教育部“新世纪优秀人才支持计划”(NCET-07-0701)
- 作品数：22 被引量：96H指数：6
- 相关作者：童德文许信刚王志昇赵红妮陈光达更多>>
- 相关机构：西北农林科技大学中国农业科学院兰州兽医研究所屏东科技大学更多>>
- 发文基金：教育部“新世纪优秀人才支持计划”陕西省科技攻关计划陕西省农业科技创新项目更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 表达IBDV VP2蛋白重组减毒沙门菌活载体疫苗株的构建及免疫原性分析被引量：5
- 2011年
- 通过PCR克隆出IBDV VP2基因,将其插入到表达载体pYA3341中,构建重组质粒pYA3341-VP2。将重组质粒电转入鼠伤寒沙门菌疫苗株X4550(缺失Asd、Cya、Crp基因),获得重组疫苗菌株X4550(pYA3341-VP2)。进行重组菌VP2蛋白表达的鉴定;测定重组菌的稳定性、生长曲线、安全性以及小鼠免疫试验。结果表明,酶切鉴定证实重组质粒构建成功;SDS-PAGE和Western blot证实重组菌表达的VP2蛋白能与鸡抗IBDV阳性血清特异性结合;重组菌株在体外营养选择压力下,可稳定地携带重组质粒传代繁殖,在体内可稳定地定居于肠系膜淋巴结和脾脏;小鼠口服试验证实重组菌无毒性作用;口服重组菌免疫小鼠,ELISA检测产生了抗IBDV抗体;中和试验表明产生的抗体具有中和活性。本试验成功构建了能稳定表达IBDV VP2蛋白的口服减毒鼠伤寒沙门菌疫苗株X4550(pYA3341-VP2),为研究IBD口服基因工程疫苗奠定了基础。
- 许信刚赵红妮陈光达张宽童德文
- 关键词：传染性法氏囊病病毒VP2蛋白减毒鼠伤寒沙门菌
- 表达猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗株的构建及动物免疫试验被引量：7
- 2011年
- 本试验旨在构建表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5蛋白的口服重组减毒鼠伤寒沙门氏菌活载体疫苗株。PCR克隆除去信号肽序列的PRRSV ORF5基因,将其插入到表达载体pYA3341中,构建重组质粒pYA3341-ORF5。将重组质粒电转入鼠伤寒沙门氏菌疫苗株X4550(缺失Asd、Cya、Crp基因),获得重组疫苗菌株X4550(pYA3341-ORF5)。鉴定重组菌GP5蛋白的表达;测定重组菌定居特性及安全性;检测免疫小鼠血清抗体;流式细胞仪检测重组菌对小鼠T淋巴细胞CD4+和CD8+亚群的影响;最后进行免疫猪血清抗体检测。结果表明,酶切鉴定证实重组质粒构建成功;Western blot证实重组菌表达的GP5蛋白能与PRRSV阳性血清特异性结合;重组菌在体内可较稳定地定居于小鼠的肠系膜淋巴结和脾脏中,并在其中表达出GP5蛋白;小鼠口服试验证实重组菌无毒性作用;重组菌口服免疫小鼠可以产生抗GP5蛋白抗体且抗体具有中和活性;重组菌株能不同程度地使CD4+、CD4+/CD8+升高,而使CD8+下降,表明重组菌对细胞免疫功能具有调节作用;淋巴细胞增殖试验表明,重组菌能诱发小鼠产生较强的细胞免疫应答;重组菌口服免疫猪可以产生抗GP5蛋白抗体。本试验成功构建了能稳定表达PRRSV GP5蛋白的口服减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗株,为研究PRRSV口服基因工程疫苗奠定基础。
- 许信刚赵红妮童德文
- 关键词：减毒鼠伤寒沙门氏菌PRRSVGP5蛋白活载体疫苗
- 传染性法氏囊病病毒YL株VP2基因的克隆、序列分析及原核表达被引量：6
- 2010年
