国家自然科学基金(31272110)
- 作品数：16 被引量：58H指数：4
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- 相关机构：西北农林科技大学新疆农业大学更多>>
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- 相关领域：农业科学生物学理学轻工技术与工程更多>>
- 雷公藤鲨烯环氧酶基因克隆与表达分析被引量：5
- 2018年
- 以雷公藤(Tripterygium wilfordii Hook.f.)发状根为试验材料,采用RT-PCR方法,克隆得到2个雷公藤鲨烯环氧酶编码基因,命名为TwSE1(GenBank登录号MG717395)和TwSE2(GenBank登录号MG717396)。序列分析表明,TwSE1和TwSE2的开放阅读框分别为1 578和1 584bp,分别编码525和527个氨基酸,2条序列相似性为76.18%,但N端序列不保守。实时荧光定量PCR检测雷公藤鲨烯环氧酶在不同组织部位的表达模式,以及雷公藤发状根受茉莉酸甲酯(MeJA)诱导后基因表达的结果表明,TwSE1、TwSE2基因在雷公藤根、茎、嫩叶、老叶、花中均有表达,TwSE1在花中表达丰度最高,在根中表达丰度最低;但TwSE2在花和嫩叶中表达量最高,在老叶中表达量最低,且TwSE2在各组织部位的表达量都低于TwSE1。雷公藤发状根经MeJA诱导后,TwSE1、TwSE2基因表达量均上升,都表现为表达量先上升后下降再上升的趋势,并于诱导后3h达到一个高水平表达,之后下降,在诱导12h后表达量又迅速上升;在相同诱导条件下,TwSE2基因表达水平的提高小于TwSE1基因。
- 祝传书刘艳陈蒙蒙蒲时冯俊涛张兴
- 关键词：雷公藤克隆
- 摇瓶培养条件下雷公藤不定根生长及次生代谢产物含量的研究
- 2019年
- 以雷公藤(Tripterygium wilfordii Hook. f.)不定根为材料,研究摇瓶悬浮培养条件下接种密度、装液比例、逐级放大、消泡剂、大孔吸附树脂种类及浓度对雷公藤不定根增长量、不定根及培养基中雷公藤内酯醇、雷公藤吉碱、雷公藤次碱含量的影响。结果显示,接种密度在15 g/L (FW)时较适合不定根的继代培养和次生代谢产物的积累。250 m L摇瓶中装入100 m L培养基,即装液量为2/5时,培养基利用率最高。随着摇瓶体积的逐渐放大,不定根增长量和3种次生代谢产物含量略有下降,5 L摇瓶中不定根增长量为对照的91.6%,内酯醇、吉碱和次碱的含量分别为对照的91.8%、91.7%和96.9%。6种大孔吸附树脂中,XAD-7处理对不定根的生长有明显促进作用,培养结束时,3种次生代谢产物产量显著提高,当XAD-7浓度为0.5 g/瓶时不定根增长量为对照的1.2倍,内酯醇、吉碱和次碱产量最高,分别为对照的2.9、2.4和2.2倍。培养基中添加消泡剂后不定根增长量、3种次生代谢产物总产量均不同程度下降,其中,LX-603处理后,虽然不定根增长量为对照的85%,内酯醇、吉碱和次碱产量分别为对照的78%、64%和87%,但明显抑制了培养过程中泡沫的产生。研究结果表明筛选的摇瓶逐级放大培养雷公藤不定根的方法效果较好,可为雷公藤不定根生物反应器放大培养奠定基础。
- 李琰赵磊赵磊葛付华温鹏飞
- 关键词：雷公藤不定根摇瓶培养
- 雷公藤AP2/ERF转录因子基因的克隆与分析被引量：4
- 2018年
- 该研究以雷公藤发状根为材料,根据雷公藤根转录组数据设计引物,采用RT-PCR方法克隆得到2个雷公藤AP2/ERF转录因子,分别命名为TwAP2/ERF1基因(GenBank登录号:GAVZ01042389.1)和TwAP2/ERF2基因(GenBank登录号:GAVZ01016765.1)。TwAP2/ERF1基因含有一个525bp开放阅读框(ORF),编码186个氨基酸;TwAP2/ERF2基因的ORF为789bp,编码262个氨基酸;2个基因编码的蛋白质均为亲水性蛋白质。系统进化分析表明,TwAP2/ERF1与油桐(Vernicia fordii)AP2/ERF(APQ47444.1)和木油桐(Vernicia montana)AP2/ERF(APQ47365.1)相似性较高,TwAP2/ERF2与毛果杨(Populus trichocarpa)AP2/ERF(XP_002304640.1)和樱桃(Prunus pseudocerasus)AP2/ERF(ALD84477.1)相似性较高。雷公藤发状根经MeJA诱导后,TwAP2/ERF1基因的相对表达量明显提高,并于处理后9h达到最高值,为对照表达量的16.77倍;而MeJA处理对TwAP2/ERF2基因的表达表现出抑制作用,但于处理后48h相对表达量有所提高。研究表明,雷公藤TwAP2/ERF1转录因子响应MeJA早期诱导正调控,推测其可能参与调控雷公藤植物次生代谢产物的生物合成,该研究结果为阐明雷公藤次生代谢物质的生物合成调控与利用现代生物技术提高雷公藤植物细胞中次生代谢物质的含量奠定了基础。
