国家自然科学基金(30970114)
- 作品数：8 被引量：31H指数：4
- 相关作者：杨洪江王维林书祥吴国营巴兆粉更多>>
- 相关机构：天津科技大学天津市儿童医院北京化工大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生环境科学与工程农业科学生物学更多>>
- 铜绿假单胞菌临床菌株TTSS表达水平及相关因素分析被引量：7
- 2012年
- Ⅲ型分泌系统(typeⅢsecretion system,TTSS)是铜绿假单胞菌的重要致病因子.分析临床菌株中TTSS的表达水平,对于研究铜绿假单胞菌的致病机制具有重要意义.本研究通过测定融合报告基因exsA-lacZ和exoT-lacZ编码的β-半乳糖苷酶活力,分析了150株铜绿假单胞菌临床菌株exsA和exoT基因的表达水平,发现71株(47.33%)细菌exsA基因的表达为阳性6,5株(43.33%)细菌exoT基因的表达为阳性,基因exsA与exoT表达水平存在正相关(P<0.001),且不同菌株间两者表达水平差异较大.采用统计学方法对实验结果进一步分析发现,TTSS表达与呼吸道感染等临床症状相关(P<0.05);与标本的分离时间相关(P=0.029);与菌株亚胺青霉烯耐药性存在负相关(P<0.05).本研究结果显示,铜绿假单胞菌临床菌株TTSS表达水平差异较大,与多种因素存在相关性.
- 吴国营杨洪江巴兆粉李群吴海鹏林书祥王维
- 关键词：铜绿假单胞菌Β-半乳糖苷酶耐药性
- 天津地区气单胞菌分离株的鉴定与多位点序列分型被引量：4
- 2013年
- 【目的】研究气单胞菌菌株分类情况,并分析其致病性。【方法】采集环境样品和鱼类标本,分离并鉴定气单胞菌菌株,并运用多位点序列分型(Multilocus sequence typing,MLST)方法进行分类研究,利用PCR和测序方法分析毒力基因Aera、Hly、Aha1、GCAT和Nuc的分布。【结果】通过对分离菌株的16S rRNA基因进行分析,确认属于4种不同气单胞菌的7个分离株。发现所有菌株至少有1种毒力基因阳性,其中3株具有4种毒力基因。药物敏感实验显示,6株分离株对3种或3种以上抗菌素具有多重耐药性。最后,对看家基因gyrB、groL、gltA、metG、ppsA和recA进行分析,与MLST数据库中的等位基因序列比对,发现7株分离株均为新的不同的序列型(Sequence type,ST)。【结论】气单胞菌具有较高的遗传多样性。
- 李倩杨洪江何洋石礼涛
- 关键词：气单胞菌RRNA基因耐药性毒力基因多位点序列分型
- 一株铜绿假单胞菌临床菌株耐药的分子机制研究被引量：2
- 2012年
- 目的研究1株铜绿假单胞菌临床分离菌株对亚胺培南耐药的分子机制。方法采用药敏分析系统(VITEK32)和纸片扩散法分析菌株的耐药性,实时定量PCR分析相关耐药基因的表达,PCR和测序法分析相关耐药基因的序列。结果药敏分析结果显示,该菌株对亚胺培南耐受,对美罗培南中介,对其余抗生素均表现为敏感。与对照菌株相比,外膜通道基因oprD的相对表达量仅为0.000 17,有明显下降;而外排泵编码基因mexE的相对表达量为0.60,无显著下降;oprD全基因测序发现第372位甲硫氨酸变成异亮氨酸,氨基酸极性没有发生变化。结论该临床菌株对亚胺培南的耐药性可能是由外膜通道基因oprD表达量下降造成,但不能完全排除氨基酸突变的影响。
