吉林省杰出青年科学基金(20050113)
- 作品数：17 被引量：46H指数：4
- 相关作者：谭岩方艳秋段秀梅许淑芬徐立更多>>
- 相关机构：吉林大学第一医院吉林大学第二医院广东医学院更多>>
- 发文基金：吉林省杰出青年科学基金吉林省科技厅国际合作项目国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 重组人β_2糖蛋白1第一结构域对抗磷脂抗体综合征患者血清诱导人脐静脉内皮细胞产生ICAM-1、MCP-1的影响被引量：4
- 2006年
- 目的:探讨重组人β2糖蛋白1第一结构域(hrβ2GPⅠDⅠ)对抗磷脂抗体综合征(APS)患者血清诱导人脐静脉内皮细胞产生细胞间黏附分子1(ICAM1)、单核细胞趋化蛋白1(MCP1)的影响。方法:应用hrβ2GPⅠDⅠ二聚体处理前后的APS患者血清分别与人脐静脉内皮细胞(HUVEC)共孵育,细胞ELISA和RTPCR方法分析处理前后HUVEC表达ICAM1、MCP1的变化。结果:hrβ2GPⅠDⅠ二聚体处理后的APS患者血清较处理前相比,与其孵育的HUVEC表达ICAM1、MCP1在蛋白和mRNA水平均明显降低。结论:hβ2GPⅠDⅠ可中和APS患者血清中的大部分致病性抗β2GPⅠ抗体(anti-β2GPⅠ)。
- 付嘉谭岩方艳秋徐立李明辉刘桂英姜艳芳段秀梅刘力华许淑芬
- 关键词：抗磷脂抗体综合征人脐静脉内皮细胞ICAM-1MCP-1
- 人肌红蛋白原核表达载体的构建、表达及蛋白纯化
- 2007年
- 目的:构建人肌红蛋白(Mb)原核表达载体并诱导其表达、纯化及鉴定目的蛋白。pQE方法:根据已报道的人Mb基因序列,采用RT-PCR技术从人骨骼肌组织中获得肌红蛋白cDNA序列。将所得的PCR产物插入克隆载体pGEM-Teasy中,得重组质粒,经酶切、PCR及测序鉴定正确后,将酶切目的片段插入原核表达载体pQpQEE30中并转化大肠杆菌(E.coli)M15,通过IPTG诱导表达出带有6个组氨酸的融合蛋白。经镍固定金属亲和层析纯化。结果:序列分析表明,人Mb基因成熟肽编码区含有465 bp,编码153个氨基酸;与GenBank(NM203378)中已报道的Mb核苷酸序列有98.50%同源性。经IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳和免疫印迹分析显示,表达的融合蛋白占菌体蛋白总量的31%,相对分子质量约为16700,并与商品化的人Mb单抗呈特异性反应。经Ni2+-NTA agarose纯化获得SDS-PAGE电泳下单一条带。结论:在大肠杆菌中获得了人Mb的高效表达。
- 车媛媛许淑芬方艳秋段秀梅史宏博刘晓林刘力华候巍谭岩
- 关键词：肌红蛋白基因表达大肠杆菌
- Topiramate对宫内缺血大鼠脑组织含水量及神经细胞凋亡的影响
- 2006年
- 目的:观察topiramate对宫内急性脑缺血损伤的Wistar大鼠神经细胞凋亡及脑组织含水量的影响。方法:夹闭足月妊娠大鼠子宫血管,制成急性脑缺血损伤的新生鼠模型(n=315),随机分为topiramate 1次和5次给药组及缺血组(n=105),另取105只正常Wistar大鼠作为正常对照组。治疗组给予topiramate,观察脑缺血后再灌注3 h、6 h、24 h、3 d、7 d、14 d、21 d、28 d海马TUNEL法标记的凋亡神经细胞的变化及生后7 d内脑组织含水量的变化。结果:topiramate 1次组脑组织含水量12和72 h显著低于缺血对照组,topiramate5次组48和72 h显著低于缺血对照组及topiramate 1次组(P<0.05);topiramate 1次组24 h、3 d、7 d、21 d凋亡神经细胞数明显低于缺血对照组,topiramate 5次组3和7 d凋亡神经细胞数明显低于缺血对照组和topiramate1次组(P<0.05)。结论:topiramate可以明显减少宫内急性脑缺血后新生大鼠神经细胞的凋亡数目,并可以缩短凋亡持续时间;延缓脑水肿的发生,减轻脑水肿的程度,并缩短其持续时间,多次给药组的作用明显高于1次给药组。