- 祝传书刘艳陈蒙蒙蒲时冯俊涛张兴
- 关键词：雷公藤发状根茉莉酸甲酯基因表达分析
- 高效液相色谱法测定烟筋中烟碱含量被引量：2
- 2015年
- [目的]建立高效液相色谱测定烟筋中的烟碱含量。[方法]用4%Na OH溶液提取,正己烷和20%H2SO4溶液萃取,Ba（OH）2沉淀的方法提取烟筋中烟碱;选用Hypersil BDS-C18色谱柱,流动相为甲醇-水（0.02 mol磷酸二氢钾加0.52%三乙胺,用磷酸调整p H值为6.5）（体积比60颐40）,检测波长260 nm,流速1.0 m L/min,柱温40℃,进样量10滋L。[结果]烟碱质量浓度在100∽1 000 mg/L时,线性关系良好;添加水平为8.00∽32.00 mg时,回收率为98.37%--99.03%,RSD为0.65%。[结论]该方法能准确快速检测烟筋中烟碱的含量。
- 高保卫董艳玲张璟冯俊涛王智辉张兴
- 关键词：烟碱高效液相色谱
- 雷公藤中雷公藤甲素、雷公藤吉碱和次碱的高效液相色谱-电喷雾串联质谱分析方法被引量：6
- 2018年
- 建立了一种高效液相色谱-电喷雾串联质谱法（HPLC-ESI-MS/MS）测定雷公藤提取物中雷公藤甲素（triptolide）、雷公藤吉碱（wilforgine）和雷公藤次碱（wilforine）3种活性物质的分析方法,比较了雷公藤不同植株部位和不同组织培养产物中3种活性物质的含量差异。分别采用回流和超声两种方法提取。回流提取中,样品经V（甲醇）：V（乙腈）=1：1溶液回流,采用Supelclean LC-Si固相萃取小柱净化;超声提取中,样品经乙醇超声,用OASIS HLB固相萃取柱净化。采用C18色谱柱分离,乙腈和水作为流动相进行梯度洗脱,采用HPLC-ESI-MS/MS测定。结果显示：在雷公藤植株中,雷公藤甲素含量最高的是不定根,发状根、根皮中含量次之,茎、叶中含量很少;雷公藤次碱含量最高的是发状根,其次是根皮,叶中未检测出;发状根和根皮中雷公藤吉碱的含量相当。在0.01~2 mg/kg添加水平下,3种活性物质的回收率在81%~109%之间,相对标准偏差（RSD）为0.4%~1.8%（n=5）。检出限在0.08~0.12μg/m L之间。该方法可以准确、快速地对雷公藤提取物及其产品进行质量监控。
- 张璟陈蒙蒙蒲时祝传书张兴
- 关键词：雷公藤雷公藤甲素
- 雷公藤hmgr基因克隆、序列分析及诱导表达被引量：11
- 2012年
- 【目的】克隆雷公藤萜类生物合成途径限速酶HMGR的编码基因,并分析雷公藤叶悬浮细胞中该基因在不同质量浓度壳寡糖诱导下的表达水平,为雷公藤萜类生物碱的生物合成提供理论依据。【方法】根据GenBank中报道的限速酶HMGR的编码基因序列合成简并引物,采用RT-PCR、5′-RACE和3′-RACE方法从雷公藤叶片中获得hmgr基因的cDNA全长序列;用生物信息学方法对限速酶HMGR进行蛋白结构及功能分析;用半定量RT-PCR方法比较hmgr基因在不同质量浓度壳寡糖诱导下的表达差异;用HPLC分析不同质量浓度壳寡糖诱导下雷公藤叶悬浮细胞中3种萜类次生代谢物(内酯醇、吉碱和次碱)的含量。【结果】获得了雷公藤中编码限速酶HMGR的基因全长cDNA序列,该序列开放阅读框长为1 860bp,编码579个氨基酸。生物信息学分析表明,雷公藤hmgr基因编码的蛋白分子质量为61.678ku,等电点为6.98,蛋白质稳定性参数为41.33,为不稳定蛋白质,氨基酸序列包含2个与NADPH结合的位点(DAMGMNM和VGTVGGGT)及2个与HMG-CoA结合的位点(EMPVGYVQIP和TTEG-CLVA)。半定量RT-PCR结果表明,经50mg/L壳寡糖诱导12h的雷公藤叶悬浮细胞中hmgr基因表达最强,且在该诱导条件下细胞中的内酯醇、吉碱和次碱的含量也有不同程度的提高。【结论】雷公藤HMGR蛋白可能为甲羟戊酸(MVA)途径中的限速酶,编码该蛋白的hmgr基因可促进雷公藤萜类物质的合成。
- 武莹李威祝传书王永宏张兴
- 关键词：雷公藤HMGRRACE壳寡糖
- 杀虫化合物雷公藤内酯醇生物合成关键基因TwTPS27a/b的转录调控研究
- 代谢工程是提高植物活性化合物含量，解决自然资源有限性问题的重要手段，已成为热点研究领域。雷公藤内酯醇是卫矛科杀虫植物雷公藤的主要活性成分之一，极具开发潜力，然而雷公藤自然资源短缺限制了这类新型植物源农药的产业化开发。而利...
