国家自然科学基金(81170934)
- 作品数：6 被引量：26H指数：2
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- miR-520h对缺氧状态下人牙周膜细胞MMP-2表达的影响
- 2014年
- 目的:探讨miR-520h对缺氧状态下人牙周膜细胞(HPDLCs)MMP-2表达的影响。方法:将HPDLCs置于1%氧浓度的孵箱中培养0、12、24、48和72 h。用实时荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)和Western blot检测细胞中MMP-2 mRNA和蛋白的表达。构建野生型和突变型MMP-2表达载体,用TargetScan和miRanda等软件预测作用于MMP-2基因3'-UTR靶向miRNA,双荧光素酶报告基因检测系统验证靶向MMP-2 3'-非翻译区(3'-UTR)的miRNA。用qRT-PCR和Western blot技术检测miR-520h对MMP-2表达的调控。结果:HPDLCs在缺氧培养中MMP-2 mRNA和蛋白的表达量明显下调(P<0.01)。软件预测在MMP-2的3'-UTR 516bp位置有一个与miR-520h的结合位点,HPDLCs被转染pre-miR-520后,其表达量增高(P<0.01),MMP-2载体的荧光素酶活性降低(P<0.05)。miR-520h都抑制了HPDLCs中MMP-2 mRNA和蛋白表达(P<0.05)。结论:miR-520h可抑制缺氧状态下牙周膜细胞MMP-2基因表达。
- 冯晓丹张萍张慧宇武曦张纲谭颖徽
- 关键词：缺氧人牙周膜细胞MMP-2
- miR-519家族对人牙周膜细胞内MMP-2表达的影响被引量：1
- 2014年
- 目的探讨miR-519家族对人牙周膜细胞内MMP-2表达的影响。方法构建MMP-2双荧光素酶野生型和突变型表达载体,应用TargetScan和miRanda等软件预测作用于MMP-2 3'-UTR靶向miRNA,利用双荧光素酶报告基因检测系统验证靶向MMP-2 3'-非翻译区(3'-UTR)的miRNA。用qRT-PCR和Western blot技术检测miR-519家族对MMP-2表达的调控。结果软件预测在MMP-2的3'-UTR位置有一个与miR-519家族的结合位点;mimics-miR-519实验组与转染control miR组和突变型载体组相比,能明显降低MMP-2载体的荧光素酶活性(P<0.05)。qRT-PCR结果显示实验组的miR-519较对照组表达显著增高(P<0.01)。qRT-PCR、Western blot结果表明miR-519抑制MMP-2mRNA和蛋白水平表达(P<0.05)。结论 miR-519家族可负性调控人牙周膜细胞内MMP-2基因的表达。
- 冯晓丹张萍张纲谭颖徽
- 关键词：人牙周膜细胞MMP-2
- 组胺及组胺受体的研究进展被引量：17
- 2015年
- 组胺（histamine）是一种自体活性物质,它以无活性结合型存在于肥大细胞和嗜碱性粒细胞的颗粒中。在体内组胺由组氨酸经组氨酸脱羧酶（histidine decarboxylase,HDC）脱羧基而成,具有多种生物活性作用,包括过敏反应,炎性反应等。肥大细胞和嗜碱性粒细胞致敏后能通过脱颗粒释放组胺,并与组胺受体结合,从而产生生物学效应,包括过敏性反应和炎症反应。最新研究发现,
- 冯小倩武曦谭颖徽
- 关键词：组胺组胺受体免疫炎症
- 慢病毒介导的Delta1-RNA干扰对人牙髓干细胞增殖及分化的影响
- 2011年
- 目的探讨Notch配体Delta1基因的特异性RNA干扰（RNA interference，RNAi）对人牙髓干细胞（dental pulp stern cell，DPSC）增殖及分化的影响。方法利用Delta1-RNAi慢病毒载体感染体外培养的DPSC获得稳定的Delta1—RNAi DPSC系；实验分3组：经Delta1—RNAi慢病毒感染的DPSC组（慢病毒组），经空慢病毒感染的阴性对照组和正常细胞的正常对照组，采用细胞生长曲线测定（cell counting kit-8，CCK-8）、流式细胞仪及免疫组化等方法检测细胞生长曲线、细胞周期、细胞核增殖抗原表达的变化情况；对各组细胞进行体外成牙本质分化诱导，采用茜素红染色法检测钙化结节数量的差别，并用碱性磷酸酶（ALP）活性检测ALP及蛋白质印迹法检测诱导后各组细胞中牙本质涎磷蛋白（dentin sialophosphoprotein，DSPP）表达量的区别。