- 武辉方艳秋王东轩谭岩
- 关键词：TOPIRAMATE抗惊厥药脑水肿细胞凋亡
- 待产妇与不同疾病患者血清蛋白电泳图谱的鉴别分析被引量：1
- 2007年
- 目的:了解待产妇和肾病型、慢性肝损伤型及异常浆细胞克隆增殖型患者血清蛋白电泳图谱特征。方法:采用国产全自动琼脂糖电泳系统对待产妇女和肾病、肝病、多发性骨髓瘤等患者新鲜血清标本进行血清蛋白电泳分析。结果:待产妇血清白蛋白的相对值、γ球蛋白的相对值降低,而α2、β球蛋白相对增加,不同生理条件或不同疾病下其血清蛋白组分变化均不同。结论:新鲜血清蛋白质经电泳后,可精确地显示并定量不同生理及病理条件下血清蛋白成分的变化。
- 钟兰林瑜蔡玉玲齐亚灵徐立方艳秋谭岩
- 关键词：待产妇电泳图谱
- Flt3配体基因原核表达载体的构建、表达、纯化及生物学活性鉴定被引量：3
- 2007年
- 目的:获得人Flt3配体(FL)cDNA胞外段序列,构建表达人FL蛋白的原核重组表达载体并诱导其表达、纯化及鉴定目的蛋白。方法:提取K562细胞总RNA,利用巢式PCR技术扩增出目的cDNA序列,构建重组质粒pGEM-FL,经酶切、PCR和测序鉴定后,将rhFL基因亚克隆到原核表达质粒PQE30,构建重组表达质粒PQE30-rhFL,在大肠杆菌M15中诱导表达。用镍凝胶亲和层析方法纯化目的蛋白,Westren blotting杂交鉴定纯化蛋白,并用造血集落形成实验检测生物学活性。结果:经测序证实,获得的目的基因与GenBank公布的FL基因序列100%一致。构建的原核表达载体PQE30-rhFL在大肠杆菌M15中经1 mmol.L-1IPTG诱导后表达出相对分子质量为25000的蛋白,镍柱纯化后经抗组氨酸单克隆抗体进行Westren blotting,在相对分子质量为25000处可见特异性着色带。结论:构建了原核表达载体PQE30-rhFL,并成功诱导了rhFL蛋白的表达,通过镍凝胶亲和层析法获得纯度较高的rhFL蛋白。
- 刘小林段秀梅方艳秋谭岩史宏博车媛媛刘力华
- 关键词：配体原核表达巢式聚合酶链反应
- 口服重组β2糖蛋白1的实验性抗磷脂综合征小鼠CD4^+CD25^+调节性T细胞及Foxp3 mRNA表达变化被引量：3
- 2010年
- 目的:观察口服重组人β2糖蛋白1(rhβ2GP1)的实验性抗磷脂综合征(EAPS)小鼠CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+Treg)数量和功能变化,探讨EAPS口服耐受机制。方法:以rhβ2GP1主动免疫BALB/c小鼠建立EAPS模型,口服耐受组在EAPS小鼠免疫10天前经胃肠道给予rhβ2GP1,在免疫12周后检测各组小鼠抗β2糖蛋白1抗体(anti-β2-GP1)、抗心磷脂抗体(aCL)、流产率(%)、活化部分凝血活酶时间(aPTT)、血小板计数(PLTPBC);以流式细胞术检测各组小鼠PBMC中CD4+CD25+Treg细胞百分率;RT-PCR检测转录因子Foxp3mRNA的表达。结果:耐受组小鼠与模型组相比,anti-β2-GP1、aCL水平明显降低,aPTT缩短,PLTPBC升高,流产率降低,均具有显著性差异(P<0.05);耐受组小鼠PBMC中Foxp3mRNA表达在第4、8、12周均高于对照组(P<0.05),此后下降,20周时与正常对照组无明显差异(P>0.05),4周时与模型组无差异(P>0.05),8周后模型组逐渐降低,12周后降低明显(P<0.05);耐受组PBMC中CD4+CD25+Treg细胞百分率与对照组相比,未见显著性差异(P>0.05)。结论:CD4+CD25+Treg在口服耐受的诱导中发挥作用。
- 付嘉方艳秋司传平熊斌谭岩徐立
- 关键词：抗磷脂综合征口服耐受FOXP3
- 凋亡抑制蛋白Survivin在原发性肝细胞癌中的表达及其意义被引量：5
- 2008年
