上海市科学技术委员会资助项目(10411955100) 作品数:6 被引量:19 H指数:3 相关作者: 胡忠义 秦莲花 杨华 郭琪 王洁 更多>> 相关机构: 上海市肺科医院 苏州大学 同济大学 更多>> 发文基金: 上海市科学技术委员会资助项目 国家科技重大专项 中央高校基本科研业务费专项资金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
结核分枝杆菌CFP10和MPT48及TB8.4融合蛋白的表达与临床应用 被引量:3 2012年 目的构建结核分枝杆菌CFP10、MPT48和TB8.4融合蛋白,评价其用于结核病血清学检测的价值。方法选取2008年上海市肺科医院肺结核患者150例,非结核肺部疾病患者70例,健康体检者103名,采集血清标本共323份。构建结核分枝杆菌CFP10、MPT48和TB8.4融合表达载体。融合蛋白经免疫印迹分析后,采用酶联免疫吸附试验检测血清标本,运用Medcalc11.5对结果进行统计学分析。结果成功构建重组质粒pET21a—cfp10—mpt48-tb8.4,获得95%以上纯度的融合蛋白。免疫印迹法发现融合蛋白与血清抗体发生免疫反应。融合蛋白检测血清抗体敏感度56.7%(85/150),特异度90.8%(157/173),其中非结核病患者特异度为85.7%(60/70),健康体检者特异度为94.2%(97/103)。结论CFP10-MPT48-TB8.4融合蛋白所具有的免疫反应性,有可能成为结核病血清学诊断的候选抗原。 刘忠华 杨华 秦莲花 金瑞良 崔振玲 郑瑞娟 毕爱笑 胡忠义关键词:分枝杆菌 结核 细菌蛋白质类 重组融合蛋白质类 IgG抗体适体与16kD抗原联合检测血清结核抗体研究 被引量:3 2011年 目的研究结核患者IgG抗体适体与16 kD抗原组合在结核病血清学检测中的应用价值。方法 SELEX技术筛选得到结核患者IgG抗体适体,并将适体构建的混合ELISA体系用于少量血清标本的检测,初步鉴定适体的检测效果,然后将适体与16 kD抗原联合构建ELISA检测体系进行221份血清标本的分析。结果 SELEX筛选得到4个高亲和适体;单适体血清学检测结果显示,适体之间存在交叉互补性;适体两两组合检测效果显示,N1+N6组合的阳性平均值与阴性平均值的比值最高;221份血清标本检测结果显示,N1+N6适体组合、16 kD抗原以及N1+N6+16 kD组合3种检测体系的敏感性和特异性分别为47.31%和92.97%、49.46%和91.41%、51.61%和92.19%,N1+N6适体组合、16 kD抗原以及N1+N6+16 kD组合3种检测体系的结核病组和健康对照组之间的t检验结果依次为t=6.564,P<0.0001;t=5.279,P<0.0001;t=4.348,P<0.0001,结核病组和非结核疾病对照组之间的t检验结果依次为t=4.196,P<0.0001;t=3.014,P=0.0031;t=2.929,P=0.004,差异均具有统计学意义,三种检测方法之间卡方检验显示,差异无统计学意义(P>0.05);单独适体组合与单独抗原检测合并计算的敏感性、特异性为67.74%、84.38%,与N1+N6+16 kD组合检测结果的卡方检验显示,敏感性差异有统计学意义(χ2=8.52,P<0.05),特异性差异无统计学意义(χ2=2.04,P>0.05)。结论 SELEX技术筛选获得的特异性IgG抗体适体和16KD抗原联合具有良好的结核病血清学诊断价值,可用于结核病的实验室诊断。 柏文娟 白广红 胡忠义 刘忠华 杨华 秦莲花关键词:结核 血清学检测 一种五联重复序列在分枝杆菌简单序列重复区间分型中的应用研究 被引量:1 2012年 目的分析微卫星5联简单重复序列在分枝杆菌基因组中的分布情况,并评价其简单序列重复区间(ISSR)分型能力,为分枝杆菌的基因分型及流行病学研究提供新的研究工具。方法实验菌株为17株分枝杆菌菌株和41株MTB临床分离株,17株分枝杆菌菌株包括分枝杆菌标准株15株、MTB临床菌株1株和MTB无毒株(H37Ra)1株。利用MICdb2.0软件分析微卫星数据库收录的分枝杆菌基因组中5联简单重复序列(CAGCG)n的分布特征,并以该序列为基础设计ISSR引物(5’-CAGCGCAGCGCAGCG-3’),用于分枝杆菌种间和种内菌株的基因分型分析。