国家高技术研究发展计划(2013AA102109)
- 作品数：25 被引量：88H指数：6
- 相关作者：陆健蔡国林孙军勇朱德伟李晓敏更多>>
- 相关机构：江南大学宿迁市江南大学产业技术研究院华东理工大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金江苏高校优势学科建设工程资助项目更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程生物学理学农业科学更多>>
- T-RFLP和454焦磷酸测序方法分析制麦过程细菌群落的动态变化被引量：4
- 2019年
- 确定微生物菌群特性是制麦管理与优化的关键一步。本研究以两个不同收获年份及两个同批次不同制麦方式的大麦为样品,采用两种非培养计数方法,即16S核糖体RNA(16S rRNA)末端限制片段长度多态性(T-RFLP)和454焦磷酸测序,检测制麦过程细菌及乳酸菌菌群结构,以期全面、准确分析细菌群落结构及动态变化。研究结果显示:不同收获年份的大麦细菌菌群结构存在差异,整个细菌群落结构随着制麦过程而发生变化,而不同发芽方式之间并没有明显的区别。454焦磷酸测序结果显示乳酸菌有139个运算分类单元(OTU),所有样品有88%的序列覆盖了5个OTU(如Weissella、Lactobacillus和Leuconostoc菌属),说明制麦过程乳酸菌的多样性较低,优势乳酸菌相对数量随着制麦条件变化而波动,并且大麦的收获年份和制麦环境也影响乳酸菌的菌群结构。
- 邱然陆健
- 关键词：麦芽微生物菌群
- 利用蛋白质组学技术建立澳大利亚啤酒大麦醇溶蛋白标准图谱被引量：2
- 2015年
- 啤酒大麦的品种和质量与麦芽的制作和啤酒的酿造紧密相关。选取国内常用的3个进口澳大利亚啤酒大麦品种Hindmarsh、Schooner、Vlamingh及国产啤酒大麦品种苏啤3号和苏啤6号为研究对象,获得这5种啤酒大麦醇溶蛋白的标准双向电泳图谱,通过图像分析结合基质辅助激光解析/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF)鉴定技术,对各品种澳麦电泳图谱上的10个差异明显的特征蛋白质点和共同存在于这3个品种澳麦图谱上的43个共同蛋白点进行了鉴定,共成功鉴定出7个特异蛋白点和34个共同蛋白点,这些蛋白质点构成了以上3种啤酒大麦的蛋白标志物库。本研究为啤酒厂和麦芽厂的进口啤酒大麦品种鉴定提供依据。
- 游丽华李晓敏王迎新蔡国林陆健
- 关键词：啤酒大麦醇溶蛋白蛋白质组学双向电泳
- 富含芦丁的苦荞啤酒的糖化工艺优化被引量：5
- 2018年
- 采用反相高效液相色谱法对苦荞麦汁中的芦丁进行定量检测,研究芦丁降解酶的热稳定性、糖化工艺参数对其含量的影响,最终确定富含芦丁的苦荞啤酒的糖化工艺:糊化锅苦荞投料温度90℃,苦荞添加量为总投料量的40%,料水比1∶6,耐高温α-淀粉酶添加量8 U/g,保温10 min;糖化锅大麦麦芽投料温度45℃,料水比1∶4,中性蛋白酶添加量0.01%,保温30 min后,与糊化锅并醪,进行后续糖化程序。通过对苦荞啤酒生产工艺的优化,使得12°P麦汁中芦丁质量浓度从15 mg/L上升到611 mg/L,其他麦汁常规理化指标与大麦麦芽麦汁差异不大,且实验室酿造的10°P苦荞啤酒中芦丁质量浓度由0.2 mg/L上升到220 mg/L。
- 卞小稳孙军勇孙军勇
- 关键词：苦荞芦丁糖化工艺啤酒
- 酶解机械预处理啤酒糟制备饲用蛋白肽被引量：6
- 2014年
