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建立大鼠肝动脉插管途径的方法学研究被引量：12: 2007年; 目的研究并完善直接经胃十二指肠动脉向大鼠肝脏灌注药物或细胞悬液的方法。方法直视下经大鼠胃十二指肠动脉行肝动脉插管并注入药物或细胞悬液。结果SD大鼠52只,47只存活且术后恢复良好,4只死亡,1只插管未能成功。死亡原因可能为血管受损、肝脏损伤、麻醉意外和术后感染等。死亡原因在操作技术熟练以及加强术后护理后可以避免。结论大鼠胃十二指肠动脉插管进行肝动脉灌注的方法简单、容易掌握、成功率高,适用于研究药物或细胞悬液经肝动脉灌注对肝脏的作用。; 许卫国杨建勇李鹤平陈伟庄文权; 关键词：肝动脉插管

临床分离革兰阴性菌整合子研究被引量：4: 2009年; 目的了解临床分离革兰阴性菌整合子的产生情况及整合子在细菌耐药中的作用。方法E实验测定细菌对11种抗生素及抗生素复合制剂的最低抑菌浓度,PCR扩增三种整合酶基因及I型整合子的可变区,并对可变区的扩增产物进行克隆、测序。结果16株革兰阴性菌中,6株含I型整合子,所含基因盒主要是dfr/dhf及aadA基因盒。结论整合子在不同革兰阴性菌中广泛存在,与细菌的多重耐药尤其是对氨基糖苷类抗生素的耐药密切相关。; 姚芬黄源春陈淑贞钱元恕; 关键词：整合子革兰阴性菌耐药

肺炎克雷伯菌产ESBLs基因型分析被引量：12: 2006年; 目的分析我院临床分离的肺炎克雷伯菌产ESBLs基因型,为指导临床合理用药提供依据。方法用琼脂稀释法检测10种抗菌药物对已确定为产ESBLs肺炎克雷伯菌的MIC,分别用TEM、SHV、CTX-M、OXA通用引物进行PCR扩增、产物克隆测序分析。结果83株产ESBLs肺炎克雷伯菌中,产TEM型75株,SHV型41株,CTX-M型25株,OXA型9株。其中,同时产3种酶有13株,占15．7%；同时产2种酶有59株,占71．1%；仅11株产单1种酶,占13．2%。而9株同时产TEM、SHV和CTX-M型,测序结果为CTX-M-3,TEM-1及多种SHV型(SHV-12、SHV-28)。药敏结果表明,同时产2或3种酶的菌株比产单1种酶的菌株耐药性更严重。结论所分离产ESBLs肺炎克雷伯菌主要为TEM、SHV、CTX-M、OXA型,且同时存在产2～3种酶,应引起临床高度重视。; 陈淑贞石蓉林姚芬蔡应木钱元恕; 关键词：肺炎克雷伯菌超广谱Β内酰胺酶 TEM-1 CTX-M-3 SHV

产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌临床菌株耐药表型与基因型被引量：12: 2007年; 目的调查临床分离鉴定的产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯菌的耐药表型与基因型的关系。方法以琼脂稀释法测定67株产ESBLs肺炎克雷伯菌对11种抗菌药物的MIC;应用PCR扩增其SHV、TEM和CTX-M型β-内酰胺酶编码基因,并对部分菌株的PCR产物进行克隆测序以确定其基因亚型。结果67株除未检出对亚胺培南耐药株外,对其他10种抗菌药物的耐药率在10.45%～89.55%,多重耐药率为74.63%;其中60株对氨基糖苷类耐药株和44株对β-内酰胺类耐药株的交叉耐药率各为88.33%和40.91%;67株SHV、TEM和CTX-M基因型检出率分别为91.04%、56.72%、28.36%,对其中7株克隆测序发现存在SHV-12、TEM-1及CTX-M-3基因亚型。结论67株产ESBLs肺炎克雷伯菌对除亚胺培南以外的大多数抗菌药物,呈现明显的多重耐药和交叉耐药,其中7株同时产SHV-12和CTX-M-3型超广谱和TEM-1型广谱β-内酰胺酶。; 石蓉林陈淑贞蔡应木刘幸平钱元恕; 关键词：肺炎克雷伯菌产超广谱Β-内酰胺酶表型基因型

