国家自然科学基金(31060136)
- 作品数：7 被引量：38H指数：3
- 相关作者：黄瑾杜瑞平高民张兴夫王春艳更多>>
- 相关机构：石河子大学内蒙古农牧业科学院内蒙古农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学更多>>
- Ubiquitin真核表达载体构建及在293T细胞中的表达被引量：1
- 2014年
- 为构建泛素分子pcDNA3.1-Myc-ubiquitin真核表达载体,实现其在293T细胞中表达。采用人工合成ubiquitin基因序列并加入c-Myc标签序列及EcoRⅠ和BamHⅠ酶切位点的方法,克隆至pcDNA3.1真核表达载体中。重组表达质粒经PCR和测序鉴定正确后,脂质体法转染入293T细胞。Western blot和间接免疫荧光法分析重组质粒在细胞中的蛋白表达及定位情况。菌落PCR及测序等分析结果显示:成功构建了pcDNA3.1-Myc-ubiquitin真核表达载体。免疫荧光和Western-Blot结果显示:Myc-ubiquitin重组表达质粒在293T细胞中获得高效表达且蛋白定位于胞浆。由此可知,成功构建pcDNA3.1-Myc-ubiquitin融合表达载体并在293T细胞中高效表达,为课题组进一步探讨与泛素化修饰相关的neuritin的作用机制及功能奠定基础。
- 郑艳汪海燕王旭晖黄瑾
- 关键词：UBIQUITINWESTERNBLOT亚细胞定位
- 催乳素和瘦素对奶牛乳腺上皮细胞乳蛋白及乳蛋白合成信号通路关键因子基因表达的影响被引量：7
- 2015年
- 在奶牛乳腺上皮细胞原代培养条件下研究了催乳素（prolactin）和瘦素（leptin）对主要乳蛋白与乳蛋白合成信号通路关键因子基因表达的影响。采用胶原酶消化法进行乳腺上皮细胞原代培养,并通过细胞形态观察、生长曲线测定及特异性基因表达对所培养细胞进行鉴定。试验分为4个处理,瘦素浓度均为100 ng/m L,催乳素浓度分别为0、0.1、1.0、10.0μg/m L,每个处理6个重复。首先采用噻唑蓝（MTT）法测定了催乳素和瘦素对奶牛乳腺上皮细胞增殖的影响,然后采用实时定量PCR测定了主要乳蛋白[α-酪蛋白、β-酪蛋白、κ-酪蛋白、β-乳球蛋白（β-LGB）]及Janus激酶2（JAK2）、信号转导和转录激活子5（STAT5）、哺乳动物雷帕霉素靶分子（mTOR）信号分子基因表达量。结果表明,瘦素一定浓度（100 ng/m L）基础上,与0μg/m L催乳素处理相比：0.1和1.0μg/m L催乳素对乳腺上皮细胞有显著的促增殖作用（P〈0.05）;0.1与10.0μg/m L的催乳素均显著降低了αs1-酪蛋白、αs2-酪蛋白、β-酪蛋白、β-LGB的基因表达量（P〈0.05）;而1.0μg/m L催乳素处理对αs1-酪蛋白、κ-酪蛋白、β-LGB均有显著的促进表达效应（P〈0.05）;各催乳素添加处理均显著促进了JAK2基因的表达（P〈0.05）,而对STAT5和mTOR基因表达只有1.0μg/m L催乳素处理有显著促进效应（P〈0.05）。结果提示,培养液含瘦素100 ng/m L基础上,催乳素对乳蛋白及信号通路关键因子基因表达有促进作用,但浓度限制在一定范围（0.1～1.0μg/m L）,过高或过低都会呈现抑制效应。瘦素100 ng/m L与催乳素1.0μg/m L对部分乳蛋白基因及乳蛋白合成相关基因表达有显著的促进作用,且通过调控信号转导因子JAK2、STAT5与mTOR基因表达,从而影响乳蛋白基因的表达。
- 杜瑞平王春艳张兴夫高民
- 关键词：催乳素瘦素奶牛乳腺上皮细胞
- Neuralized siRNA表达载体的构建及鉴定
- 2013年
- 目的构建Neuralized siRNA干扰载体并观察其对细胞中Neuralized表达水平的影响。方法化学合成靶向Neuralized的短发夹寡核苷酸序列,与线性化pGPU6/Neo质粒退火连接。酶切后测序鉴定正确,转染入HEK293细胞。利用Western blot和间接免疫荧光技术分析Neuralized siRNA载体对细胞中Neuralized表达及其定位的影响。结果 Neuralized siRNA干扰载体经酶切及测序分析表明,目的核苷酸序列成功插入预计位点且序列正确;Neuralized siRNA干扰载体转染HEK293细胞后,Western blot检测显示,Neuralized siRNA干扰载体明显降低细胞中Neuralized蛋白表达;间接免疫荧光显示,转染4种Neuralized siRNA均能使定位于细胞膜上的Nneuralized蛋白的荧光强度变暗。结论 Neuralized siRNA干扰载体成功构建,且能明显抑制细胞中Neuralized的表达。
