国家自然科学基金(31060149)
- 作品数：11 被引量：61H指数：7
- 相关作者：黄先忠魏艳玲崔百明院海英徐芳更多>>
- 相关机构：石河子大学安徽科技学院更多>>
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- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 新疆无苞芥OpNAC083基因的克隆与表达分析被引量：6
- 2015年
- 本研究通过对新疆耐逆植物无苞芥幼苗c DNA文库的随机克隆测序分析,获得1条与拟南芥NAC转录因子基因At NAC083高度相似的EST序列(Gen Bank登录号为JZ151841),该序列包含1个723 bp最大开放阅读框(ORF),推测编码240个氨基酸。根据该ORF序列设计引物,利用RT-PCR技术从无苞芥叶片的c DNA中克隆了该基因,命名为Op NAC083。比对分析结果表明在其N端具有一段No apical meristem(NAM)保守结构域;该蛋白的二级结构包含33个α-螺旋和11个β-转角。系统进化树分析结果表明,Op NAC083编码产物与拟南芥At NAC083和琴叶拟南芥ANAC083进化关系较近,属于同一进化分支。实时荧光定量PCR(q RT-PCR)分析基因表达结果显示,Op NAC083在无苞芥的不同组织中都有表达,在叶中表达量最高;高盐胁迫处理2 h、ABA处理6 h明显诱导该基因的表达,但PEG-6000和4℃胁迫却抑制该基因的表达。这表明Op NAC083在无苞芥应对盐和ABA胁迫中可能起着重要作用。
- 魏艳玲贾跃腾杨超凡黄先忠
- 关键词：基因表达抗逆
- 小拟南芥液泡膜H^+-PPase基因OpVP1的克隆、序列分析及表达被引量：8
- 2013年
- 植物液泡膜质子转运无机焦磷酸酶(V-PPase)酸化植物液泡并为液泡的次级转运系统提供能量,在植物耐盐性起着重要的作用。为了克隆小拟南芥液泡膜H+-PPase基因,采用RT-PCR结合RACE的方法从小拟南芥叶片的cDNA中克隆了1个液泡膜H+-PPase基因,命名为OpVP1。OpVP1基因的cDNA全长为2698bp,开放阅读框(ORF)为2313bp,编码770个氨基酸。OpVP1蛋白与琴叶拟南芥、拟南芥相似性最高,分别为98.6%、98.4%。系统进化分析表明OpVP1基因属于Ⅰ型液泡膜质子焦磷酸酶基因。OpVP1蛋白的分子量是80745.9Da,等电点pI为5.13,含有14个跨膜螺旋结构。三维结构分析表明OpVP1蛋白是由2个单体组成的二聚体蛋白。qRT-PCR表明OpVP1基因在角果中表达高于根、茎、叶和花中的表达。
- 徐芳赵云霞魏艳玲李超孙黎黄先忠
- 关键词：焦磷酸酶小拟南芥克隆
- 新疆无苞芥类钙调素蛋白基因OpCML13的克隆与分析被引量：8
- 2014年
- 通过对无苞芥幼苗cDNA文库的随机克隆测序分析，获得1条与拟南芥编码类钙调素13（calmodulin-likel3，CMLl3）高度相似的EST（GenBank登录号为JZl52285）。利用RT-PCR技术从无苞芥cDNA中克隆了该基因，命名为OpCMLl3，该基因开放阅读框（ORF）为447bp，编码148个氨基酸。生物信息学分析表明，OpCMLl3蛋白的二级结构含有4个ca^2＋结合基序（EF-hands）结构，是一个亲水蛋白，无信号肽，无跨膜区域，为非跨膜蛋白；同源建模发现该蛋白包含8个α-螺旋结构和10个β-转角。系统进化树分析表明，OpCMLl3编码产物与拟南芥AtCMLl3和AtCMI。14进化关系较近，属于同一进化分支。半定量RTPCR结果显示，OpCMLl3基因在无苞芥的不同组织中都有表达，在根中表达量最高；高盐胁迫处理6～24h，OpCMLl3基因的表达明显增强，随后逐渐恢复正常表达水平；低温、干旱和ABA处理6h后基因表达明显上调，并且一直保持较高的表达水平。研究表明，OpCMLl3基因在无苞芥逆境胁迫中可能起着重要作用。
