国家自然科学基金(3017084)
- 作品数：3 被引量：31H指数：2
- 相关作者：汪学龙沈继龙刘庆中蒋作君沈际佳更多>>
- 相关机构：安徽医科大学温州医学院附属第一医院第三军医大学西南医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金安徽省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- Mago nashi:一个日本血吸虫性别决定基因的发现与鉴定被引量：7
- 2005年
- 目的 运用免疫学方法筛选日本血吸虫 (中国大陆株 )童虫cDNA文库 ,寻找血吸虫新基因 ,并克隆和鉴定一个日本血吸虫决定性别的Magonashi样蛋白基因。方法 用混合的血吸虫感染者血清免疫学筛选日本血吸虫童虫cDNA文库 ,随机挑取阳性重组克隆进行测序 ,以获得血吸虫基因 ,并通过BLAST程序进行比较及同源性分析 ,根据分析结果设计合成引物 ,用PCR法扩增出日本血吸虫Magonashi样蛋白基因 (SiM)编码序列 ,将其克隆入pGEM T载体和 pBKCMV载体 ,用双酶切、以质粒为模板进行PCR扩增和测序进行鉴定。结果 本研究共挑取 7个阳性克隆 ,通过测序获得了 5个有表达序列标签(ExpressedSequenceTag .EST)价值的序列 ,并进行了同源性分析 ;用PCR法扩增出大小为 4 4 1bpSjM开放阅读框 ,重组质粒pGEM SjM和 pBKCMV SjM经双酶切均可获得一条为PCR产物一致的DNA片段。 结论 本实验获得了 5个有EST价值的序列 ,并成功地克隆了其中SjM编码基因。
- 汪学龙沈继龙沈际佳蒋作君
- 关键词：日本血吸虫CDNA文库免疫学筛选基因克隆
- HBV感染培养人胎肝细胞后差异应答基因的初步分离和鉴定
- 2007年
- 目的：建立培养人胎肝细胞感染HBV后差异应答基因的消减文库，并从中克隆鉴定出新的应答基因．方法：分别从HBV感染及未感染的胎肝细胞中提取总RNA，用SMARTPCR技术合成全长双链cDNA，经RsaI酶切后将感染细胞的cDNA分为两组，分别衔接两个不同的接头，再与未感染细胞的cDNA进行两轮抑制性杂交及两轮抑制性PCR，将产物与T／A载体连接构建成消减cDNA文库，并转染大肠杆菌进行文库扩增，挑取克隆进行筛选排除假阳性，再行序列分析，鉴定胎肝细胞感染HBV后的差异应答基因．结果：成功构建高效消减的HBV感染胎肝细胞cDNA文库，得到158个白色的克隆，随机选择了128个克隆经PCR扩增获得含有明确单一目的片断的克隆99个，长约100～400bp，经筛选后得到70个克隆，测序表明有16个差异表达的基因，其中可能的新基因有5个．结论：用抑制性消减杂交技术成功建立了HBV感染培养人胎肝细胞的消减cDNA文库，为进一步大规模筛选HBV感染后的应答基因奠定了基础，初步筛选出的新基因片断为进一步研究宫内感染的分子机制提供了依据．
- 王方王小红王宇明汤勃张俊张静李得明
- 关键词：HBV胎肝细胞消减文库
- 日本血吸虫信号蛋白14-3-3的虫体免疫定位被引量：25
- 2003年
- 目的 研究抗重组日本血吸虫信号蛋白 1 4 3 3(rSj1 4 3 3)单克隆抗体对天然Sjl4 3 3的结合活性 ,观察Sj1 4 3 3在虫体内的定位。 方法 从阳性钉螺体内逸出尾蚴 ,感染家兔 ,分别于感染后 1 5d和 4 2d剖杀 ,静脉灌注法收集童虫和成虫制备冰冻切片。利用rSj1 4 3 3单克隆抗体 ,间接免疫荧光法探讨信号蛋白 1 4 3 3虫体内的分布。 结果 免疫荧光染色结果显示 ,rSj1 4 3 3单克隆抗体可特异性地结合天然Sj1 4 3 3抗原表位 ,背景清晰 ,Sj1 4 3 3广泛分布在雌、雄成虫的皮层、皮下层、肌层和实质层 ,前三种组织中特异性荧光呈线状分布 ,实质中特异性荧光弥散 ;童虫中Sj1 4 3 3也广泛的分布在皮层、皮下层、肌层和实质层。 结论 免疫荧光染色成功地确定了Sj1 4 3 3蛋白在成虫和 1
- 刘庆中沈继龙汪学龙
- 关键词：虫体免疫定位单克隆抗体SJ14-3-3成虫童虫
