方式：
喉癌来源黑色素瘤抗原A3在小鼠黑色素瘤细胞模型的表达
2014年
目的:建立pIRES2-EGFP/MAGE-A3真核质粒在小鼠黑色素瘤B16细胞稳定表达的肿瘤细胞模型。方法:将喉癌来源的黑色素瘤抗原A3(Melanoma-associated antigen A3,MAGE-A3)构建成真核质粒pIRES2-EGFP/MAGE-A3,脂质体法将pIRES2-EGFP/MAGE-A3转染小鼠黑色素瘤B16细胞,G418筛选阳性克隆,荧光显微镜检测阳性克隆中增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)的表达,荧光定量PCR(qRT-PCR)检查MAGE-A3在B16细胞中的转录。结果:pIRES2-EGFP/MAGE-A3真核质粒转染B16细胞后筛选得到阳性克隆,可见融合蛋白表达产生明亮的绿色荧光,qRT-PCR可检测到MAGE-A3 mRNA的转录。结论:pIRES2-EGFP/MAGE-A3真核质粒通过脂质体法能有效转染,并在B16稳定表达,成功建立了MAGE-A3肿瘤细胞模型。
李宁吉晓滨谢景华刘启才
关键词：真核载体基因转染绿色荧光蛋白
Rac1在喉鳞状细胞癌中的表达及临床价值
目的检测Ras相关的C3肉毒底物1(Ras-related C3 botulinum substrate 1，Rac1)在喉鳞状细胞癌(Laryngal squamous cell carcinoma，LSCC)中的表达...
夏利辉
关键词：喉鳞状细胞癌免疫组织化学生存率生物学标记物临床病理参数
文献传递
葡萄球菌肠毒素A与黑色素瘤抗原A3共表达真核质粒致敏小鼠淋巴细胞对喉癌细胞模型的影响被引量：1
2015年
目的观察真核质粒p MAGEA3-IRES-SEA免疫小鼠后,鼠脾淋巴细胞对喉癌细胞模型B16/MAGEA3的杀伤作用。方法将葡萄球菌肠毒素A(staphylococcal endotoxin A,SEA)和喉癌来源的黑色素瘤抗原A3(melanoma-associated antigen A3,MAGE-A3),构建成基因共表达的真核质粒p MAGEA3-IRES-SEA,用电转染的方法免疫BALB/C小鼠单侧股四头肌。末次免疫2周后,取脾分离淋巴细胞,与B16/MAGE-A3细胞共同培养,MTT法观察活化的淋巴细胞对B16/MAGE-A3的杀伤作用。结果 ptk-IRES-SEA、p IRES2-EGFP/MAGE-A3和p MAGEA3-IRES-SEA质粒组对B16/MAGE-A3细胞特异性杀伤率均高于空白质粒及生理盐水组(P<0.05);p MAGEA3-IRESSEA质粒组杀伤作用大于ptk-IRES-SEA、p IRES2-EGFP/MAGE-A3质粒组(P<0.05)。结论构建的p MAGEA3-IRES-SEA真核质粒可通过电转染的方式输入到小鼠体内,诱导特异性细胞免疫,可提高杀伤B16/MAGE-A3细胞的作用。为DNA疫苗接种途径、方法及抗喉癌疫苗的研究提供了实验依据。
李宁吉晓滨谢景华刘启才
关键词：喉癌葡萄球菌肠毒素A黑色素瘤抗原体内免疫
SEA和喉癌MAGE-A3构建的真核质粒pMAGEA3-IRES-SEA经过电穿孔转染在小鼠体内的转录被引量：2
2014年
目的检测真核质粒pMAGEA3-IRES-SEA经过电穿孔转染在小鼠中的转录。方法将葡萄球菌肠毒素A(staphylococcal endotoxin A,SEA)和喉癌来源的黑色素瘤抗原A3(melanomaassociated antigen A3,MAGE-A3),构建成基因共表达的真核质粒pMAGEA3-IRES-SEA。将pMAGEA3-IRES-SEA用电转染的方法免疫BALB/C小鼠单侧股四头肌,每2周1次,每次注射50μg,共免疫3次。末次免疫2周后,取注射部位组织,用荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测目的基因在注射部位肌肉中的转录情况。结果在实验小鼠注射部位的骨骼肌内检测到SEA、MAGE-A3基因转录mRNA。结论所构建的pMAGEA3-IRES-SEA真核表达质粒,可通过电转染的方式,在小鼠体内能有效地转录。这为研究该质粒通过小鼠的体内转录蛋白的表达,诱导机体细胞免疫、体液免疫来清除喉癌,奠定了理论基础。
