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UGT1A1＊28和UGT1A1＊6基因多态性在结直肠癌患者中的分布调查被引量：1: 2013年; 目的调查结直肠癌患者UGT1A1基因UGT1A1＊28和UGT1A1＊6基因多态性的分布频率。方法收集我院80例结直肠癌患者外周血标本，提取基因组DNA．PCR扩增UGT1A1基因启动子和第1外显子基因片段，直接测序确定基因型。结果80例结直肠癌患者中．UGT1A1六28位点野生型TA6／6为55例（68．75％），杂合突变型TA6／7基因型22例（27．50％），纯和突变型TA7／7有3例（3．75％）；UGT1A1＊6位点突变型211GG基因型57例（71．25％），211GA基因型22例（27．50％），211AA基因型1例（1．25％）。等位基因出现频率分别为TA6为82．50％．TA7为17．50％．211G为85．00％．211A为15．00％。同时携带TA7和211A等位基因共6例（7．50％）。结论结直肠癌患者中UGT1A1＊6和UGT1A1＊28分布频率均较高，在测定UGT1A1基因多态性时应同时检测这两个突变位点。; 蔡贞温淑娟郑磊; 关键词：结直肠癌 UGT1A1 基因多态性

多靶标基因并行检测技术为肿瘤个体化治疗提供新模式被引量：6: 2013年; 随着人类基因组学和药物基因组学的发展,肿瘤个体化诊疗已由愿景变成了现实。肿瘤的发生发展是一个多基因参与、多信号通路激活的复杂生物学过程,多靶标并行检测可一次同时对多个肿瘤个体化诊疗相关靶标进行检测,为临床医生制定适宜的个体化诊疗方案提供更为全面的信息。本文仅就近年出现的可实现多靶标并行检测的主要技术-液相芯片技术和新一代测序技术做简要的述评,并简述多靶标并行检测在质量控制方面应遵循的基本原则。; 蔡贞郑磊; 关键词：肿瘤个体化诊疗

利用亚细胞组分蛋白分离技术有效提取细胞骨架及其相关蛋白被引量：2: 2013年; 目的建立一种可用于后续双向电泳研究的细胞骨架及相关蛋白的提取方法。方法采用亚细胞组分蛋白分步提取方法,根据提取过程中细胞形态变化,提取后组分蛋白电泳图谱等优化提取条件。用双向凝胶电泳、免疫印迹分析、蛋白质点质谱鉴定等方法验证该提取方法的重复性和各组分蛋白提取纯度。结果各组分蛋白的双向电泳蛋白图谱差异明显,具备各自特征性的蛋白点分布,各组分标志蛋白FAK、Integrin-β1、Histone H1和cytokeratin 19分别只表达在细胞浆、细胞膜、细胞核和细胞骨架组分。细胞骨架蛋白组分中约90%以上的蛋白质点经质谱鉴定为细胞骨架及相关蛋白。结论亚细胞组分蛋白顺序提取方法具有较好的重复性,提取组分选择性较高,并且能够有效提高低丰度蛋白的检出效率,是一种比较理想的进行蛋白质组学研究的样本预处理方法。; 蔡贞熊石龙周园籍会彩向春艳郑磊; 关键词：细胞骨架蛋白双向凝胶电泳

食道鳞状上皮细胞癌转移体外细胞模型的建立被引量：1: 2013年; 目的建立一个适宜的食道鳞状上皮细胞癌(ESCC)体外转移研究模型。方法将ESCC细胞系HK2置于未处理细胞培养皿中培养、传代,筛选出具有非锚定依赖生长能力的细胞株。以体外侵袭实验,软琼脂克隆形成实验比较、验证筛选细胞系与母代细胞的侵袭能力和非锚定依赖生长能力。利用比较蛋白质学的方法分析筛选细胞与母代细胞间的蛋白表达图谱差异。结果成功筛选出具有较高转移能力并可传代培养的HK2-AD细胞株。HK2和HK2-AD细胞侵袭至小室膜反侧的细胞数分别为(16.7±2.5)和(28.7±7.4),软琼脂集落生成实验表明,HK2和HK2-AD细胞形成的集落数分别为(16.8±3.2)和(25±5.1),差异均有统计学意义(P<0.05)。HK2-AD细胞中一些与细胞运动、细胞无氧代谢及抑制凋亡相关的蛋白质分子表达明显上调。结论利用肿瘤细胞的非锚定依赖生长特性建立了一个高转移能力、呈三维生长的HK2-AD细胞株,为ESCC肿瘤转移机制研究和药物筛选提供了一个有价值且易于操作的食道癌转移体外细胞模型。; 蔡贞周园温淑娟谷祯梅裘宇容; 关键词：体外细胞模型

慢病毒载体构建稳定的maspin表达敲减食管癌细胞株被引量：4: 2014年; 目的前期研究表明maspin在食管癌组织中表达下调。文中利用慢病毒载体介导短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)感染食管癌细胞株,诱导maspin基因沉默,构建稳定的maspin表达敲减细胞株。方法合成maspin特异shRNA序列(shMas1和shMas2),构建shMas1和shMas2慢病毒表达载体;利用293FT细胞包装病毒后,感染食管癌细胞株HKESC-2;经嘌呤霉素筛选获得稳定感染细胞株。定量PCR和免疫印迹法检测干扰效果。结果成功构建shMaspin的慢病毒表达载体;与野生型HKESC-2细胞比较,获得的稳定maspin表达敲减细胞株shMas1/HK2和shMas2/HK2生长特性无明显变化,其maspin mRNA及蛋白质表达水平均明显降低,maspin mRNA敲减效率分别为37.8%及58.2%,maspin蛋白质表达的相对抑制率分别为49%和53%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论成功构建了稳定的maspin表达敲减的食管癌细胞株shMas1/HK2和shMas2/HK2。; 陈静周园郑磊王前蔡贞; 关键词：MASPIN 慢病毒载体短发夹RNA 食管鳞状细胞癌

与食道鳞状上皮细胞癌发生相关的细胞骨架及相关蛋白的筛选鉴定被引量：2: 2012年; 目的比较永生化食道上皮细胞系和食道鳞状上皮细胞癌(ESCC)细胞系的差异表达细胞骨架相关蛋白图谱,筛选并探讨与ESCC发生发展相关的细胞骨架及相关蛋白。方法采用组分蛋白分离方法提取细胞骨架相关蛋白,利用双向凝胶电泳(2DE)联合MALDI-TOF/TOF串联质谱技术,分析并鉴定永生化食道上皮细胞系NE1及ESCC细胞系HKESC-2中差异表达的细胞骨架及相关蛋白,并用Western blot验证其中感兴趣的差异蛋白在一组食道上皮来源细胞系和ESCC患者肿瘤组织中的表达情况。结果三次独立实验结果表明永生化食道上皮细胞系NE1和ESCC细胞系HKESC-2有52个蛋白点表达差异超过2倍,31个蛋白点经质谱分析鉴定为28种蛋白质,其中16种蛋白质在HKESC-2细胞中表达上调,12种表达下调。Vimentin在所有ESCC细胞系和大部分ESCC肿瘤组织中均呈现高表达,而Annexin II则呈现低表达甚至缺失。结论多种细胞骨架及相关蛋白在ESCC发生发展过程中表达发生变化,某些细胞骨架及相关蛋白的特异性表达模式可能可以作为ESCC诊断的分子标志。; 蔡贞周园熊石龙温淑娟裘宇容; 关键词：食管鳞状上皮细胞癌细胞骨架蛋白双向凝胶电泳肿瘤相关蛋白

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国家自然科学基金(81101609)