广东省自然科学基金(021162)
- 作品数：3 被引量：6H指数：1
- 相关作者：张欣周天鸿李月琴李弘剑黎景光更多>>
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- GS介导RNase P对人巨细胞病毒ul54基因mRNA的切割作用被引量：1
- 2006年
- 引导序列(Guide Sequences,GSs)是与mRNA靶序列互补并引导RNase P切割的小RNA片段。设计与人巨细胞病毒HCMV(Human Cytomegalovirus,HCMV)ul54基因D片段mRNA序列互补的GS,将其共价结合到大肠杆菌来源RNase P催化核心M1 RNA,构建成T7-M1GS核酶。通过对ul54基因D片段转录产物体外切割实验和将T7-M1GS构建在含有U6启动子的逆转录病毒载体,与构建在真核载体pEGFP-N1的ul54基因D片段共转染人宫颈癌细胞系HeLa的体内切割实验,证实该核酶具备对ul54基因D片段mRNA的特异切割能力,为利用核酶治疗HCMV感染提供实验基础。
- 李弘剑黎景光苏运贞陈浩军李月琴叶飞舟张欣周天鸿
- 关键词：RNASE荧光定量PCR
- HCMV UL97 mRNA序列特异性M1GS的构建及其体外切割活性研究(英文)被引量：1
- 2005年
- HCMVUL97基因编码一种蛋白激酶,该酶参与调控病毒DNA的复制和衣壳的形成,且序列异常保守,可作为抗HCMV治疗的重要靶位。基于HCMVUL97mRNAT3位点附近的序列,设计一段与该位点互补的引导序列(GuideSequence,GS),并将其与大肠杆菌核酶P催化亚基(M1RNA)的3′末端共价连接,构建了一种序列特异性的M1GS(M1-T3)。体外实验证实,所构建的M1-T3可与UL97mRNA的T3位点特异性结合并产生有效的切割作用。进一步研究M1-T3的结构与其对底物片段靶向切割活性的关系,结果发现在M1RNA与GS之间增加一段88核苷酸桥连序列的M1-T3(即M1-T3*),其靶向切割活性大大增强。此外,去除M1-T33′末端的CCA序列,其靶向切割活性将基本丧失。上述结果表明,这段桥连序列和3′末端的CCA序列是M1-T3重要的结构元件。这不仅有助于阐明M1GS与其底物的相互作用机制,同时也为进一步评价M1-T3在体内对UL97基因表达及病毒复制的抑制活性奠定了基础。
- 张文军李弘剑李月琴何华坤唐冬生张欣周天鸿
- 关键词：人巨细胞病毒
