国家自然科学基金(81000749)
- 作品数：1 被引量：1H指数：1
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- 相关机构：江苏省血吸虫病防治研究所更多>>
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- 日本血吸虫VCP基因的克隆表达及其在不同生活史期的mRNA表达水平被引量：1
- 2014年
- 目的从原核表达日本血吸虫含缬酪肽蛋白(VCP)基因,并分析其在不同生活史期的mRNA表达水平。方法提取日本血吸虫虫卵RNA,逆转录为cDNA,PCR扩增日本血吸虫VCP基因,亚克隆至原核表达载体pET15b;重组质粒转化入E.coli BL21,异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导目的基因表达,并采用包涵体纯化方法获取重组蛋白,产物行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行分析鉴定。提取日本血吸虫尾蚴、童虫、雌虫、雄虫、虫卵RNA,DNase消化,纯化后逆转录为cDNA,采用荧光实时定量PCR分析VCP基因在上述生活史期的表达水平。结果 PCR扩增获得日本血吸虫VCP基因,经重组质粒表达和包涵体纯化成功获得重组蛋白。荧光实时定量PCR检测发现,日本血吸虫VCP基因在尾蚴中的mRNA表达水平最高,在童虫、虫卵、雄虫、雌虫中表达水平较低。结论获得日本血吸虫VCP基因编码的重组蛋白;日本血吸虫VCP基因mRNA在尾蚴阶段表达水平最高,在童虫、虫卵、雄虫、雌虫中表达水平较低。。
- 王飞王晓婷戴洋徐颖邢云天曲国立戴建荣
- 关键词：日本血吸虫