李宁吉晓滨谢景华刘启才
关键词：葡萄球菌属超抗原电穿孔电转染
喉癌Hep-2细胞来源的exosomes的发现和鉴定被引量：1
2015年
目的：观察喉癌Hep-2细胞可否分泌exosomes,并从形态学角度鉴定。方法：大量培养喉癌Hep-2细胞,热休克处理,收集培养上清。先通过3/0.8μm深层过滤小型滤芯对上清进行预处理,去除直径较大的颗粒和杂质。采用Exosome Isolation Kit（商品化试剂盒）收集培养上清液4ml,依次加入Exosome Isolation Kit内试剂,通过exosomes提取专用过滤柱,收集浓缩液。用高倍透射电子显微镜对exosomes做鉴定。结果：成功从喉癌Hep-2细胞培养上清中分离提取出exosomes,电镜观察见exosomes呈圆形或椭圆形双层膜的囊泡状结构,直径约20～100nm,密度较高,分散均匀。结论：首次发现喉癌细胞自身能分泌exosomes,为喉癌免疫治疗做出新的探求。
吉晓滨梁俊毅刘启才谢景华
关键词：喉癌细胞EXOSOMEKITEXOSOMES透射电子显微镜
表达超抗原葡萄球菌肠毒素A的喉癌细胞的建立
2013年
目的:构建葡萄球菌肠毒素A(SEA)基因真核表达载体并建立其稳定表达的喉癌细胞系。方法:根据标准葡萄球菌菌株ATCC13565中SEA基因序列,人工合成其编码区序列,然后亚克隆至真核表达载体pIRES2-EGFP,构建pSEA-IRES-EGFP重组质粒,再将重组质粒转染至喉癌Hep-2细胞,G418筛选获得抗性单克隆,用RT-PCR和ELISA法鉴定SEA在喉癌细胞中的表达。结果:合成的SEA基因亚克隆至真核表达载体pires-EGFP后,测序证实克隆的SEA序列与GenBank中标准葡萄球菌菌株ATCC13565的编码区序列完全一致;重组质粒转染喉癌Hep-2细胞后,经筛选2周获得抗性单克隆,挑选单克隆,RT-PCR扩增获得特异的基因片段。经ELISA分析,发现细胞培养上清液中SEA蛋白的含量达pg级水平。结论:成功构建了超抗原SEA基因的重组真核表达载体,转染至喉癌Hep-2细胞后,SEA基因能够在细胞表达并持续分泌SEA蛋白。
吉晓滨吕景礼刘启才谢景华
关键词：超抗原葡萄球菌肠毒素A真核载体基因克隆喉肿瘤
肿瘤血管生成相关因子CD105和β-半乳糖凝集素3在喉鳞状细胞癌中的表达被引量：1
2015年
目的探讨喉鳞状细胞癌(laryngeal squamous cell carcinoma,LSCC)中Endoglin(CD105)、β-半乳糖凝集素3(Galectin-3)蛋白的表达及与LSCC临床病理因素的关系。方法采用免疫组化SP法检测76例LSCC和25例喉正常黏膜中CD105、Galectin-3的表达。结果 1LSCC中以CD105标记的微血管密度(microvessel density,MVD)为10.33±2.29,大于喉正常黏膜(1.20±1.04,t=18.732,P<0.05)。CD105标记的MVD(CD105-MVD)的表达与LSCC的组织学分级、T分级、临床分期、淋巴结转移、是否复发、预后有关(P均<0.05)。2Galectin-3蛋白表达的阳性率在LSCC为86.84%,大于喉正常黏膜36%(χ2=25.44,P<0.05)。G a le c t i n-3蛋白表达与L SCC的T分级、临床分期、淋巴结转移、是否复发、预后有关(P均<0.05)。3CD105和Galectin-3蛋白表达呈正相关。4生存分析显示,CD105、Galectin-3、组织学分级、淋巴结转移、T分级、有无复发是患者预后独立的影响因素(P<0.05)。结论 LSCC中CD105与Galectin-3蛋白的表达呈正相关,二者均促进LSCC的发生、恶性发展及不良预后,联合检测两者的表达有助于LSCC的诊断及预后判断。
