广东省自然科学基金(032239)
- 作品数：12 被引量：115H指数：7
- 相关作者：林俊芳郭丽琼杨帆熊盛张秀春更多>>
- 相关机构：中国热带农业科学院华南农业大学莆田市农业科学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金广东省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 香菇ras和gpd启动子的克隆与功能鉴定被引量：14
- 2005年
- 以香菇基因组DNA为模板,利用PCR技术克隆了香菇1个ras启动子Lras,2个gpd启动子Lgpd1和Lgpd2。这3个启动子的大小分别为715bp、1056bp和611bp,与已报道的ras和gpd启动子的同源性很强。对这3个启动子的分析结果表明,它们都含有丰富的启动子顺式作用元件。将这些启动子片段分别与GUS基因连接构建了表达载体,并将这些表达载体导入草菇菌丝体中,检测其活性,最终显示3个片段都有启动GUS基因表达的能力,其中Lgpd1启动子活性最强,Lras启动子次之,Lgpd2最弱。
- 于晓玲林俊芳郭丽琼王树昌
- 关键词：香菇原生质体转化GUS基因
- Δ~6-脂肪酸脱氢酶基因克隆及其共转化表达载体的构建被引量：4
- 2004年
- 采用RT-PCR的方法从海南玻璃苣中克隆了Δ6-脂肪酸脱氢酶基因(Δ6-dsa)。DNA序列测定结果表明,Δ6-dsa全长1347bp编码448个氨基酸。Δ6-dsa序列在genbank中采用BLAST程序进行同源序列分析,结果表明,Δ6-dsa核苷酸序列与克隆自美国德克萨斯州的玻璃苣Δ6-脂肪酸脱氢酶基因的核苷酸序列完全相同。Δ6-dsa克隆进T-easyVector后形成质粒pGΔ6-DSA。把质粒pGΔ6-DSA上的Δ6-脂肪酸脱氢酶基因片段克隆进含有T-DNA和35S启动子的质粒pGIN22中,形成含有目的基因的表达载体pGIN23。把表达载体pGIN23与另一个含有T-DNA、启动子、筛选标记基因的表达载体pLPN28进行亚克隆,使得筛选标记基因和Δ6-dsa分别插入到同一质粒的2个相互独立的T-DNA内,构建成共转化表达载体pLIN61。
- 张秀春林俊芳郭丽琼
- 关键词：△^6-脂肪酸脱氢酶共转化筛选标记基因酶基因DSA
- 草菇gpd启动子的克隆及序列分析被引量：12
- 2004年
- 根据已报道的gpd启动子的序列设计合成了一对引物,以草菇菌丝的基因组DNA为模板,采用PCR扩增的方法克隆出一条长1367bp的DNA特异片段gpd-vv。gpd-vv序列用Promoter Scan Ⅱ和Promoter Predictions软件进行分析,结果表明,其序列上有6个核心启动子区,而且除了具有一般启动子的CAAT-box、TATA-box等基本顺式作用元件外,还含有几个重要的元件如G-box,GC-motif,CTrich-motif等。经Tfsitescan Service分析,gpd-vv序列还包含多个转录因子的结合位点,包括GCR1,GCN4,AFT1,Repressor of CAR1等。
- 杨帆刘瑞瑞林俊芳郭丽琼
- 关键词：核心启动子GC草菇特异片段菌丝
- 银耳芽孢完整细胞高效转化体系的建立被引量：13
- 2008年
- 银耳(Tremella fuciformis)属于高等担子菌,其担孢子芽殖产生酵母状分生孢子称为银耳芽孢.银耳芽孢单核,能像酵母那样快速生长且容易培养,具备优良外源基因表达宿主的特点.本研究以gpd-Gl启动子分别与绿色荧光蛋白基因gfp和潮霉素抗性基因hph连接构建表达载体pGlg-gfp和pGlq-hph;设置潮霉素浓度梯度在3种培养基中对银耳芽孢的敏感性进行测定,结果表明银耳芽孢在不同的培养基上对潮霉素的敏感性不同,在MA培养基上其最低敏感浓度为5μg/mL;采用电击法把pGlq-hph质粒转化进银耳芽孢完整细胞,假定转化子经MA筛选培养基筛选,结果表明银耳芽孢完整细胞电击转化的最佳参数为:STM电击缓冲液、银耳芽孢浓度1.0×108个/mL,电击体积200μL,表达质粒6μg,电击电压2.0kV/cm,电击后采用MB液体培养基静置预培养48h,转化率达277个/μgDNA.采用最佳电击参数把质粒pGlg-gfp和pGlg-hph按1︰1共转化银耳芽孢,转化子经过筛选培养基筛选、PCR鉴定及Southern杂交验证,结果表明受鉴定的8个转化子中有3个整合了gfp基因,其共转化率为37.5%.这3个gfp基因转化子的芽孢在激光荧光显微镜下可观察到发出强烈的荧光,表明了外源gfp基因能够在银耳芽孢中获得高效率的表达.
