河南省自然科学基金(031103100)
- 作品数：3 被引量：4H指数：2
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- 重组减毒沙门菌ΔcrpSL1344(pET28-tPA)在BHK细胞中的表达及活性检测
- 2012年
- 为了探讨原核表达质粒中的真核基因在减毒沙门菌中表达的多肽是否能在真核细胞中加工修饰成具有生物活性的蛋白,试验根据人t-PA的编码序列设计1对引物,扩增t-PA目的基因片段,构建pET28-tPA原核表达质粒,将表达质粒电转化导入减毒鼠伤寒沙门菌ΔcrpSL1344中并转染BHK细胞,应用SDS-PAGE技术检测t-PA表达情况,ELISA法检测其表达水平,琼脂糖平板溶圈法检测纤溶活性。结果表明:重组菌ΔcrpSL1344(pET28-tPA)在BHK细胞中有66.0 ku的蛋白表达,转染96 h的表达量为108μg/L,细胞裂解液和转染表达质粒的细胞培养上清液均有促纤溶活性。说明携带t-PA原核表达质粒的减毒沙门菌具有较强的促纤溶活性。
- 杨宁宁李银聚程相朝张春杰吴庭才
- 关键词：减毒鼠伤寒沙门菌表达质粒BHK细胞活性检测
- 减毒沙门氏菌介导的apo-tPA融合基因在鸡体组织的分布与表达
- 探讨以减毒沙门氏菌为载体,介导外源基因在动物体内的组织分布和表达的可行性。将编码人t-PA功能区的基因片段与鸡VLDLy组装前体apo-B100基因融合,定向克隆到荧光蛋白表达载体SV40启动子下游,构建apo-tPA-...
- 王晓利李银聚程相朝张春杰吴庭才廖成水胡阿勇
- 关键词：减毒沙门氏菌
- 文献传递
- Apo-tPA融合蛋白在鸡胚肝细胞中的分泌表达及其活性检测被引量：2
- 2009年
- 为了探讨apo—B100介导的t—PA融合蛋白在鸡胚肝细胞中分泌表达的可行性和生物学活性，将编码人组织型纤溶酶原激活剂功能区的基因片段△t—PA与鸡VLDLy组装前体apo—B100进行融合，定向克隆到pCDNA3表达载体CMV启动子下游，构建pCDNA3-apo—△tPA表达载体。将pCDNA3-apo-△tPA用脂质体包裹后转染体外培养的鸡胚肝细胞，ELISA检测融合蛋白表达水平，发色底物法检测表达产物的生物学活性。结果显示，融合基因在鸡胚肝细胞中能够表达并分泌到细胞外，48h表达水平最高达575．3ng／10^5（cells·24h），表达产物活性为135．8IU／10^6（cells·24h）。apo—B100介导的t—PA在鸡胚肝细胞中成功表达，为外源基因在鸡体内表达并实现在卵黄中沉积奠定了坚实的基础。
- 冯运巩李银聚程相朝张春杰吴庭才郁川王学强张旭
- 关键词：人组织型纤溶酶原激活剂活性检测
- 减毒沙门菌介导的apo-tPA融合基因在鸡体组织的分布与表达被引量：2
- 2011年
- 探讨以减毒沙门菌为载体,介导外源基因在动物体内的组织分布和表达的可行性。将编码人t-PA功能区的基因片段与鸡VLDLy组装前体apo-B100基因融合,定向克隆到荧光蛋白表达载体SV40启动子下游,构建pApo-tPA-GFP表达质粒。应用电转化法将pApo-tPA-GFP表达质粒转化减毒沙门菌,阳性减毒沙门菌经翅下静脉注入鸡体内,分别于注射后第1、2、3、4、5周随机剖检试验用鸡,无菌取内脏器官,经组织细菌培养、RT-PCR检测各脏器中基因分布,涂片荧光镜检基因表达情况。结果显示,在肝脏、脾脏和十二指肠均分离到沙门菌,PCR鉴定均为减毒沙门菌载体;RT-PCR检测在肝脏、脾脏、十二指肠中有目的基因存在;荧光检测在肝脏、脾脏中有荧光蛋白。结果表明,减毒沙门氏菌能够作为载体将目的基因有效的转入到动物体内,这一方法有望为动物转基因提供便捷、有效的途径。
- 王晓利李银聚程相朝张春杰吴庭才廖成水胡阿勇
- 关键词：减毒沙门菌T-PA表达质粒