- 啤酒糟经过粉碎后筛分,筛下物经球磨后粗蛋白含量提高到38.8%,比原样提高了36.1%,水溶性蛋白含量提高到2.53%,比原样提高了3.1倍,经中性蛋白酶液态酶解,水溶性蛋白含量达到12.85%,比原样的7.88%提高了1.6倍,机械预处理显著提高了酶解效率。通过单因素实验和混合水平均匀设计实验,确定了啤酒糟最优酶解条件:加酶量2 400 U/g,酶解温度45℃,酶解pH 8.0,酶解时间8 h,此时水溶性蛋白含量能够达到21.31%,提取率达到54.9%。对酶解液进行真空冷冻干燥,制备饲用蛋白肽,粗蛋白含量达到78.8%,氨基酸含量达到74.6%,必需氨基酸含量达到28.18%,多肽含量达到60.8%。
- 张麟蔡国林高献礼陆健董建军余俊红杨梅
- 关键词：啤酒糟球磨酶解均匀设计
- 黑曲霉阿魏酸酯酶基因密码子优化及在毕赤酵母中的高效表达被引量：7
- 2017年
- 【目的】对黑曲霉(Aspergillus niger)阿魏酸酯酶基因进行克隆和密码子优化,使其在毕赤酵母(Pichia pastoris X-33)中高效表达。【方法】以黑曲霉基因组为模板,经重叠延伸PCR扩增得到阿魏酸酯酶基因(Anfae A),并对Anfae A基因进行毕赤酵母密码子偏好性"随机优化"和"一对一优化",全基因合成后分别与表达载体pPICZαA连接,构建表达载体pPICZαA-Anfae A、pPICZαA-op Anfae A I和pPICZαA-op Anfae A II。经Sac I线性化后电转化至P.pastoris X-33中,筛选阳性转化子。摇瓶发酵4.5 d后,测定并比较重组阿魏酸酯酶(re Anfae A)酶活。【结果】密码子优化前阿魏酸酯酶酶活为6.8±0.1 U/m L,基因"一对一优化"和"随机优化"后的重组酶酶活分别为5.2±0.1 U/m L和39.9±0.1 U/m L,"随机优化"后酶活比优化前提高了近6倍,而"一对一优化"后酶活仅为优化前酶活的76.5%。重组阿魏酸酯酶的最适p H为5.5,且在pH 4.5-7.0稳定性较好;最适反应温度50°C,在45-50°C较稳定。【结论】阿魏酸酯酶基因经密码子"随机优化"后进行重组表达,酶活显著提高,对研究阿魏酸酯酶在毕赤酵母及其它宿主中的高效表达具有一定的借鉴意义,也为大规模工业化应用奠定了基础。
- 李兵蔡国林朱德伟陆健
- 关键词：黑曲霉毕赤酵母阿魏酸酯酶密码子优化
- 粉碎及酶处理对啤酒糟理化特性的影响被引量：8
- 2013年
- 对啤酒糟进行机械预处理可以改变啤酒糟的物理结构，使得抗营养因子更容易降解，提高其生物利用率，改善饲用品质。采用球磨和刀片式粉碎预处理酒糟，粒径分布分别在300～1000μm和10—200μm。经球磨和刀片粉碎后的啤酒糟可溶性总糖含量分别提高了2．2倍和1．7倍，还原糖含量分别提高了40％和18．9％。球磨和刀片粉碎后的啤酒糟经纤维素酶、中性蛋白酶分别酶解后，可溶性总糖含量比啤酒糟原样经酶解后分别提高了2．5倍和1．7倍，还原糖含量分别提高了2．2倍和1．4倍，水溶性蛋白含量分别提高了1．8倍和1．4倍，多肽含量分别提高了2．2倍和1．2倍。经球磨后的啤酒糟酶解效率高于经刀片粉碎的啤酒糟，刀片粉碎并筛分可以初步实现蛋白-纤维的富集分离。
- 张麟蔡国林高献礼陆健
- 关键词：啤酒糟球磨蛋白酶解
- 江苏单二啤酒大麦麦芽麦汁中混浊物质的研究被引量：1
- 2014年
- 对江苏单二啤酒大麦麦芽麦汁中混浊物质成分进行了研究,结果表明多糖是麦汁混浊的主要成分,含量为82.57%,其次为蛋白质和多酚。采用离子交换色谱技术对混浊物质中的糖类进行了研究,结果表明糖类物质的单糖组成以葡萄糖为主,其次为半乳糖、阿拉伯糖、木糖。采用SDS-PAGE电泳结合基质辅助激光解析飞行时间串联质谱（MALDI-TOF/TOF）对麦汁混浊物质中蛋白质组分进行了鉴定,结果表明蛋白质分子量主要分布于25~45ku及小于18.4ku的两个部分,且主要来自于麦芽水溶蛋白及醇溶蛋白,质谱分析表明混浊蛋白主要为AMY2/BASI复合体A链,此外还有少量的Z4蛋白、大麦醇溶蛋白γ3、油体钙蛋白2及BTI-CMe2.1。本研究结果对于改良江苏啤酒大麦及其麦芽品质具有指导借鉴意义。