- 目的:通过研究凋亡抑制蛋白Survivin在原发性肝细胞癌(HCC)中的表达情况及其与临床病理特征之间的关系,探讨Survivin在HCC发生、发展中的作用。方法:采用流式细胞术(FCM)及免疫组化(SP)法对30例肝癌组织、20例癌旁组织及10例正常肝组织中的Survivin蛋白进行定量检测,并结合临床资料进行分析。结果:①Survivin在HCC组织中的表达率显著高于癌旁组织及正常肝组织(P<0.05);②Survivin蛋白在癌旁正常组织中无表达;③Survivin蛋白的表达与肿瘤的大小、部位、包膜、AFP无关联(P>0.05),而与镜下门静脉癌栓形成有关联(P<0.05)。结论:Survivin基因蛋白在HCC组织中过表达是反应HCC生物学行为的有效指标,Survivin基因蛋白表达的特异性有望成为HCC基因诊断与治疗的靶点。
- 齐亚灵方艳秋段秀梅谭岩陈东
- 关键词：凋亡抑制蛋白SURVIVIN免疫组织化学流式细胞术
- hβ_2GPⅠ第一功能区基因单体和二串联体的克隆和表达
- 2006年
- 目的:构建h2βGPⅠ(h2βGPI)第一功能区基因单体及二串联体的原核表达载体PQE30-β2GP-ⅠDI和PQE30-β2GPⅠ-DI2,并在大肠杆菌M15中进行高效表达。方法:应用PCR技术扩增hβ2GPⅠ第一功能区基因的单体β2GPⅠ-DI,并根据同尾酶特性构建hβ2GPⅠ第一功能区基因二串联体β2GPⅠ-DI2,将获得的单体和二串联体分别与PGEM-T easy载体连接测序,测序正确后分别克隆于原核表达载体PQE30中,构建成重组表达载体PQE30-β2GPⅠ-DI和PQE30-β2GPⅠ-DI2,在大肠杆菌M15中以l mmol.L-1IPTG诱导蛋白表达,经Western blotting鉴定目的蛋白的抗原性。结果:表达了hβ2GPⅠ第一功能区基因的单体及二串联体的蛋白,相对分子质量约为9 000和17 000,其表达量均可达菌体总蛋白的25%,并具有hβ2GPⅠ的抗原性。结论:成功构建了hβ2GPⅠ第一功能区基因的单体及二串联体的原核表达载体,并诱导了蛋白的高效表达。
- 李明辉谭岩姜艳芳刘力华方艳秋许淑芬段秀梅付嘉
- 关键词：基因表达
- COX-2、Survivin蛋白在原发性肝细胞癌(HCC)中表达及其相关性研究被引量：3
- 2008年
- 目的:探讨环氧合酶-2(Cyclooxygenase-2,COX-2)、凋亡抑制蛋白Survivin在HCC组织中的表达情况及两者的相关性,为HCC的基因诊断和治疗提供实验依据。方法:采用流式细胞术(FCM)及免疫组化(SP)法,定量检测肝癌、癌旁及正常肝组织中的COX-2、Survivin蛋白。结果:在HCC组织中,COX-2及Survivin蛋白阳性表达显著高于癌旁及正常对照组,两者的表达显著正相关(P<0.01)。结论:COX-2、Survivin蛋白在HCC组织中过表达是反映HCC生物学行为的有效指标,两者在HCC发生、发展中可能起协同作用。
- 方艳秋齐亚灵孙绍骞谭岩
- 关键词：原发性肝细胞癌环氧合酶-2生存素
- 人β_2糖蛋白1的重组表达及对抗磷脂抗体综合征患者血清诱导内皮细胞产生ICAM-1的影响被引量：8
- 2006年
- 目的:探讨重组人β2糖蛋白1(hrβ2-GP1)对抗磷脂抗体综合征(APS)患者血清诱导内皮细胞系产生细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的影响。方法:应用pQE30表达载体表达hrβ2-GP1,Western blotting对重组蛋白进行鉴定;应用hrβ2-GP1处理前后的APS患者血清分别与内皮细胞株EA.hy926共孵育,细胞ELISA和RT-PCR方法分析处理前后EA.hy926表达ICAM-1的变化。结果:成功构建pQE30-hβ2-GP1,并对表达产物进行了纯化和鉴定,所获得的蛋白与预期的大小一致,并具有人β2-GP1的抗原性;rhβ2-GP1处理后的APS患者血清与处理前比较,与其孵育的内皮细胞系EA.hy926表达ICAM-1在蛋白和mRNA水平均明显降低,这种抑制作用随着rhβ2-GP1的浓度增加而逐渐增强。结论:抗β2糖蛋白1抗体(anti-β2GP1)促进内皮细胞系EA.hy926表达ICAM-1,hrβ2-GP1可中和此作用。
- 付嘉方艳秋徐立李明辉刘桂英姜艳芳段秀梅刘力华许淑芬谭岩
- 关键词：抗磷脂抗体综合征内皮细胞系
