国家自然科学基金(31272001)
- 作品数：10 被引量：125H指数：6
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- 苹果树腐烂病菌β-葡萄糖苷酶基因的克隆及表达分析
- 苹果树腐烂病(Apple valsa canker)是苹果生产上的三大重要病害之一,由黑腐皮壳菌Valsa mali var.mali引起,该病在我国各苹果产区发生普遍,可造成果树主干及整树死亡,甚至毁园。前期研究表明,...
- 李婷祝山徐静华李保华王彩霞
- 关键词：苹果树腐烂病菌Β-GLUCOSIDASE基因克隆
- 文献传递
- 苹果树腐烂病菌β-葡糖苷酶基因的克隆与原核表达
- 苹果树腐烂病是对苹果产业威胁最大的一种毁灭性病害,在我国各苹果产区发生普遍,主要为害主枝主干,严重时可造成整树死亡甚至毁园,成为制约我国苹果生产的主要限制因子。苹果树腐烂病由黑腐皮壳菌（Valsa mali）引起,研究表...
- 李婷史祥鹏李保华王彩霞
- 关键词：苹果腐烂病Β-GLUCOSIDASE基因克隆原核表达
- 文献传递
- 外源褪黑素对苹果采后灰霉病的防效及防御酶活性的影响被引量：28
- 2017年
- 以‘富士’果实为材料,采用刺伤接种法,研究外源褪黑素对苹果采后灰霉病的防效及其防病机制,结果表明外源褪黑素处理后再接种灰霉病菌,病斑面积显著降低,0.2 mmol·L^(-1)褪黑素处理后间隔72 h以上接种病原菌的处理,防效高达83%以上。0.1～0.4 mmol·L^(-1)褪黑素对灰霉病菌分生孢子萌发和菌丝生长均无明显的抑制作用,但褪黑素可显著提高果实内过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、多酚氧化酶(PPO)和苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性,其峰值是对照的1.86～8.73倍,且在测定时间内始终显著高于对照。表明外源褪黑素通过持续提高果实内防御酶活性诱导苹果对灰霉病的抗性。
- 曹晶晶于子超张颖李保华梁文星王彩霞
- 关键词：褪黑素苹果灰霉病菌防御酶诱导抗性
- 苹果MdT5H1的克隆和功能分析
- 苹果炭疽叶枯病(Glomerella leaf spot,GLS)是近年我国新发现的一种病害,其病原菌为Glomerella cingulata,主要为害叶片和果实,严重影响果实产量和品质。目前化学防治是防治该病害的主要...
- 吴成成练森李保华王彩霞
- 关键词：褪黑素基因克隆基因功能
- 文献传递
- 苹果木葡聚糖酶抑制蛋白基因的克隆与表达分析
- 2018年
- 以‘富士’苹果(Malus pumila)树皮总RNA为模版,利用RT-PCR技术克隆木葡聚糖酶抑制蛋白基因,命名为Mp XEGIP1。通过生物信息学软件对基因c DNA序列、系统进化关系及理化性质进行分析,采用荧光定量PCR技术测定Mp XEGIP1的表达量。构建原核表达载体p ET-Mp XEGIP1,转化大肠杆菌Rosetta(DE3),利用SDSPAGE和western blot检测和验证融合蛋白的表达。结果表明,获得了Mp XEGIP1的全长c DNA序列(登录号MG515243),开放阅读框1 344 bp,编码447个氨基酸。Mp XEGIP1编码蛋白的理论分子量约48.77 k Da,为亲水的不稳定蛋白;57~419位氨基酸为木聚糖酶抑制蛋白保守域。序列多重比对及系统进化树分析表明,Mp XEGIP1编码氨基酸序列与‘金冠’苹果XEGIP完全一致,其次与梨XEGIP序列相似性81%,三者亲缘关系较近。‘富士’枝条接种腐烂病菌后,Mp XEGIP1显著上调表达。原核表达和western blot分析表明,该蛋白以包涵体形式存在,能与HIS抗体特异性结合,证实Mp XEGIP1编码蛋白得到成功表达。
- 李婷吴成成李保华练森梁文星王彩霞
- 关键词：苹果克隆生物信息学分析
- 温度和pH对苹果树腐烂病菌生长及产毒素水平的影响被引量：1
- 2019年
- 以强致病力菌株LXS080601为试材,采用生长速率法和高效液相色谱法,对腐烂病菌LXS080601在不同温度(5~35℃)及pH(pH 3~9)条件下菌丝生长、产孢能力及产毒素水平进行了测定,以期探明温度和pH对苹果树腐烂病菌生长及产毒素水平的影响。结果表明:苹果树腐烂病菌LXS080601在5~35℃和pH 3~9范围内均可生长,最适生长温度为25~30℃,最适pH为4~6;pH对苹果树腐烂病菌产孢也有明显的影响,最适pH为5~6,分生孢子器数量达每皿315个。该菌株在苹果树皮培养基中最适宜产毒素温度为20~25℃,毒素总量最高可达128.06μg·mL-1,10~35℃条件下均可产生5种毒素,而5℃时仅产生3种毒素,毒素总量仅为8.46μg·mL-1;最适产毒素pH为3~6,pH为9时仅检测到4种毒素,且毒素总量最低。
