国家自然科学基金(30760261)
- 作品数：6 被引量：24H指数：3
- 相关作者：李剑石庆之李洁王鹏李晓梅更多>>
- 相关机构：南昌大学第二附属医院新疆医科大学第一附属医院解放军第94医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技支撑计划江西省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 基质金属蛋白酶在间充质干细胞分化中的作用被引量：1
- 2009年
- 基质金属蛋白酶参与了众多生长发育和疾病的相关过程,是影响许多生理学和病理学机制的关键因素。文章详细阐述了基质金属蛋白酶在间充质干细胞分化为成肌细胞、成骨细胞、破骨细胞、神经细胞、脂肪细胞过程中所起的重要生物学作用,并对基质金属蛋白酶在间充质干细胞分化中的调控作用进行分析。
- 陈新章诺贝李剑石庆之
- 关键词：间充质干细胞基质金属蛋白酶组织金属蛋白酶抑制物
- 不同程度大鼠冻伤模型的构建被引量：11
- 2010年
- 背景:冻伤目前尚无特异治疗方法,良好的冻伤模型对研究冻伤的机制及修复有重要意义。目的:建立大鼠不同程度皮肤冻伤模型,探讨建立理想冻伤模型的新方法。方法:将一元钱硬币在液氮罐中冷冻至-196℃后紧贴SD大鼠皮肤3,5,10s,24h后分别切取冻伤组织标本行常规苏木精-伊红染色,显微镜下观察组织的病理结构改变。结果与结论:冻伤3s所造成的轻度冻伤只破坏了表皮浅层,基底层未发生改变;冻伤5s所造成的中度冻伤破坏了表皮全层(含基底层)及真皮浅层,但真皮深层及毛囊根部未受损伤;冻伤10s所造成的重度冻伤破坏了真皮深层及毛囊根部。说明冻伤3s所造成的轻度冻伤和冻伤5s所造成的中度冻伤可作为依据建立动物模型。
- 王鹏李剑
- 关键词：冻伤动物模型皮肤
- 无血清培养条件诱导人脐血间充质干细胞向神经细胞的分化被引量：4
- 2009年
- 于2005-06/2007-09在南昌大学第二附属医院江西省分子医学重点实验室拟建立一种在无血清培养条件下诱导脐血间充质干细胞向神经细胞分化的方法。所用无血清培养基血清替代物是将纯化人转铁蛋白直接溶于DMEM培养基中,再将去毒后的BSA、超声波粉碎后的胆固醇、胰岛素及过氧化氢酶直接加入DMEM培养基中稀释至所需浓度。体外分离的脐血单个核细胞以1×109L-1接种,加入含氢化可的松、纤维连接蛋白的无血清培养基,7d后消化传代。取传至2,5,8代的脐血间充质干细胞,达60%～70%融合时以含β-巯基乙醇、丁化羟基苯甲醚的无血清培养基诱导其向神经细胞分化。结果在无血清条件下能培养扩增出大量脐血间充质干细胞,融合后可继续传代扩增;不表达CD34、CD13和CD45,强表达CD166、CD29、CD105,较强表达CD54,80%以上细胞处于G0/G1期;脐血间充质干细胞经诱导后,能形成具有典型神经元形态的神经细胞,神经元特异性烯醇化酶、神经丝蛋白、神经胶质元纤维酸性蛋白均呈阳性表达。提示在自行研制的无血清培养条件下可成功诱导脐血间充质干细胞向神经细胞分化。
- 涂怀军李剑石庆之余小骊李洁吴琼
- 关键词：脐血间充质干细胞神经细胞无血清培养
- 小鼠Oct4基因克隆及其真核表达载体的构建被引量：1
- 2008年