- 朱美意单莉娅郑艳郝慧鑫黄瑾
- 关键词：SIRNA干扰
- 瘦素及其生理功能概述被引量：24
- 2012年
- 瘦素是脂肪细胞分泌的一种细胞因子,其分布广泛,在调节机体能量平衡、维持动物正常的发情周期、促进免疫、提高乳蛋白含量和防治人类的心血管疾病等生理、病理多方面发挥着重要的作用。本文综述了瘦素及其受体的结构和特征、瘦素的主要生理功能及其在细胞中的信号转导途径。
- 王春艳杜瑞平张兴夫高民
- 关键词：瘦素生殖泌乳信号转导
- Leptin对奶牛乳腺上皮细胞主要乳蛋白基因表达的影响被引量：2
- 2013年
- 本试验旨在研究不同处理浓度Leptin对奶牛乳腺上皮细胞中主要乳蛋白基因表达的影响。分别在有催乳素(PRL)(1μg/mL,+)和无PRL(0μg/mL,-)条件下进行,均以无Leptin组为对照组,10、100、1 000 ng/mLLeptin组为处理组。采用荧光定量PCR技术测定奶牛乳腺细胞中α-酪蛋白(α-CN)、β-酪蛋白(β-CN)和β-乳球蛋白(β-LGB)的基因表达。结果表明:无PRL条件下,Leptin未促进、甚至抑制奶牛乳腺上皮细胞中α-CN和β-CN基因的表达;有PRL条件下,Leptin极显著促进二者表达(P<0.001),以100 ng/mL处理组效果最显著;无论有、无PRL,Leptin均促进β-LGB基因的表达,但有PRL条件下,1 000 ng/mL处理组显著抑制β-LGB基因表达(P<0.001)。结果显示,有PRL条件下,Leptin促进奶牛乳腺上皮细胞主要乳蛋白基因的表达。
- 王春艳杜瑞平高民张兴夫孙康玉
- 关键词：LEPTIN乳腺上皮细胞乳蛋白基因表达奶牛
- Neuritin siRNA表达载体的构建及对细胞中Neuritin表达的影响被引量：1
- 2012年
- 为构建neuritin siRNA干扰载体并观察对细胞中neuritin表达水平的影响。采用化学合成法获取靶向neu-ritin的短发夹寡核苷酸序列,与线性化pGPU6/Neo质粒退火连接。转化后获取的neuritin siRNA经酶切及测序鉴定正确后,转染293T细胞。Western-Blot和间接免疫荧光分析观察构建的neuritin siRNA载体对细胞中neu-ritin表达及其定位的影响。neuritin siRNA干扰载体经酶切及测序分析的结果显示,目的核苷酸序列成功插入了预计位点且序列完全正确。neuritin siRNA干扰载体转染293T细胞后,Western-Blot检测显示,neuritin siRNA干扰载体明显降低了细胞中neuritin基因的蛋白表达;间接免疫荧光结果显示,4种neuritin siRNA明显减弱了定位于细胞膜上的neuritin蛋白的荧光强度(其中neuritin siRNA4的抑制效果最为明显)。由此可知,neuritin siRNA干扰载体成功构建,且能明显抑制细胞中neuritin的表达。
- 熊安英张云华朱美意单莉娅郑艳郝慧星黄瑾
- 关键词：NEURITINRNA干扰
- Neuritin在胃癌中的表达水平及意义被引量：3
- 2014年
- 目的：了解Neuritin在胃癌中的表达情况，探讨Neuritin表达与胃癌发生、发展的相关性。方法收集2010～2013年在石河子大学第一附属医院切除胃癌组织标本的患者58例，利用免疫组织化学法检测胃癌、癌旁正常胃组织中Neuritin的表达水平的差异。结果免疫组织化学法结果显示Neuritin在胃癌组织中阳性率为96．55％（56/58），在癌旁正常组织中阳性率为94．83％（55/58），两组比较差异无统计学意义（P＞0．05）；Neuritin在胃癌组织中强阳性率为82．76％（48/58），在癌旁正常组织中强阳性率为15．52％（9/58），两组比较差异有统计学意义（P＜0．05）。Neuritin的表达与患者性别、年龄、TNM 分期、浸润深度、淋巴结转移、分化程度、病理学类型及远处转移无相关性（均 P＞0．05）。结论 Neuritin在胃癌组织与癌旁正常组织中的表达水平存在差异，Neuritin在胃癌组织中存在高表达。
- 李维嘉钟晨王锦国牛少雄牛建华李永康黄瑾
- 关键词：胃癌免疫组织化学
