深圳出入境检验检疫局科研项目(SZ2008004)
- 作品数：1 被引量：1H指数：1
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- 梅毒螺旋体Tp0453和TpN47抗原的制备及应用被引量：1
- 2011年
- 目的表达纯化梅毒螺旋体Tp0453和TpN47蛋白,评价2种蛋白的检测效果,并建立一种新的梅毒抗体检测方法。方法以梅毒螺旋体Nichols菌株基因组DNA为模板,通过PCR扩增Tp0453和TpN47蛋白基因,构建原核表达载体;转化表达菌株后经IPTG诱导表达,并优化表达条件,大规模培养后采用Ni2+亲和柱纯化目的蛋白;纯化蛋白用过碘酸钠法进行HRP标记,采用双抗原夹心ELISA法分别评价两种蛋白的检测效果,在此基础上,按比例混合两种抗原,并建立双抗原夹心ELISA检测法。结果构建了Tp0453和TpN47蛋白的原核表达载体,在低温(27℃)和低剂量IPTG(0.1mmol/L)诱导条件下,有效的实现了Tp0453和TpN47蛋白的可溶性表达。采用Ni2+亲和纯化方法成功纯化出了高纯度的Tp0453和TpN47融合蛋白,ELISA检测结果显示Tp0453比TpN47具有更强的反应性,两种蛋白混合,建立的双抗原夹心ELISA检测法通过血清学试验表明具有很好的敏感度和特异性。结论实现了梅毒螺旋体Tp0453和TpN47蛋白快速高效的表达,并结合2种抗原优势,建立了一种高效的梅毒双抗原夹心ELISA检测方法。
- 朱玉兰黄宗炎刘胜牙王佃鹏叶健忠张登峰
- 关键词：梅毒螺旋体双抗原夹心纯化
