黑龙江省青年科学基金(QC2008C17)
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
- 相关作者：赵虹杨子超李金星张惊宇孙永奇更多>>
- 相关机构：哈尔滨医科大学附属第四医院哈尔滨医科大学附属第二医院更多>>
- 发文基金：黑龙江省青年科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 携带大鼠脑源性神经营养因子(BDNF)基因重组慢病毒载体的构建及体外表达检测
- 2009年
- 目的构建携带大鼠脑源性神经营养因子(BDNF)基因重组慢病毒载体,并检测其体外表达目的基因的能力。方法应用基因克隆技术将大鼠BDNF基因克隆入慢病毒载体pFUW中,经过PCR、酶切和测序鉴定后,与包装质粒共转染293T细胞,制备并收集携带BDNF基因的慢病毒,重组病毒感染体外培养Hela细胞,利用实时定量PCR、蛋白质免疫印迹方法检测BDNF的表达情况,观察病毒转染效果。结果PCR、酶切和测序鉴定,成功克隆了pFUW-BDNF重组子。所包装的重组慢病毒对Hela细胞的感染效率>90%,实时定量PCR、蛋白质免疫印迹方法可以检测到重组慢病毒感染Hela细胞后能高水平表达BDNF。结论成功构建了携带BDNF基因慢重组病毒载体,并可在体外高水平表达其所携带的目的基因,为将其进一步应用于神经系统损伤性疾病的治疗研究奠定了方法学基础。
- 张惊宇杨安萍李金星刘路然赵虹杨子超
- 关键词：BDNF慢病毒载体基因治疗
- 大鼠海马脑区脑源性神经营养因子慢病毒注射与表达的检测被引量：2
- 2009年
- 目的:建立成年大鼠海马脑区注射脑源性神经营养因子(BDNF)慢病毒表达载体的方法,并检测BDNF慢病毒载体体内表达目的基因的能力。方法:健康雄性SD大鼠随机分为假手术组(SH)、生理盐水组(NS)、GFP慢病毒注射组(GFP)和BDNF慢病毒注射组(BDNF),每组15只。所有实验大鼠在脑立体定位仪下定位海马组织。NS、GFP和BDNF组分别给予盐水(2μL)、GFP慢病毒(2μL)和BDNF慢病毒(2μL),SH组只实行手术操作。注射手术7d、14d和30d后,分别处死大鼠并进行在冰上取各组大鼠海马组织,分别提取海马总RNA和总蛋白质通过RT-PCR和Western blot检测各组大鼠海马组织BDNF mRNA和蛋白表达水平的变化。同时通过原位杂交方法检测BDNF的表达水平和脑区分布。结果:BDNF慢病毒注射成年大鼠7d、14d和30d后,均可以成功检测到BDNF在mRNA和蛋白水平在海马脑区都有明显的表达,同假手术组相比具有显著性差异;原位杂交检测显示BDNF慢病毒注射成年大鼠海马脑区7d、14d和30d的BDNF表达水平和脑区分布均保持稳定。结论:成功地建立了BDNF慢病毒注射成年大鼠海马脑区的方法,并可在注射后不同时间段检测到BDNF高水平的表达和均匀的海马脑区分布,为进一步将其应用于神经系统损伤性疾病的治疗奠定了基础。
- 张惊宇李金星孙永奇赵虹杨子超
- 关键词：BDNF慢病毒海马注射