苏娟吉晓滨谢景华李雯
关键词：喉肿瘤半乳糖凝集素3
喉癌Hep-2细胞来源的exosomes提取方法的比较被引量：2
2015年
目的:对分离提取喉癌Hep-2细胞来源的exosomes 2种方法进行对比,展现不同方法的优缺点,为选择分离提取包括喉癌Hep-2细胞在内的肿瘤细胞来源exosomes的方法提供参考。方法:大量培养喉癌Hep-2细胞,42℃热休克处理。收集90ml培养上清液,先通过3/0.8μm深层过滤小型滤芯对上清液进行预处理,去除直径较大的颗粒和杂质,再利用蔗糖密度梯度离心联合超滤离心法,将上清液浓缩提纯;收集培养上清液4ml,依次加入Exosome Isolation Kit内试剂,通过exosomes提取专用过滤柱,收集浓缩液。用高倍透射电子显微镜对2种方法所得的exosomes浓缩液分别鉴定,作出评价。结果:2种方法均能成功地从喉癌Hep-2细胞培养上清液中分离提取出exosomes。单个高倍视野下,蔗糖密度梯度离心联合超滤离心法提取exosomes分散性较好,但密度较低,背景见杂质较多;Exosome Isolation Kit所提取exosomes排列紧密,密度较高,背景杂质较少。结论:2种方法各具特点,均是较理想的exosomes分离提取方法。利用Exosome Isolation Kit分离提取exosomes具有样本量少、提取时间短、步骤简单、产物量大等优点,为喉癌Hep-2来源exosomes的分离提取提供了较好的选择。
梁俊毅吉晓滨刘启才谢景华
关键词：EXOSOMESEXOSOMEISOLATIONKIT
喉癌Hep-2细胞来源的exosomes提取和鉴定
2015年
目的观察喉癌Hep-2细胞能否分泌exosomes,并从形态学角度鉴定。方法大量培养喉癌Hep-2细胞,热休克处理,收集培养上清液。通过3/0.8μm深层过滤小型滤芯对上清液进行预处理,去除直径较大的颗粒和杂质,利用超滤离心技术联合蔗糖密度梯度离心法,将上清液浓缩提纯,透射电镜对exosomes做鉴定。结果成功从喉癌Hep-2细胞培养上清液中分离提取出exosomes,电镜下观察exosomes呈圆形或椭圆形双层膜的囊泡状结构,直径约20~100 nm,密度较高,分散均匀。结论较先发现喉癌细胞自身能分泌exosomes,为喉癌免疫治疗做新的探求。
吉晓滨梁俊毅刘启才谢景华
喉鳞状细胞癌中肿瘤血管生成因子CD105的表达
2015年
目的探讨喉鳞状细胞癌(LSCC)中Endoglin(CD105)的表达及其与LSCC临床病理因素的关系。方法采用免疫组化SP法检测76例LSCC、25例喉正常黏膜(NLT)中CD105的表达情况,分析其与LSCC患者临床病理因素的关系及对LSCC预后判断的价值。结果 (1)76例LSCC中以CD105标记的微血管密度(MVD)为10.33±2.29,25例NLT为1.20±1.04,其差异有统计学意义(P<0.05)。CD105标记的MVD(CD105-MVD)的表达与LSCC的组织学分级、T分期、临床分期、淋巴结转移、是否复发、预后有关(P<0.05)。(2)生存分析显示,CD105、组织学分级、淋巴结转移、T分期、有无复发是患者预后独立的影响因素(P<0.05)。结论 LSCC中CD105促进LSCC的发生、恶性发展及不良预后,检测其表达有助于LSCC的诊断及预后判断。
苏娟吉晓滨谢景华李雯
关键词：免疫组织化学微血管密度CD105
全选 清除 导出
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