- 克隆、序列分析及原核表达鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2基因。根据GenBank已登录的IB-DV VP2基因序列,设计合成一对VP2基因特异性引物,应用RT-PCR技术从陕西省某鸡场分离的IBDV毒株中克隆VP2基因并进行序列分析。再将VP2基因亚克隆于原核表达载体pET-32a中,构建重组质粒pET-32a-VP2,经鉴定正确后转化大肠杆菌BL21菌株进行诱导表达,并进行SDS-PAGE检测。成功克隆IBDVYL毒株VP2全基因序列,核苷酸和氨基酸序列分析表明,YL株为IBDV超强毒株。经IPTG诱导后,SDS-PAGE分析,在宿主菌BL21中成功表达约为53 ku的VP2蛋白。IBDV VP2基因克隆表达成功,为IBDV的分子生物学特性研究提供资料,其表达产物为进一步制备抗IBDV单克隆抗体奠定了基础。
- 黄春旭许信刚童德文王志昇杜谦唐麒麟宁蓬勃
- 关键词：传染性法氏囊病病毒VP2基因基因克隆原核表达
- PCV-2陕西株ORF2基因的克隆、分析及原核表达被引量：2
- 2010年
- 【目的】克隆猪圆环病毒2型陕西分离株(PCV-2SX株)ORF2基因,并进行序列分析及原核表达。【方法】根据GenBank公布的PCV-2ORF2基因的核苷酸序列,设计并合成1对特异性引物,应用PCR方法扩增PCV-2SX株ORF2全长基因,将其克隆入pGEM-T载体中,进行测序及序列分析。然后,将ORF2基因亚克隆入原核表达载体pET-32a中,在大肠杆菌BL21中进行IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE和Western-blotting鉴定。【结果】扩增到了702bp的PCV-2ORF2全长基因。序列分析结果表明,PCV-2SX株ORF2基因与广西分离株(EF675237,ChinaGX)和巴西分离株(DQ861802,am21)的核苷酸序列同源性均达98.0%,氨基酸序列同源性均达98.3%,与其他毒株的核苷酸序列和氨基酸序列同源性分别在89.9%～97.9%和88.5%～98.0%。SDS-PAGE可检测到分子质量约为48ku的融合蛋白,主要以可溶性蛋白形式存在。Western-blotting分析表明,重组蛋白可被PCV-2阳性血清所识别。【结论】成功克隆了PCV-2SX株ORF2基因,并进行了原核表达。
- 邢福珊许信刚童德文王志昇刘文静宁蓬勃张彦明
- 关键词：猪圆环病毒2型陕西分离株ORF2基因原核表达
- SW-OVA接种家兔血清抗体变化的研究被引量：6
- 2009年
- 试验将苦马豆素（SW）与鸡卵白蛋白（OVA）合成人工抗原SW—OVA后免疫家兔，通过酶联免疫吸附法（ELISA）检测抗体变化规律，为免疫学检测和治疗家畜疯草中毒奠定基础。将8只家兔随机分成对照组（4只）、试验组（4只），试验组家兔每2周免疫1次，共免疫4次，第1次免疫后第21天开始采血，以后每周采血1次，每次采血1mL，分离血清，ELISA检测抗体效价。结果发现：SW—OVA能够诱导机体产生很高效价的SW抗体，且高效价的抗体保持时间长，在免疫学检测和治疗家畜疯草中毒方面具有广阔的应用前景。
- 杨合生童德文赵红妮苟晨王业荣王献国
- 关键词：苦马豆素疯草家兔抗体变化
- 牛疱疹病毒Ⅰ型诱导MDBK细胞凋亡的初步研究
- 2011年
- 【目的】研究牛疱疹病毒Ⅰ型(BHV-Ⅰ)对牛肾细胞(MDBK细胞)的作用,为探讨BHV-Ⅰ诱导细胞凋亡的分子机制奠定基础。【方法】常规方法培养MDBK细胞,于对数生长期感染BHV-Ⅰ,同时设立对照组,于感染后不同时间取样,采用细胞形态观察、细胞活性检测、细胞核形态观察、DNA ladder检测、细胞凋亡率检测和细胞内Caspase-3活性检测等方法,对BHV-Ⅰ感染的MDBK细胞进行凋亡指标检测。【结果】接毒后24h,MDBK细胞即出现明显的细胞病变。活性检测表明,感染BHV-Ⅰ的细胞活性降低,并且呈病毒感染量和感染时间的依赖性。感染细胞出现核固缩,并呈新月形变化。DNA电泳结果和流式细胞术检测结果均表明,感染BHV-Ⅰ的细胞DNA出现规律的片段化,细胞凋亡比例随感染时间延长而增加,细胞内Caspase-3活性逐渐升高。【结论】BHV-Ⅰ能够诱导MDBK细胞凋亡,并且在诱导细胞凋亡过程中有Caspase-3参与。
