目的探讨合成端粒酶逆转录酶(hTERT)基因及端粒酶RNA(hTR)的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对皮肤T细胞淋巴瘤(CTCL)细胞株Hut78端粒酶活性的影响。方法采用体外转录法分别合成两条hTERT—siRNA及hTR—siRNA。采用siRNA直接处理细胞裂解液及磷酸钙共沉淀法将siRNA转染入Hut78细胞两种处理方式,应用端粒酶重复序列扩增聚合酶链反应(TRAP—PCR) 及聚丙烯酰胺凝胶电泳银染检测端粒酶活性的变化。结果体外转录法能高效合成siRNA,产量达 22．4 μg／40μL siRNA合成体系。经250 ng siRNA直接处理细胞裂解液后,可高效降低端粒酶的活性,抑制率达87％左右。30 ng siRNA转染细胞36 h后,可降低端粒酶活性20％左右,而250 ng siRNA可降低 75％左右。结论体外转录法能高效、快速、大量合成siRNA,针对hTERT及hTR基因的siRNA可明显降低Hut78细胞株的端粒酶活性。
目的:研究紫杉醇对皮肤T细胞淋巴瘤(cutaneous T cell lymphoma,CTCL)Hut78细胞株的生长抑制及诱导凋亡作用,并探讨其诱导凋亡作用的机制。方法:将紫杉醇按不同浓度、不同作用时间分别处理Hut78细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定Hut78细胞的生长抑制率,端粒酶重复序列扩增及酶联免疫吸附法(TRAP-PCR-ELISA)检测端粒酶活性的变化,采用形态学观察和流式细胞仪检测其诱导Hut78细胞凋亡的情况。结果:紫杉醇明显下调端粒酶活性表达,对Hut78细胞具有生长抑制及诱导凋亡的作用,且呈时间依赖和剂量依赖性。表现为G2/M期阻滞,出现典型的凋亡细胞特征,流式细胞仪检测可见明显的凋亡峰。结论:紫杉醇能下调端粒酶的活性,诱导细胞凋亡是其发挥抗癌作用的机制之一。