结果生物信息学分析显示(CAGCG)n在数据库收录的大部分分枝杆菌基因组中均有较高含量,其中在H37Rv、CDCl551、牛分枝杆菌和鸟分枝杆菌基因组中出现的次数分别为40、39、39和33次,且主要分布在编码序列区(分别为39、36、38和30次)。ISSR引物对分枝杆菌菌种的基因分型分析显示,15种常见菌种聚为2大簇,第1簇含有2个亚型,第2簇含有4个亚型,种间表现出高度的遗传多样性;ISSR引物对MTB临床菌株的分析结果显示,41株菌株聚为2簇,各簇分别有2个亚型,提示该引物对种内菌株也表现出良好的分辨力。结论以(CAGCG)n建立的ISSR分型体系,可用于分枝杆菌种间和种内菌株的遗传多样性分析。 高诗会 胡忠义 赵英伟 秦莲花关键词:分枝杆菌属 免疫磁珠荧光量子点技术检测结核分枝杆菌 被引量:4 2013年 目的筛选结核分枝杆菌(MTB)免疫磁珠荧光量子点检测方法的最佳配体组合。方法将本室筛选获得的MTB结合肽H8和商业化抗MTB多克隆抗体(Pab)与纳米磁珠偶联,多肽H8、商业化抗MTB单克隆抗体(Mab)和抗热休克蛋白65单克隆抗体(Mabc)与荧光量子点偶联,分别获得2种免疫磁珠和三种功能化荧光量子点,两两组合用于MTB检测,通过显微镜下观察荧光信号以及激光诱导荧光仪测量荧光值,判断不同配体组合与MTB的亲和性及特异性,获得最佳组合及其检测下限。结果偶联Mabc的荧光量子点与免疫磁珠MNP-Pab组合检测MTB结果为阴性,其余5组均为阳性。测量荧光值,检测效果较好的两组组合分别是MNP-Pab+QD-H8和MNP-H8+QD-H8,阳性荧光值与阴性对照组比值分别是4.394和3.956,检测下限均是102条菌/mL。6组组合与12种非结核分枝杆菌(NTM)的亲和性各异,而与3种非分枝杆菌均不结合。结论 MNP-Pab+QD-H8和MNP-H8+QD-H8两组检测效果较好,与MTB亲和性较高,特异性较好,可作为MTB免疫磁珠荧光量子点检测技术的最佳配体组合。 马慧 王祎龙 胡忠义 秦莲花 陈海珍 陆俊梅 王洁 柏文娟 郭琪 高诗会 杨华关键词:免疫磁珠 分枝杆菌 结核 配体 焦磷酸测序技术检测耐多药结核分枝杆菌 被引量:4 2012年 目的利用焦磷酸测序技术,建立结核分枝杆菌菌株耐多药检测方法,并与Bactec MGIT 960药敏法进行比较。方法设计rpoB、katG基因PCR扩增引物和焦磷酸测序引物,建立结核分枝杆菌菌株焦磷酸测序检测方法。利用新确立的焦磷酸测序法检测202株临床分离的耐多药结核分枝杆菌的利福平、异烟肼耐药性。结果与BACTEC MGIT 960法检测药物耐药性结果比较,焦磷酸测序检测多耐药结核分枝杆菌临床分离株的敏感性与特异性为72.8%[95%可信区间(confidence in-terval,CI):66.3%~78.4%]及90.0%(95%CI:80.1%~95.1%)。结论新确立的焦磷酸测序技术可快速检测结核分枝杆菌对利福平、异烟肼的耐药性,其可作为耐多药结核分枝杆菌药敏有效的检测工具。 朱长太 郑瑞娟 王洁 胡忠义关键词:焦磷酸测序 多耐药 结核 焦磷酸测序技术检测结核分枝杆菌异烟肼耐药性的Meta分析 被引量:6 2013年 目的采用Meta分析方法综合定量评价国内外焦磷酸测序技术快速诊断异烟肼耐药的诊断价值。方法检索PubMed、Web of Science、Elsevier、中国知识资源总库(CNKI)、万方和维普,制定文献纳入排除标准,对纳入文献进行质量评分,提取纳入研究的特征信息。检验异质性并根据其结果选择相应的效应模型;采用Meta—Discl.4和Statal0.0软件进行综合定量分析;最后进行敏感性分析。结果检索相关文献114篇,最后纳入9篇。将焦磷酸测序与常规测序相比,其结果一致率100%。以细菌学药敏为金标准.焦磷酸测序检测katG基因时标本总数945份,加权敏感度、特异度及95%可信区间分别是0.77(0.73,0.80),1.00(O.99,1.00)。SROC曲线下面积为98.82%,纳入文献稳定性好。只检测inhA基因时的加权敏感度为0.19(0.15,0.24)、特异度为1.00(0.98,1.00)。结论焦磷酸测序技术检测结核分枝杆菌异烟肼耐药性有很高的特异度,在异烟肼耐药初筛时具有很高的临床价值,是药敏检测的有效辅助手段。(中华检验医学杂志,2013,36:329-332) 郭琪 李觉 胡忠义 郑瑞娟关键词:分枝杆菌 结核 异烟肼 META分析