- 张宽许信刚童德文丁丽李兆才李伟
- 关键词：细胞凋亡
- 猪传染性胃肠炎病毒陕西株的分离鉴定被引量：12
- 2011年
- 从陕西省某猪场临床上表现为腹泻症状的病死仔猪肠道内容物及粪便材料中分离获得1株病毒,采用PK-15细胞培养、理化试验及中和试验鉴定后,证实该分离株为猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)。克隆分离株N基因,并将该基因核苷酸序列和推导的氨基酸序列与其他不同来源的TGEV毒株进行比较分析。结果表明,分离株N基因与其他毒株核苷酸的同源性为94.3%～98.3%,氨基酸同源性为95.6%～99.4%。系统进化树结果表明,分离株与TGEV HN2002株(河南株)亲缘关系最近。
- 丁利陈光达许信刚童德文
- 关键词：TGEVN基因
- 大鼠下丘脑ghrelin mRNA在发情期和间情期的表达
- 为探索下丘脑ghrelin mRNA及GnRH mRNA在大鼠(Rattus norregicus)发情期和间情期的表达特点,将12只未经产SD雌性大鼠分为2组,即发情期组和间情期组,每组6只,通过外部观察和阴道涂片相结...
- 张文龙童德文
- 关键词：发情期间情期实时荧光RT-PCR
- 文献传递
- PRRSV陕西分离株ORF5基因克隆、序列分析及原核表达被引量：2
- 2010年
- 克隆猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF5基因,并进行序列分析及原核表达。根据GenBank公布的PRRSV ORF5基因的核苷酸序列,设计并合成一对特异性引物,用RT-PCR方法扩增PRRSV陕西分离株糖基化囊膜蛋白基因ORF5,将其克隆入pGEM-T载体中,进行测序及序列分析。再设计另外1对引物扩增ORF5缺失编码N端31个氨基酸残基的基因片段,将截短的ORF5基因亚克隆入原核表达载体pET-32a中,在大肠杆菌BL21中进行原核表达。结果扩增到603 bp的PRRSV全长ORF5基因,序列分析表明,分离株与北美型代表株VR-2332和欧洲型代表株LV氨基酸同源性分别为87.8%和54.5%。因此推测陕西分离株属于北美型。SDS-PAGE可检测到大小约为38 ku的融合蛋白,主要以可溶性蛋白形式存在。West-ern-blot分析表明,重组蛋白可被PRRSV阳性血清所识别。
- 王志昇许信刚童德文邢福珊陈曦唐麒麟宁蓬勃
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒陕西分离株ORF5原核表达
- 杨凌地区家兔球虫种类与感染情况调查被引量：10
- 2010年
- 采用饱和食盐水漂浮法,对杨凌地区的部分养兔场球虫种类和感染情况进行调查。结果表明,杨凌地区家兔艾美耳球虫（Eimeria）感染率高达83.5%,且各月龄段的兔均有不同程度的感染,其中1~2月龄的幼兔最易感染,感染率为99.4%,3~4月龄的感染率为97.0%,5~7月龄的感染率为78.7%,而12~24月龄的成年兔的感染率为38.9%。检出11种兔艾美耳球虫,其中穿孔艾美耳球虫（E.perforans）、黄艾美耳球虫（E.flsvescens）、无残艾美耳球虫（E.irrestidua）和斯氏艾美耳球虫（E.stiedai）为优势种,分别占总检出率的24.0%、17.0%、14.0%和12.8%。
- 祖尼萨童德文于三科
- 关键词：家兔球虫感染率