- 张辰东蔡国林张明陆健
- 关键词：啤酒大麦麦汁混浊麦芽品质
- 啤酒污染菌的鉴定及其细胞膜脂肪酸的组成分析被引量：1
- 2017年
- 从纯生啤酒中富集分离得到11株啤酒污染菌。对这11株菌进行16S rRNA同源性分析和系统发育树构建。结果表明:11株菌均属于乳酸杆菌,分属于植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、类布氏乳杆菌(Lactobacillus parabuchneri)和乳酸短杆菌(Lactobacillus brevis)3个种。进一步对11株菌的膜脂肪酸组成进行分析,其脂肪酸组成变化规律与16S rRNA进化分布高度一致。将BN01、BN02和BN03号菌接种到不同程度啤酒环境胁迫的培养基中,发现随着啤酒成分增加,菌的膜不饱和直链脂肪酸和链长18和20碳的脂肪酸含量增加。该研究结果不仅对啤酒污染菌进行了分类鉴定,而且阐述了基于膜脂肪酸调控的污染菌膜对啤酒环境胁迫的耐受机制。
- 邱然陆健
- 关键词：啤酒乳酸杆菌脂肪酸
- 短小芽孢杆菌耐碱性β-甘露聚糖酶基因的异源表达及其酶学特性被引量：10
- 2015年
- 【目的】本研究报道了一种新颖的耐碱性β-甘露聚糖酶基因的异源表达并研究其酶学特性,为其工业应用奠定基础。【方法】通过基因同源性分析以及染色体步移技术,从短小芽孢杆菌Nsic-2中克隆得到甘露聚糖酶基因(manB)。然后分别将manB基因在大肠杆菌BL21(DE3)和枯草芽胞杆菌WB800N中进行表达,并研究其酶学特性。【结果】克隆得到的manB基因序列有一个含1104 bp的开放阅读框,编码一种含有367个氨基酸的甘露聚糖酶(ManB)。经预测其蛋白序列N末端有一个含有31个氨基酸的信号肽。将ManB的氨基酸序列进行同源性分析,发现其与来源于短小芽孢杆菌CCAM080065的甘露聚糖酶具有很高的一致性,可以推测ManB属于糖苷水解酶家族26。manB基因在大肠杆菌BL21(DE3)中成功地表达,得到甘露聚糖酶最高酶活为11021.3 U/m L。与其它甘露聚糖酶比较,ManB在碱性条件下表现出较高的稳定性,在p H6.0-9.0之间酶活相对稳定。纯化后的ManB比活可达4191±107 U/mg。酶反应动力学参数Km和Vmax分别为35.7 mg/m L和14.9μmol/(m L·min)。同时,在枯草芽胞杆菌WB800N中也成功地实现了重组蛋白ManB的分泌表达。【结论】β-甘露聚糖酶基因成功实现异源表达,并得到其酶学性质。本文是首次报道从臭豆腐卤液中分离菌株,克隆表达甘露聚糖酶,并描述其酶学特性。ManB在碱性条件下的酶活稳定性,使得其在工业应用中具备较高的潜在应用价值。
- 唐嘉婕郭苏王伟王伟魏巍
- 关键词：短小芽孢杆菌Β-甘露聚糖酶酶学特性
- 啤酒酵母提前絮凝的研究进展被引量：2
- 2015年
- 酵母提前絮凝是啤酒企业时有发生的现象,因其复杂的影响因素至今对酵母提前絮凝的发生机理及提前絮凝因子的本质没有明确的证实,也因此给整个啤酒酿造产业链造成了极大的困扰。近年来,随着环境污染及各种恶劣天气的出现,导致啤酒酵母提前絮凝发生相对增多,对麦芽企业及啤酒企业造成一定经济和名誉损失。作者综述了啤酒酵母提前絮凝的国内外最新研究进展,包括机理假说、提前絮凝因子的来源、形成机制及控制研究,以期对啤酒产业链提供有效解决酵母提前絮凝的思路和方法。
- 陆健商曰玲孙军勇蔡国林
- 关键词：啤酒大麦麦芽啤酒酵母微生物