- 孟璐璐闫文晗孙翠翠黄彦李保华王彩霞
- 关键词：苹果树腐烂病菌PH菌丝生长
- 苹果树腐烂病拮抗细菌菌株BJ1的鉴定及其抑菌作用被引量：46
- 2012年
- 为开发对苹果树腐烂病有效的生防措施,对从山东栖霞苹果果园根际土壤中分离的63株细菌进行了筛选,获得有显著拮抗作用的菌株BJ1。采用玻片法和对峙培养法测定BJ1对苹果树腐烂病菌孢子萌发和菌丝生长的抑制作用及其抑菌谱,根据菌株BJ1的形态特征、生理生化特性及16S rDNA序列对其进行鉴定,并用离体枝条烫伤接种法对腐烂病的防效进行测定。菌株BJ1对腐烂病菌的抑制率为78.38%,其发酵滤液的抑菌率达到70.54%;BJ1可显著降低腐烂病菌分生孢子的萌发率,致使菌丝畸形、分支增多及细胞质外渗;该菌株对常见的8株果树病原真菌具有显著的拮抗作用。经鉴定,菌株BJ1属于微嗜酸寡氧单胞菌Stenotrophomonas acidaminiphila。BJ1不同稀释倍数的发酵滤液均对苹果树腐烂病有明显的抑制作用,其稀释50倍发酵滤液的防效仍可达81.06%,表明该菌株具有良好的生防潜力。
- 王彩霞张清明李桂舫董向丽李保华
- 关键词：苹果树腐烂病菌拮抗细菌
- 内生放线菌A-1对苹果果实轮纹病防效及其生防机制研究
- 苹果果实轮纹病是苹果生产中的重要病害之一,果实幼果期轮纹病菌即可侵入,近成熟期大量发病导致果实腐烂,苹果储藏期还可继续发病,严重限制了苹果产业的健康持续发展,造成了巨大的经济损失。目前,施用化学杀菌剂仍然是控制该病害的主...
- 雍道敬史祥鹏李保华王彩霞
- 文献传递
- 苹果N-乙酰基-5-羟色胺-O-甲基转移酶基因的克隆及原核表达被引量：1
- 2018年
- 以‘富士’和‘嘎啦’苹果(Malus pumila)叶片总RNA为模板,利用反转录PCR(RT-PCR)技术,克隆N-乙酰基-5-羟色胺-O-甲基转移酶(ASMT)基因,通过DNAMAN、MEGA 5.1、Prot Param等生物信息学软件对基因cDNA序列、系统进化关系、理化性质等进行分析,将克隆的苹果ASMT基因与表达载体pET32a连接,构建原核表达载体并转入大肠杆菌(Escherichia coli)表达菌株Rosetta(DE3)中,优化原核表达条件,用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测融合蛋白的可溶性,用蛋白免疫印迹法(western blot)和酶活性测定验证目的蛋白的表达。结果表明,获得了苹果ASMT的全长cDNA序列,命名为MpASMT1(Gen Bank登记号MF135479)。该基因开放阅读框(ORF)为1 077 bp,编码358个氨基酸。MpASMT1编码蛋白的理论分子量约为39.7 kDa,等电点为5.42,是非分泌型、疏水的稳定蛋白;其263位组氨酸(His)为催化位点,225位谷氨酸为底物S-腺苷甲硫氨酸结合位点。多序列比对及系统发生树分析表明,MpASMT1编码的氨基酸序列与珠美海棠(M.zumi)MzASMT1(KJ123721)同源性最高,相似性达99.2%,其次为葡萄(Vitis vinifera)ASMT(LOC100248671),氨基酸序列相似性为66.4%。原核表达结果显示,经0.25~2.0 mmol·L^(-1)异丙基-β-d-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导的重组质粒可特异性表达分子量约58 kDa的融合蛋白,且低温条件(15和25°C)能够提高该蛋白的可溶性表达;western blot分析表明融合表达蛋白能与His单克隆抗体特异性结合,纯化蛋白的酶活性为7.8 pmol·mg^(-1)(蛋白),进一步证实MpASMT1编码蛋白成功表达。
- 吴成成李保华练森梁文星王彩霞
- 关键词：苹果生物信息学原核表达
- 苹果树腐烂病菌致病因子及其与菌株致病性的关系被引量：13
- 2014年
- 以苹果树腐烂病菌强致病菌LXS080601和弱致病菌LXS081501为试材,采用二硝基水杨酸（DNS）法和高效液相色谱法（HPLC）测定酶活性和毒素的差异,以期探寻苹果树腐烂病菌不同致病力菌株产生酶和毒素的差异及其与菌株致病性的关系。结果表明：LXS080601在树皮培养基和离体枝条中均产生5种毒素,而LXS081501接种后仅检测到3～4种毒素,且除培养基中产生的间苯三酚外,其余毒素量均显著低于LXS080601;2株菌株均可分泌5种细胞壁降解酶,但酶活性存在显著差异,LXS080601产生的酶活性显著高于LXS081501,且酶活性达到高峰时间较短;说明腐烂病菌产生的酶活性、毒素种类和数量与菌株的致病性强弱呈正相关。
- 李超李保华李桂舫王彩霞
- 关键词：苹果树腐烂病菌毒素细胞壁降解酶