- 霍彦波
- 关键词：植物源杀虫剂雷公藤内酯醇代谢调控
- 文献传递
- 烟酸、天冬氨酸和异亮氨酸对雷公藤悬浮细胞生长及次生代谢产物含量的影响
- 2017年
- 为明确烟酸、天冬氨酸和异亮氨酸对雷公藤次生代谢产物含量的影响,通过添加烟酸、天冬氨酸和异亮氨酸来分析雷公藤(Tripterygium wilfordii Hook.f.)悬浮细胞中雷公藤内酯醇、雷公藤吉碱和雷公藤次碱产物的含量。采用HPLC检测分析烟酸、天冬氨酸和异亮氨酸3种物质添加后雷公藤茎悬浮细胞中雷公藤内酯醇、雷公藤吉碱、雷公藤次碱的含量,结果表明,低浓度(0.5mmol/L)烟酸处理能显著促进细胞的生长,其生长速率为对照的1.15倍,但对细胞干重增加影响不大;不同浓度的异亮氨酸处理能极大促进细胞中雷公藤内酯醇、雷公藤吉碱和雷公藤次碱的产生,并分别在0.1、1.5、0.1mmol/L浓度下达到最大值,为4.65、30.24、166.41μg/g,但培养液中次级代谢产物的分泌则相对减少;异亮氨酸对总的雷公藤吉碱和雷公藤次碱含量的增加有促进作用;天冬氨酸处理则主要促进细胞中雷公藤吉碱的产生和培养液中次碱的分泌,并在0.5 mmol/L浓度下其含量达到110.09μg/g、4.06μg/瓶;烟酸处理则相对抑制次级代谢产物的产生和分泌。异亮氨酸处理悬浮细胞可以很大程度上增加雷公藤吉碱,雷公藤次碱的产量,推测异亮氨酸可能参与了雷公藤生物碱的生物合成,该结果的应用对雷公藤细胞培育生产次级代谢产物有重要意义。
- 祝传书陈蒙蒙蒲时刘艳冯俊涛
- 关键词：雷公藤悬浮细胞培养天冬氨酸
- 雷公藤甲素超临界萃取工艺研究被引量：1
- 2018年
- 为了建立快速提取检测雷公藤甲素的分析方法,本试验研究了雷公藤根皮、不定根和发状根中雷公藤甲素的超临界CO_2(SFE-CO_2)萃取工艺,并使用液相色谱质谱联用仪(HPLC-MS)检测雷公藤甲素含量。结果表明:超临界CO_2萃取根皮中甲素较适宜条件为:萃取压力48.265 MPa,萃取温度35℃,改性剂正丁醇、静态萃取时间15min及CO_2体积25 mL。超临界CO_2萃取不定根和发状根中甲素较适宜条件为:萃取压力27.580 MPa,萃取温度55℃,改性剂乙醇、静态萃取时间20 min及CO_2体积25 mL。添加回收率为80%~107%,相对标准偏差(RSD)为7.7%~10.6%。研究表明,超临界CO_2萃取全程分析时间小于1h,与常规溶剂法相比,该方法具有萃取效率高、无污染、经济等优点。
- 张璟祝传书张兴
- 关键词：超临界萃取雷公藤甲素
- 雷公藤不定根两相培养初步研究被引量：3
- 2016年
- 以雷公藤(Tripterygium wilfordii)不定根为材料,通过两相培养技术,研究有机溶剂邻苯二甲酸二丁酯(DBP)不同浓度及培养时间对雷公藤不定根生长及次生代谢产物含量的影响。结果显示,DBP浓度为6%、培养至第6 d时,不定根增长量达1.14 g/瓶,为对照(1.08 g/瓶)的1.06倍;DBP浓度为2%、培养至第8 d时,内酯醇含量达74.96μg/g,为对照(53.67μg/g)的1.40倍;DBP浓度为2%、培养至第2 d时,所收获的内酯醇总产量最高(0.40 mg/瓶),且为对照(0.27 mg/瓶)的1.48倍。本研究结果表明,在培养基中添加一定浓度DBP,虽然适合雷公藤内酯醇的形成,但不适合雷公藤生物碱的形成;不论添加DBP浓度大小、培养时间长短,不定根中吉碱和次碱含量及每瓶总产量均低于对照。
- 李琰公冶祥旭朱惠君赵磊杨钰琪张兴
- 关键词：雷公藤不定根次生代谢产物