- 赵云霞魏艳玲黄先忠
- 关键词：基因表达抗逆
- 新疆无苞芥锌指蛋白基因的克隆及表达分析被引量：5
- 2014年
- 利用同源克隆法从新疆无苞芥中克隆获得1个锌指蛋白基因(OpZFP)。序列分析表明,OpZFP基因的开放阅读框为684bp,推测编码含227个氨基酸的蛋白质。生物信息学分析显示,OpZFP蛋白含有1个典型的C2H2型锌指结构,在C端含有一个可能具有转录抑制功能的EAR结构域。系统进化树分析表明OpZFP编码产物与拟南芥AtZFP1、琴叶拟南芥AlZFP1的进化关系较近。分离了OpZFP基因2 095bp的启动子序列,发现该启动子与拟南芥AtZFP1基因的启动子序列只有84.4%的相似性,启动子分析表明二者存在多处不同的顺式作用元件。半定量RT-PCR分析表明,OpZFP在根、茎、叶、花和果荚中均有表达,在根中的表达量最高。OpZFP基因受高盐、干旱和低温等胁迫的诱导表达,表明该蛋白涉及多种胁迫相关的信号传导途径。
- 郭丹丽王崎崎吴晓庆费春艳黄先忠
- 关键词：锌指蛋白逆境
- 小拟南芥Na^+/H^+逆向转运蛋白基因的克隆及生物信息学分析被引量：19
- 2011年
- 为了克隆新疆特色植物小拟南芥(Arabidopsis pumila)的Na+/H+逆向转运蛋白基因,本研究以经200mmol/L NaCl胁迫诱导12h的叶片总cDNA为模板,采用RT-PCR技术克隆到Na+/H+逆向转运蛋白基因,命名为ApNHX1(GenBank登录号:JF357965)。结果表明:ApNHX1全长开放阅读框1617bp,编码538个氨基酸残基。利用相关的生物信息学软件对ApNHX1蛋白氨基酸的等电点、结构域、二级结构组成、跨膜结构、亲水性等进行研究,并且构建植物NHX1基因家族系统进化树,结构表明ApNHX1和拟南芥、鼠尔芥、盐芥和油菜等的NHX1同源基因遗传距离最为接近,属于Ⅰ型液泡膜Na+/H+逆向转运蛋白。因此,构建植物过量表达载体p35S::ApNHX1,转化到农杆菌GV3101中,这为进一步研究基因功能奠定基础。
- 院海英顾超徐芳崔百明黄先忠
- 关键词：小拟南芥NA+/H+逆向转运蛋白克隆
- 小鼠耳芥MAPKKK基因家族全基因组鉴定及进化与表达
- 2022年
- 丝裂原活化蛋白激酶激酶激酶(Mitogen-activated protein kinase kinase kinases,MAPKKKs)是MAPK级联的重要组成部分,在发育过程和胁迫反应中发挥重要功能。小鼠耳芥(Arabidopsis pumila)是生活在新疆荒漠中的十字花科短命植物,具有很好的耐盐能力。为了探索小鼠耳芥MAPKKK基因家族的进化和功能,本研究通过全基因组分析从小鼠耳芥基因组中鉴定了143个ApMAPKKK基因,分属3个亚族:ZIK(20个)、MEKK(36个)和RAF(87个)。共线性分析表明小鼠耳芥与拟南芥和琴叶拟南芥分别存在74和72个共线性基因,说明该家族在小鼠耳芥基因组中发生了明显的扩张;进化分析表明存在64对复制基因对,Ka/Ks均小于1,以纯化选择为主。利用RNA-seq数据分析ApMAPKKK在盐胁迫和不同组织中的表达特征,结果表明在250 mmol/L NaCl胁迫下,大多数ApMAPKKK基因上调表达,其中ApMAPKKK18-1/2和ApMAPKKK17-1/2显著上调表达;而在8个组织中,ApMAPKKK主要呈现6种表达模式;部分复制基因在盐胁迫和组织中的表达模式存在差异。本研究结果为进一步解析小鼠耳芥MAPKKK基因家族成员响应非生物胁迫信号转导通路的复杂机制奠定了基础。