- 巴兆粉杨洪江林书祥吴国营王维
- 关键词：铜绿假单胞菌亚胺培南耐药
- 铜绿假单胞菌主要RND外排泵表达与β-内酰胺类抗生素耐药性的相关性研究被引量：5
- 2013年
- 目的探讨铜绿假单胞菌4种主要RND外排泵的表达水平与β-内酰胺类抗生素耐药性间关系。方法采用药敏实验检测临床菌株β-内酰胺类抗生素耐药性;构建转录融合报告基因mexA-lacZ、mexC-lacZ、mexE-lacZ和mexX-lacZ,通过测定β-半乳糖苷酶活力,分析和比较4种RND外排泵表达水平的差异,及其表达水平与菌株抗生素耐药性的相关性。结果共检测151株临床菌株,对羧苄西林、替卡西林、氨曲南和头孢他啶的耐药性分别为19.87%、9.93%、2.65%和26.49%。选择耐2种及以上抗生素的菌株23株和对4种抗生素全部敏感的菌株19株,测定β-半乳糖苷酶活力。耐药菌株的mexA、mexC和mexX基因的表达水平与敏感菌株之间的差异有统计学意义(P均<0.05)。多元线性回归分析发现,mexA、mexC和mexX基因的表达水平分别与羧苄西林、替卡西林和氨曲南的抑菌圈直径存在高度或中度负相关性;贝塔权重数据显示mexA基因表达水平是影响羧苄西林(-0.595)、替卡西林(-0.483)和氨曲南(-0.553)3种抗菌素耐药性的主要因素。结论外排泵MexAB-OprM、MexCD-OprJ和MexXY-OprM的表达水平与β-内酰胺类抗生素耐药性存在显著相关性,MexAB-OprM对临床菌株β-内酰胺类抗生素耐药性具有主要影响。
- 吴国营杨洪江林书祥巴兆粉李群秦旭颖吴海鹏王维
- 关键词：铜绿假单胞菌Β-内酰胺类
- 类志贺邻单胞菌噬菌体ФP4-7裂解酶Gp2的表达及活性测定被引量：3
- 2017年
- 多重耐药菌株的出现给临床治疗带来了困难,噬菌体编码的裂解酶能够杀死病原菌,是潜在的重要杀菌因子.本实验采用PCR技术,扩增类志贺邻单胞菌(Plesiomonas shigelloides)噬菌体ФP4-7裂解酶gp2基因并克隆至质粒p QE30上进行表达,重组蛋白采用Ni-NTA亲和层析法进行纯化.重组裂解酶Gp2最适反应p H为9;裂解酶40,℃保温15,min,酶活剩余56.4%,.底物专一性实验结果显示,该裂解酶能够高效裂解5种革兰氏阴性菌,即铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)、大肠杆菌(Escherichia coli)、粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)、摩氏摩根菌(Morganella morganii)、弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacter freundii),以及3种革兰氏阳性菌,即金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)、地衣芽胞杆菌(Bacillus licheniformis).杀菌实验结果表明,裂解酶Gp2可与EDTA、LAB-35以及SDS配合使用,进一步提高该酶对铜绿假单胞菌和枯草芽胞杆菌的杀菌活性.裂解酶Gp2具有高效广谱裂菌活性,具有潜在的应用价值.