- 背景:Oct4是第一个被发现只在多能细胞中表达的转录因子,其功能被认为是控制细胞多能性的决定性因素。Oct4的这种作用机制目前并未明确。目的:克隆小鼠Oct4基因,构建其真核表达载体pEGFP-N2-Oct4。设计、时间及地点:单一样本研究,于2007-06/09在江西省分子医学重点实验室完成。材料:TRIzolReagent由MolecularRearchCenterInc提供;真核表达质粒载体pEGFP-N2由南昌大学第二附属医院分子医学重点实验室提供。方法:用TRIzolReagent提取小鼠胚胎干细胞总RNA,并经反转录-聚合酶链反应获得小鼠Oct4DNA,将该基因连接克隆到含有增强型绿色荧光蛋白报告基因的真核表达载体pEGFP-N2上,以构建重组质粒pEGFP-N2-Oct4。主要观察指标:总RNA鉴定结果,RT-PCR扩增产物小鼠Oct4分子质量的鉴定结果,重组表达载体的酶切鉴定结果,克隆质粒的测序结果。结果:获取小鼠胚胎干细胞Oct4基因的全序列cDNA。构建Oct4cDNA真核表达质粒时,将增强型绿色荧光蛋白报告基因融合在Oct4基因,并经酶切后DNA电泳鉴定及DNA测序证实。结论:构建重组质粒pEGFP-N2-Oct4成功,将增强型绿色荧光蛋白报告基因融合在Oct4基因的3'端,即保留了Oct4的生物学活性,又便于在研究Oct4生物学功能实验中可检测到蛋白表达。
- 彭敏锋李剑
- 关键词：小鼠OCT4真核表达载体
- 老龄小鼠心肌梗死后wnt信号通路表达的变化及与心脏破裂的关系被引量：6
- 2009年
- 目的研究老龄鼠心肌梗死后wnt信号通路的变化，探讨老龄小鼠冠状动脉结扎后心脏破裂率高和左室重构重的可能机制。方法选择3个月（低龄）和18个月（老龄）雄性C57／BL小鼠各116只，其中每组70只结扎左冠状动脉建立急性心肌梗死（AMI）模型，10只为假手术组，7d时进行心脏超声及血液动力学检测，比较心脏破裂率和左室重构程度；36只按AMI后时间分AMI后3、7、14d三组（每组12只），用Western blot法检测左室心肌和梗死区dvl-1，β-联蛋白（β-catenin）和缝隙连接膜通道蛋白43（connexin 43）的表达。结果老龄组小鼠AMI后1周心脏破裂的发生率明显高于低龄组（36．7％比16．7％，P〈0．05）。老龄组心室腔扩大和收缩功能障碍更为明显，AMI后左心室dvl-1和B—catenin表达高于假手术组（P〈0．05），AMI3d时梗死区dvl-1及β-eatenin表达明显低于低龄鼠（P〈0．05），AMI后connexin 43表达明显低于假手术组（P〈0．05）。老龄组梗死区connexin 43表达在AMI 3及14d时低于低龄组（P〈0．05），7d时高于低龄组（P〈0．05）。结论老龄小鼠AMI后心脏wnt信号通路未能被及时激活，这可能是导致老龄鼠心脏破裂率更高和左室重构更重的机制之一。
- 黄莺马依彤杨毅宁刘芬陈邦党李晓梅
- 关键词：心肌梗死心室重构心脏破裂WNT信号通路
- 人胚胎干细胞无血清无饲养层培养体系的建立被引量：1
- 2013年
- 目的拟建立人胚胎干细胞无血清无饲养层的培养体系。方法将干细胞分别置于Knockout培养基(第1组)、自制无血清培养基(第2组)和添加bFGF及肝素的改良无血清培养基(第3组)中培养25代后观察比较3组干细胞形态学变化、克隆数目及大小。并借助细胞免疫组化、流式细胞术和体外拟胚体形成等方法检测干细胞的未分化状态和全能性。结果传代25次后,第2组克隆逐渐分化。第1组和第3组的干细胞均呈典型的人胚胎干细胞形态特征;细胞表达Nanog,Oct-4,Tra-1-60,SSEA-4,但不表达SSEA-1;流式检测也显示SSEA-4高表达,SSEA-1低表达;体外分化能形成拟胚体。通过单位视野下克隆个数及大小的比较,结果显示第2组与第1组和第3组间的差异显著。结论本研究通过改良本实验室已获得国家专利的无血清培养基,初步建立了人胚胎干细胞无血清无饲养层培养体系,培养效果与公认培养体系无明显差异。
- 喻松霞郭玲玲贺文凤贺玲李洁李剑
- 关键词：人胚胎干细胞BFGF肝素