- 朱前彬甘志承李晓翠张英杰赵合明黄先忠
- 关键词：MAPKKK短命植物盐胁迫基因表达
- 新疆无苞芥Na＋/H＋逆向转运蛋白基因OpNHX1的克隆、表达分析与功能验证被引量：10
- 2014年
- 从耐盐植物无苞芥中克隆获得了1个Na+/H+逆向转运蛋白基因NHX1,命名为OpNHX1(GenBank登录号:KC200248)。OpNHX1基因cDNA全长2 153 bp,包含一个1 605 bp的开放阅读框,编码534个氨基酸。系统进化树分析表明,OpNHX1编码产物与拟南芥、小盐芥亲缘关系较近,属于同一进化分支。实时荧光定量PCR分析表明,该蛋白基因在无苞芥根、茎、叶、花和荚果中均有表达,其中茎中表达量最高。半定量RT-PCR分析表明,该基因受高盐、干旱、低温及ABA的诱导上调表达。进一步将该基因在拟南芥中过量表达,显著提高了转基因植株在盐胁迫下的存活率,说明OpNHX1基因参与了植物的耐盐性。酵母功能互补试验结果显示,该基因转化酵母Δnhx1后可以补充NHX1的缺失,表明OpNHX1参与Na+/H+的转运。
- 赵云霞郭丹丽魏艳玲黄先忠
- 关键词：抗逆
- 小拟南芥高盐胁迫诱导cDNA文库的构建与测序分析被引量：15
- 2012年
- 以新疆小拟南芥为材料,分离了小拟南芥经500mmol/L NaCl胁迫处理的幼苗总RNA,采用改良的SMARTcDNA合成方法合成第一链cDNA,采用LD PCR的方法合成第二链cDNA,经BP反应重组到入门载体pDONR207上,构建了小拟南芥高盐胁迫的入门cDNA文库。文库插入片段平均大小为1.1kb,阳性克隆率为94%。文库经随机挑选克隆测序,生物信息学分析初步获得了10个有功能的基因,其中包含各种酶如水解酶、氧化还原酶等;功能蛋白如离子运输通道蛋白、胁迫诱导蛋白,细胞色素蛋白及激素受体蛋白基因等。可以利用入门文库构建各种目的cDNA文库,本研究为将来从小拟南芥中筛选耐盐基因奠定了基础。
- 院海英徐芳吕新华崔百明黄先忠
- 关键词：耐盐
- 新疆小拟南芥ApNHZ1基因的克隆及生物信息学分析
- 小拟南芥(Olimarabidopsis pumila)是新疆特殊生境条件下广泛分布的绿色植物,属十字花科无苞芥属,花为黄色,果实被毛,和拟南芥的亲缘关系较近。以不同浓度NaCl胁迫处理,观察对幼苗生长发育的影响,结果表...
- 院海英顾超徐芳崔百明黄先忠
- 关键词：小拟南芥NA+/H+逆向转运蛋白克隆
- 文献传递
- 谷物联合收获机抖动板的改进及分析被引量：2
- 2012年
- 为了解决1000系列谷物联合收获机在收获粗茎秆和潮湿作物时抖动板出现堆积的问题,本文从抖动板传动机构的曲柄转速进行理论分析,探寻抖动板发生堆积现象的机理,提高联合收获机工作稳定性。通过分析曲柄理论转速和实际转速之间的关系,确定工作状态下物料被抛离时,传动机构中曲柄的实际转速n=345r/min,为抖动板的改进提供理论依据,并揭示了抖动板结构尺寸改进的合理性。
- 付威杨立东何荣张慧明坎杂
- 关键词：联合收获机谷物