- 何洋荆兆元杨洪江
- 关键词：杀菌活性
- 枯草芽孢杆菌MB8儿茶酚型铁载体的合成与结构分析被引量：4
- 2019年
- 【目的】对枯草芽孢杆菌MB8合成铁载体的条件及铁载体结构进行了研究。【方法】通过正交实验设计分析了铁载体合成的条件,采用质谱分析等技术对铁载体的结构进行分析。【结果】当甘油浓度为4%(mL/L),精氨酸浓度为1.5g/L,接种量为7%时,铁载体产量达到最大(SU=92.58%)。培养基中游离Fe^3+浓度的增加,铁载体产量逐渐下降;当Al^3+浓度为100μmol/L时,能够显著提高铁载体的合成。菌株MB8分泌的铁载体能够促进不溶性针铁矿的溶解,溶解速率比对照提高了6倍。最后,采用质谱分析等技术对菌株MB8分泌的铁载体结构进行了分析,结果显示MB8合成的铁载体与已知铁载体Bacillibactin结构相似。【结论】枯草芽孢杆菌MB8分泌的铁载体具有良好的抑菌作用、清除DPPH自由基的抗氧化能力和加速不溶性针铁矿溶解的能力。枯草芽孢杆菌MB8在多种领域可能具有较好的应用前景。
- 张茜茜朱慧明杨肖静黄志伟龚梦馨张志强牛津徽杨洪江
- 关键词：铁载体枯草芽孢杆菌
- 铜绿假单胞菌重金属离子耐受性调查及相关机制的研究被引量：6
- 2013年
- 旨在调查铜绿假单胞菌临床菌株对多种重金属离子的耐受性,并对相关机制进行初步研究。测定临床菌株在含有重金属离子培养基中的生长状况;构建转录融合报告基因,分析铜绿假单胞菌中RND外排泵CzcCBA的表达水平;PCR方法结合DNA测序分析调节基因czcR和czcS的序列差异。结果显示,158株铜绿假单胞菌临床菌株中,大多数耐受0.002 mol/L Co2+,1株不能在0.001 mol/L Co2+条件下生长,对照菌株ATCC27853在0.003 mol/L Co2+条件下能够生长。分析其中2株临床菌株和对照菌株ATCC27853对其它重金属离子的耐受性,结果显示其耐受趋势与Co2+一致。进一步分析了转录融合报告基因czcC-lacZ在临床菌株中的表达水平发现,β-半乳糖苷酶活力与重金属离子耐受性一致,重金属离子能够诱导β-半乳糖苷酶活力的提高。对操纵子czcCBA的调节基因czcR和czcS序列分析显示,3株菌株中调节蛋白CzcR的氨基酸序列相同,而蛋白CzcS的氨基酸序列则存在多处差异。得出结论,铜绿假单胞菌临床菌株对重金属离子存在耐受性,耐受程度与外排泵CzcCBA的表达水平相关,调节蛋白CzcS某些氨基酸的突变,可能改变了操纵子czcCBA的表达水平。
- 李群杨洪江林书祥王维叶羽洁
- 关键词：铜绿假单胞菌
- 鲜牛奶中耐药性细菌的分离与鉴定被引量：1
- 2012年
- 目的:分离鉴定鲜牛奶中耐药性细菌的分布。方法:利用含有四环素(16μg/mL)、环丙沙星(4μg/mL)或庆大霉素(16μg/mL)的Luria-Bertani平板,分离样品中的耐药性细菌;采用K-B纸片法对分离菌株的耐药性进行确认;利用血平板测定分离菌株的溶血性;利用16S rRNA方法对分离菌株进行鉴定。结果:对30份采自河北张家口地区新鲜无菌牛奶样品的平板筛选结果显示,具有耐受1种以上抗菌素细菌的样品为23份(76.67%),具有耐受2种以上抗菌素细菌的样品为7份(23.33%),具有耐受3种以上抗菌素细菌的样品为1份(3.33%);共分离得到耐受四环素菌株37株、耐受环丙沙星8株、耐受庆大霉素菌株7株;随机挑选6株(每种抗菌素耐受细菌选取2株)进行16S rRNA鉴定,结果为黏质沙雷氏菌(Serratia marcescens)1株、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)2株、琼氏不动杆菌(Acinetobacter junii)1株、阪崎肠杆菌(Cronobacter sakazakii)1株和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)1株;6株细菌中α溶血3株,β溶血1株,γ溶血2株;纸片法验证结果显示,只有1株分离细菌对庆大霉素敏感。结论:鲜牛奶样品中普遍存在多种耐药性细菌,抗菌素平板可以用于初步分析牛奶样品的耐药性细菌。
- 张晓梅杨洪江
- 关键词：牛奶耐药细菌