- 郭丽琼柳永赵姝娴刘二鲜林俊芳
- 关键词：电击转化基因表达GFP基因
- 利用TAIL-PCR技术克隆猴头菇β-glucosidase基因被引量：8
- 2005年
- 根据已知的β-glucosidase基因的保守序列设计引物,从猴头菇的菌丝体中克隆到β-glucosidase基因片段B1,再利用TAIL-PCR技术扩增B1两端的侧翼序列B2和B3,B2和B3序列经Blastn、ORF和Primer5·0软件分析后,再设计B2和B3侧翼序列的特异引物对猴头菇的基因组DNA进行扩增,最终扩增到全长的β-glucosidase基因,其大小为2226bp。
- 杨帆林俊芳郭安平郭丽琼贺丽卡
- 关键词：E基因猴头菇克隆侧翼序列特异引物
- 抗冷冻蛋白基因遗传转化草菇的研究被引量：37
- 2005年
- 采用RT PCR技术从瑞典的北极云杉卷叶蛾幼虫中扩增出抗冷冻蛋白基因 ,利用基因枪法遗传转化草菇。PCR检测和Southern杂交结果证明 ,抗冷冻蛋白基因已整合进草菇基因组。低温胁迫试验结果表明 ,转基因草菇具有较强的耐低温能力。转基因草菇生物学特性观测结果显示 ,大多数草菇转化子的生长速率明显地慢于对照的宿主菌株 ,多数转化子的菌丝也明显地比宿主菌丝细弱。转化子筛选结果表明 ,采用三轮的转化子筛选程序 ,即第一轮在固体培养基上筛选、第二轮和第三轮在液体培养基中筛选 ,有利于获得真实转化子和淘汰假转化子。转基因草菇一代低温胁迫结果证明 ,转基因草菇后代仍然具有较强的低温耐受能力 。
- 郭丽琼林俊芳熊盛陈守才
- 关键词：草菇基因枪法
- 双T-DNA表达载体转化大豆的研究被引量：17
- 2005年
- 利用含有筛选标记基因和目的基因Δ6-脂肪酸脱氢酶基因的双T-DNA共转化表达载体pLIN61,经农杆菌EHA101介导,采用子叶节转化法转化大豆,使用除草剂Glufosinate作为筛选剂,获得了一批携带有玻璃苣Δ6-脂肪酸脱氢酶基因的转基因大豆,转化效率为2.0%,共转化频率及实际转化率分别为56.25%、1.12%。PCR检测和Southern杂交结果证明,玻璃苣D6D已经整合到大豆的基因组上。RT-PCR检测结果显示,玻璃苣Δ6-脂肪酸脱氢酶基因在转基因大豆的转录水平上得到了表达。
- 张秀春郭丽琼吴坤鑫林俊扬林俊芳
- 关键词：△^6-脂肪酸脱氢酶基因转基因大豆
- 草菇基因工程育种研究
- 本研究采用基因工程技术,从多种食用菌中克隆了gpd启动子,从异源生物中克隆了目的基因抗冷冻蛋白基因（afp）和多功能纤维素酶基因（mfc）,采用多种转化方法把afp基因和mfc基因导入草菇细胞中,有目的地改良现有草菇菌株...
- 林俊芳郭丽琼王杰赵风云张凯
- 关键词：草菇基因工程启动子
- 文献传递
- 平菇产植酸酶菌株的筛选及植酸酶基因区域的克隆
- 2005年
- 从平菇(Pleurotus ostreatus)8个菌株中筛选出3株高产植酸酶菌株,并根据GenBank中植酸酶基因的保守区设计并合成一对特异性引物,以平菇菌丝的总DNA为模板,通过PCR扩增,获得了一条长约920bp的片段.DNA序列测定结果表明,该片段长度为919bp.采用blast进行序列比对,结果表明:该片段与曾报道的源于Tram etes pubescens的植酸酶phyA(GenBank Accession:AJ310700)基因相比较,其DNA序列同源性为93%.该片段含有3个内含子,含有植酸酶基因的活性位点保守序列(Actives-ite sequence)RHGARYPT.
- 刘世强郭丽琼林俊芳
- 关键词：平菇植酸酶PCR扩增
- 草菇ras启动子区域的克隆及其序列分析被引量：7
- 2004年
- 根据KajiwaraS[1]等报道的ras启动子的序列设计并合成一对特异引物,以草菇菌丝的总DNA为模板,通过PCR扩增,获得一条长约0.75kb片段。DNA序列测定结果表明,该片段长度为751bp。采用Blast软件和Promoterpredictions软件进行启动子序列结构分析,结果表明,该片段中243～293bp和539～589bp两区域为ras启动子的基础启动子区。在283bp和579bp处有两个转录起始位点,在244～247bp和292～295bp之间有2个TATAbox,在36～39bp、377～380bp、434～437bp和716～719bp之间有4个CAATbox。此外,该片段中还含有9个Gbox、12个Ibox、2个Pbox以及3个重要顺式作用元件:ABRE元件、WUN motif(基元)和HSE元件。
- 刘世强杨丽卿郭丽琼林俊芳
- 关键词：草菇克隆PCR扩增基因工程
