国家自然科学基金(20876138)
- 作品数：3 被引量：5H指数：2
- 相关作者：姚善泾关怡新葛翔于洪巍黄寿锟更多>>
- 相关机构：浙江大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金浙江省科技计划项目更多>>
- 相关领域：化学工程生物学轻工技术与工程更多>>
- 巯基微球协助重组γ-猪肝酯酶包涵体体外复性被引量：2
- 2014年
- 猪肝酯酶(PLE)是一种广泛应用于光学活性醇或羧酸合成的水解酶。大肠杆菌异体表达为大规模生产猪肝酯酶γ同工酶提供了可能,但表达过程中会形成包涵体,需经体外重折叠恢复其生物活性。针对γ-PLE含二硫键的特点,制备了三种不同巯基负载量的功能聚合物微球SG-DTT(6.1μmol·g-1、25.2μmol·g-1和143.4μmol·g-1),将其应用于协助γ-PLE包涵体体外复性,并考察了微球浓度、pH、温度和尿素浓度对复性效果的影响。复性过程需要适宜的氧化还原环境,较高的巯基负载量微球协助复性效果较好,当γ-PLE浓度为1000μg·ml-1时,微球协助复性后γ-PLE的活性可达到1885 U·L-1,比对照组提高了72%。研究表明,巯基微球能有效促进二硫键的正确配对,阻止蛋白分子间的聚集,是一种新型高效的复性添加剂。
- 黄寿锟关怡新于洪巍姚善泾
- 关键词：生物分离蛋白质复性
- 重组亲环蛋白A的可溶性表达被引量：1
- 2010年
- 为获得高表达量的可溶亲环蛋白A(cyclophilin A,CypA),对重组CypA质粒表达和工程菌的培养过程进行研究.首先将pRSET-CypA质粒转入EscherichiacoliBL21菌株,获得表达CypA的重组工程菌;然后以2×YT为基本培养基,对培养基组成包括碳源、氮源和氨苄青霉素浓度进行优化,并考察接种量和诱导条件(诱导剂浓度、诱导时机、诱导后培养时间)等对目标蛋白表达量的影响.结果表明:通过控制培养温度和转速可大大减少CypA包涵体的量;以甘露醇为碳源能显著提高目标蛋白的表达量;优化的培养基组成为蛋白胨16 g?L-1,酵母提取物10 g?L-1,NaCl 5 g?L-1,甘露醇10 g?L-1,Amp50 mg?L-1;在对数生长期中期OD600为1.3时加入1 mmol?L-1IPTG诱导,然后在30℃、180 r?min-1条件下继续培养9 h收获菌体;优化后目标蛋白CypA产量为66.7 mg?L-1发酵液,与优化前相比提高了76.6%.
- 闫啸徐立仁关怡新姚善泾
- 关键词：可溶表达
- 温敏型聚合物PNIPA和P(NIPA-co-SA)的制备及其协助溶菌酶复性研究被引量：2
- 2010年
- 采用反相悬浮法合成了温敏型聚合物聚N-异丙基丙烯酰胺(PNIPA)凝胶及其与丙烯酸钠(SA)的共聚凝胶P(NIPA-co-SA),对凝胶的形态、粒径分布、表面特性以及温敏性能进行了考察,共单体丙烯酸钠的引入使得凝胶的最大溶胀倍率和低临界溶解温度(LCST)都有明显的提高。将两种凝胶用于目标蛋白溶菌酶的体外复性过程,考察了其协助复性的效果。结果表明:当蛋白浓度为250μg·mL-1时,加入80mg·mL-1PNIPA凝胶可使溶菌酶的活性回收率由稀释复性的51.3%提高到72.9%;加入120mg·mL-1P(NIPA-co-SA)共聚凝胶可使活性回收率达到71.5%。溶菌酶的浓度越高,与稀释复性相比凝胶协助复性的效果就越好。复性后凝胶可方便地分离回收,PNIPA凝胶重复使用6次后,溶菌酶的活性回收率仍高于稀释复性15%以上。
- 葛翔金佳钰关怡新姚善泾
- 关键词：聚N-异丙基丙烯酰胺丙烯酸钠溶菌酶