肺炎克雷伯杆菌对小鼠中性粒细胞表达IL-1β和TNF-α的影响: 2005年; 目的观察肺炎克雷伯杆菌(Klebsiellapneumoniae,Kle.p)感染对小鼠中性粒细胞细胞因子表达的影响。方法以热灭活的Kle.p感染小鼠肺部建立急性肺炎模型,分离并纯化中性粒细胞(PMN),用RT-PCR、Westernblotting、ELISA等方法检测PMN中TNF-α和IL-1β的表达改变。结果Kle.p感染促进了早期小鼠中性粒细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-1β(IL-1β)的mRNA表达及分泌,TNF-αmRNA表达在感染6h最高,12h后降低;IL-1β的mRNA表达在感染12h最强;24h后两者表达均减弱,但仍显著强于对照组。Westernblotting结果显示,感染6h后TNF-α、IL-1β的蛋白表达量最高,24h后表达明显减少。ELISA结果显示,TNF-α分泌量在感染后6h最高,24h后明显降低,但仍较对照组高;IL-1β分泌量峰值在感染12h后出现。结论TNF-α可能主要参与小鼠感染热灭活Kle.p早期的PMN免疫防御功能;而IL-1β则主要参与感染中后期的PMN免疫防御功能。; 宋卉钱元恕董红梅; 关键词：肺炎克雷伯杆菌中性粒细胞细胞因子

汕头地区产CTX-M型ESBLs肺炎克雷伯菌分析: 2006年; 目的了解汕头地区产CTX-M型ESBLs肺炎克雷伯菌的情况。方法用通用引物blaCTX-M对已确定为产ESBLs的肺炎克雷伯菌进行PCR扩增、脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析,检测其对常见抗菌药物的耐药性。结果本地区CTX-M型ESBLs肺炎克雷伯菌检出率为30.1%(25/83),标本来源主要为痰液(24株);分布的临床科室为新生儿科、呼吸内科、神经外科、神经内科、儿科、外科ICU、心血管内科及普外科。与其它基因型同时存在较普遍。药敏结果表明对头孢噻肟、头孢曲松、头孢吡肟、氨曲南、阿米卡星、环丙沙星的敏感率分别为32.0%、4.0%、56.0%、36.0%、12.0%、48.0%,对头孢他啶、哌拉西林/三唑巴坦耐药率分别达56.0%和44.0%。随机将8株产CTX-M型ESBLs的肺炎克雷伯菌作PFGE分析,结果显示2株为相同的PFGE型,其它为不相关的PFGE型。结论产CTX-M型ESBLs肺炎克雷伯菌广泛分布于临床各科室,绝大多数菌株来自不同克隆株;多种基因型ESBLs的存在提高了它对抗生素的耐药水平。加强对产ESBLs细菌的检测及分子流行病学研究,对控制院内感染的流行十分重要。; 陈淑贞石蓉林姚芬蔡应木钱元恕; 关键词：超广谱Β-内酰胺酶耐药

多重耐药肺炎克雷伯菌Kp1503的ESBLs基因型分析被引量：1: 2006年; 目的:了解广东汕头临床分离的产ESBLs肺炎克雷伯菌Kp1503株的耐药表型与基因亚型。方法:以琼脂稀释法测定Kp1503株对12种抗菌药物的MIC;设计TEM、SHV和CTX-M型全编码基因特异性引物,用聚合酶链反应(PCR)扩增获得其β-内酰胺酶编码基因,分别克隆入pMD18-T载体后测定其核苷酸序列,分析其基因亚型。结果:Kp1503株为多重耐药株,除对亚胺培南和环丙沙星敏感外,对庆大霉素、阿米卡星、四环素、头孢唑林、头孢他啶、头孢噻肟、头孢曲松、头孢吡肟、氨曲南、哌拉西林/三唑巴坦均耐药;其所携带的三种β-内酰胺酶基因序列分别与GenBank中TEM-1、SHV-12及CTX-M-3型编码基因序列的同源性为100%。结论:汕头地区存在同时产SHV-12、CTX-M-3型超广谱β-内酰胺酶及TEM-1型广谱β-内酰胺酶的多重耐药肺炎克雷伯菌。; 石蓉林陈淑贞钱元恕令狐苏; 关键词：肺炎克雷伯菌 ESBLS 多重耐药表型基因型

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广东省自然科学基金(021222)