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江苏省自然科学基金(BK2005158)
作品数:
1
被引量:1
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相关作者:
祁泓
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章希炜
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章希炜
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邹君杰
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杨宏宇
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祁泓
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2008
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大鼠VEGF腺病毒基因转染系统的构建及鉴定
被引量:1
2008年
目的探讨构建携带大鼠血管内皮细胞生长因子(VEGF)的重组腺病毒载体方法,为后续的基因转染研究作准备。方法采用RT-PCR扩增的方法获取鼠源性的VEGF,并克隆入穿梭质粒pDC316。构建的质粒pDC316-VEGF经酶切及测序鉴定正确后,通过lipofectamine2000的介导与腺病毒包装质粒pBHGE3共转染至人胚肾细胞HEK293,经同源重组后获得携带鼠VEGF的重组腺病毒VDC316-VEGF。应用PCR鉴定重组腺病毒,空斑传代纯化病毒并反复冻融扩增病毒。以50%组织培养感染剂量法(TCID50)测定病毒滴度。结果PCR鉴定证实重组腺病毒含有鼠VEGF,病毒滴度为3×109pfu/mL。结论成功构建的携带大鼠VEGF的重组腺病毒载体能在HEK293细胞内扩增获得足够高的病毒滴度,可作为后续基因治疗研究工作中可靠的基因转染工具。
邹君杰
杨宏宇
祁泓
章希炜
关键词:
血管内皮生长因子
腺病毒载体
基因转染
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