结果与正常对照及阴性对照组相比，慢病毒组DPSC增殖能力显著降低，其S期细胞比例及增殖指数分别由正常对照组的22．32±2．35和33．68±4．19显著降低至5．44±0．91和16．0±6．07（P〈0．05），细胞核增殖抗原的表达显著下降；慢病毒组细胞经诱导后形成钙化结节数量明显增多，ALP及DSPP表达含量较正常对照组及阴性对照组显著增高。结论Notch配体Delta1基因被干扰下调后，人DPSC的体外增殖受到抑制，在体外成牙本质诱导培养条件下，细胞向成牙本质细胞的分化加快，证明Notch—Delta1信号转导途径对人DPSC的自我更新及分化的调控起着重要作用，为牙髓损伤后修复提供了理论基础。
- 王雪飞张纲裘松波何飞谭颖徽陈黔
- 关键词：RNA干扰慢病毒感染细胞分化增殖细胞核抗原牙髓干细胞
- NICD过表达对人牙髓干细胞细胞增殖及细胞迁移的影响被引量：7
- 2014年
- 目的:利用Notch1的胞内段(Notch1 intracellular domain,NICD)基因过表达载体建立稳定过表达NICD的人牙髓干细胞(dental pulp stem cells,DPSCs)株,观察NICD过表达对DPSCs增殖、迁移能力的影响。方法:构建含NICD过表达的慢病毒颗粒,并将其转染至DPSCs构建过表达NICD的细胞株(DPSCs/NICD);以DPSCs/NICD为实验组,正常细胞株(DPSCs/wt)和空病毒转染的空载组(DPSCs/vector)作为对照,通过RT-PCR和Western Blot检测NICD mRNA及其蛋白的表达;细胞免疫荧光观察NICD在DPSCs上的表达位置;CCK8法检测细胞的增殖情况;流式细胞技术检测细胞周期中S期的改变;Transwll检测细胞的迁移能力。结果:与DPSCs/wt组和DPSCs/vector组相比,DPSCs/NICD组的NICDmRNA及其蛋白表达水平均明显增强(P<0.05),表达位置在胞膜、胞浆及胞核;细胞的增殖速度加快、细胞周期中S期比例升高、迁移能力增强。结论:NICD过表达使DPSCs细胞的增殖和迁移能力增强。
- 胡超李适廷张纲谭颖徽
- 关键词：牙髓干细胞转染增殖迁移
- 受体活性修饰蛋白1过表达对降钙素基因相关肽促MG-63增殖作用的影响被引量：1
- 2012年
- 目的探讨受体活性修饰蛋白1（receptor activity modifying protein 1，RAMP-1）过表达对降钙素基因相关肽（caleitonin gene—related peptide，CGRP）促进MG-63细胞增殖作用的影响，以期阐明神经多肽系统在口腔颌面部创伤修复中的机制。方法传代培养MG-63细胞并按完全随机法分为3组：RAMP．1过表达组、空载体组、空白对照组。构建人RAMP-1真核表达载体并稳定转染至MG-63细胞中。实时聚合酶链反应、蛋白质印迹法和免疫荧光法分别检测降钙素受体样受体（calcitonin receptor—like Yeeeptor，CRLR）在细胞中的表达及在膜上的分布；在0、24、48、72、96h时使用细胞计数试剂盒8（cell counting kit-8，CCK-8）分别检测3组细胞增殖情况；分别在0、8、16、24h时使用流式细胞仪收集并分析细胞周期。对蛋白质印迹法和实时聚合酶链反应结果进行单因素方差分析和多重比较检验，对细胞增殖和细胞s期百分率的结果采用双因素方差分析并对处理因素进行多重比较检验。结果RAMP—1过表达组MG．63细胞的CRLR蛋白及mRNA表达水平明显高于其他两组（P〈0．05）；RAMP-1过表达组在24、48、72及96h时的A值分别为0．628±0．175、0．896±0．592、1．055±0．004、1．179±0．618，均显著高于相同时间点其他两组A值（P〈0．05），在72h时与空白对照组（0．786±0．048）差距最明显。RAMP-1过表达组在0、8、16及24h时S期百分率分别为（1．25±0．13）％、（68．79±0．56）％、（64．49±1．59）％、（57．82±0．75）％，均显著高于其他两组（P〈0．01），在8h时与空白对照组[（41．235±1．773）％]差距最显著。结论RAMP-1过表达能促进MG-63细胞膜上的CRLR分布，增强CGRP对MG-63细胞的促增殖作用。
- 赵智亮张纲李焰谭颖徽
- 关键词：降钙素基因相关肽过表达
