采用绿色荧光蛋白(GFP)作为报告基因,用酵母细胞构建环境雌激素(EEH)的评价体系,可敏感、快速、方便地筛选出EEH化合物。通过分子生物学技术,将GFP基因插入到pM P 206/ERE启动子CYC 1的下游,用GFP取代L ac Z基因,并转化于酵母细胞。DNA测序发现ERE-CYC 1-GFP框架正确。对转化子进行PCR鉴定,发现有雌激素受体基因(hER cDNA)和GFP基因特异条带,说明hER cDNA和GFP已重组于酵母细胞。荧光显微镜下发现大量的绿色荧光颗粒,表明GFP基因在酵母细胞中成功表达。酵母细胞经不同浓度雌二醇作用后,与GFP表达量有剂量效应关系。与其他酵母评价体系相比,以GFP为报告基因评价EEH不需要破坏细胞壁,也不需要底物,可在96孔板中完成,这为高通量筛选EEH化合物奠定了基础。
为建立环境雌激素的酵母评价体系,将人工合成的雌激素效应元件插入pM P 206质粒的上游,并将该质粒转入人雌激素受体基因重组酵母细胞,使L acZ基因置于雌激素的调控之下,以构建可用于评价环境雌激素的酵母细胞。结果表明:经DNA测序发现pM P 206/ERE-L acZ报告质粒DNA框架正确,对转化子进行PCR鉴定,发现有雌激素受体基因和pM P 206/ERE-L acZ报告质粒的特异性条带,说明雌激素受体基因和受雌激素调控的L acZ报告基因已重组于酵母细胞,从而证明以L acZ为报告基因的环境雌激素酵母评价细胞重组成功。
